全 文 ： °2°≤同时测定苦黄注射液中 w种
大黄蒽醌类成分含量
吴永江 o陈建军 o程翼宇 3
k浙江大学 药学院 中药科学与工程学系 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要 目的 }建立同时测定苦黄注射液中大黄素 !大黄酸 !大黄酚和大黄素甲醚 w种大黄蒽醌类成分含量的
反相高效液相色谱分析方法 ∀方法 }采用汉邦 ¬¦«µ²¶³«¨µ≤t{柱 o流动相组成为 }t h醋酸水溶液 o
}含 t h醋酸的
{s h乙腈水溶液 o梯度洗脱 o流速 s1{ °#°¬±p t o柱温 vx ε o检测波长 uxw ±° o以外标法定量 ∀结果 }苦黄注射液中 w
种蒽醌类成分的平均加样回收率分别为大黄酸 |{1| h !大黄素 tss1x h !大黄酚 tsu1x h和大黄素甲醚 ||1s h o线性
范围分别为大黄酸 s1s{z x ∗ t1zx Λªo大黄素 s1s{u x ∗ t1yx Λªo大黄酚 s1tx| ∗ v1tz Λª和大黄素甲醚 s1sxu x ∗ t1sx
Λª∀结论 }本法准确可靠 o重现性好 o结果稳定 o适合于苦黄注射液中这 w种蒽醌含量的分析 ∀
≈关键词 反相高效液相色谱法 ~苦黄注射液 ~蒽醌类成分 ~中药
≈中图分类号 u{v ~ u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswltt2tswt2sw
≈收稿日期 ussv2sv2tx
≈基金项目 国家重点基础研究发展规划项目k|zv计划l资助
kt|||s|wwsxl
≈通讯作者 3程翼宇 oר¯ }ksxztl {z|xuxs| o∞2°¤¬¯}¦«¨ ±ª¼¼
½∏1 §¨∏1¦±
苦黄注射液为中药复方静脉注射液 o属国家中
药新药 o由5伤寒论6中的茵陈蒿汤去栀子 o加苦参 !
柴胡和大青叶而成 o具有清热利湿 !疏肝退黄的功
能 o主治湿热黄疸 ∀方中大黄为主药 o而蒽醌类成分
为其主要有效成分 o它们具有利胆退黄 !保肝护肝的
作用≈t2w o所以测定苦黄注射液中的蒽醌类成分含量
是苦黄注射液质量控制的重要内容之一 ∀原质量标
准≈x 中用分光光度法测定其中的总蒽醌含量 o但没
有测定其中每种蒽醌成分的含量 ∀为了更好地控制
该制剂的质量 o有必要建立一种测定其中多种大黄
蒽醌的含量分析方法 ∀
目前测定蒽醌类成分含量的文献报道很多≈y2| o
但尚未见苦黄注射液中多种蒽醌类成分含量同时测
定的文献报道 ∀本研究在参考已有文献的基础上 o
建立了同时测定苦黄注射液中大黄酸 !大黄素 !大黄
酚和大黄素甲醚等 w种主要蒽醌类成分含量的高效
液相色谱法 o为改进和提高苦黄注射液的质量控制
标准提供了方法学基础 ∀
1 仪器和试剂
ª¬¯¨ ±·ttss型高效液相色谱仪 o配四元梯度泵 !
在线脱气机 !自动进样器 !柱温箱 !⁄⁄检测器和
≤«¨ °≥·¤·¬²±色谱工作站 ~大黄酸 !大黄素 !大黄酚和
大黄素甲醚对照品k中国药品生物制品检定所l o苦
黄注射液样品k常熟雷允上制药有限公司l ~乙腈为
色谱纯k µ¨¦®公司l o娃哈哈纯净水k市售l o其余试
剂均为分析纯 ∀
2 实验方法与结果
211 色谱分析条件 汉邦 ¬¦«µ²¶³«¨µ≤t{色谱柱
kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l ~流动相 }水 k含 t h
¦l o
}乙腈2水k{sΒus o含 t h ¦l ~线性洗脱梯
度 }s ∗ tx °¬±oyx h
∗ tss h
~tx ∗ vs °¬±otss h
~
流速 s1{ °#°¬±pt ~柱温 vx ε ~检测波长 uxw ±°∀
在上述色谱条件下 ow种待测大黄蒽醌标准溶
液 !苦黄注射液和阴性对照的色谱图见图 t ∀由图
可知 ow种大黄蒽醌与杂质完全分离 ∀
图 t 对照品 !供试品及阴性对照色谱图
1对照品 ~
1供试品 ~≤1阴性对照
t1 大黄酸 ~u1 大黄素 ~v1 大黄酚 ~w1 大黄素甲醚
212 标准曲线制备 精密称取一定量大黄酸 !大黄
素 !大黄酚和大黄素甲醚对照品 o用初始流动相在
ts °容量瓶里配制成混合溶液 o含量分别为 s1stz
#twst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| o¶¶∏¨ tt
²√¨ °¥¨µoussw
x os1sty x os1svt z os1sts x °ª#°pt o混合对照品溶
液经 s1wx Λ°滤膜过滤后 o分别取 x ots oux oxs otss
Λo注入液相色谱仪进行分析 ∀以各组分色谱峰面
积 Ψ为纵坐标 o进样量 ΞkΛªl为横坐标 o绘制标准
曲线 o结果见表 t ∀
表 t w种大黄蒽醌的标准曲线
对照品 回归方程 ρ 线性范围rΛª
大黄酸 Ψ x wxv1yxs Ξ p ty1{wz s1||| |{ s1s{z x ∗ t1zx
大黄素 Ψ w zty1zzw Ξ p ts1|vy s1||| || s1s{u x ∗ t1yx
大黄酚 Ψ y x|x1{|x Ξ n tt1su| s1||| || s1tx| ∗ v1tz
大黄素甲醚 Ψ v ywx1tyz Ξ p z1{tz s1||| |{ s1sxu x ∗ t1sx
213 供试品溶液制备与分析 精密量取苦黄注射
液 x °o加入比例为 t }v的盐酸和冰醋酸的混酸 u
°和石油醚kys ∗ |s ε ltss °o置于 zs ε 水浴中
加热 u «o分离石油醚层 o再分别用 vs °石油醚萃
取 v次至近无色 ∀合并石油醚液 o浓缩至干 o用初始
流动相转移至 ts °容量瓶中并定容至刻度 o摇匀 o
作为供试品溶液 ∀
色谱分析时 o供试品溶液经 s1wx Λ°有机膜滤
过后进行分析 o根据外标法测定样品含量 ∀
214 方法专属性试验 按苦黄注射液处方比例 o依
照其生产工艺路线制备不含大黄的阴性试样 o最后
所得溶液定容至 ux °∀取该阴性试样注入色谱
仪 o色谱分析结果见图 t≤ o在与对照品相同保留时
间处没有检出色谱峰 o表明其他组分不干扰测定 o方
法专属性高 o选择性好 ∀
215 精密度试验 取供试品溶液 o在测定条件下进
样 us Λo重复进样 x次 o计算大黄酸 !大黄素 !大黄
酚和大黄素甲醚色谱峰面积的 ≥⁄分别为 u1s h o
s1x{ h ot1u h和 u1t h o表明精密度良好 ∀
216 供试品溶液稳定性试验 取供试品溶液分别
在 t ou ov §进行分析 o测定各组分的峰面积 o ≥⁄分
别为 s1{u h ot1z h ot1| h与 t1w h o表明供试品溶液
在 v §内稳定 ∀
217 重复性试验 取批号为 sttsuxt的苦黄注射
液 x份 o分别制备供试品溶液 o按前述方法测定 o大
黄酸 !大黄素 !大黄酚和大黄素甲醚含量的 ≥⁄分
别为 v1x h ot1z h ot1w h ot1t h o结果较满意 ∀
218 加样回收率试验 取已知含量的苦黄注射液
k批号为 sttsuxtlx份 o每份 x °o分别准确加入大
黄酸 xu1x Λª!大黄素 tvu1s Λª!大黄酚 tx{1x Λª!大
黄素甲醚 wu1s Λª o制备供试品溶液 o计算加样回收
率 o结果见表 u ∀
表 u 加样回收率试验结果
对照品
原有量
r˪
加入量
r˪
测得量
r˪
回收率
r h
平均值
r h
≥⁄
r h
大黄酸 u|1zv xu1xs {s1|| |z1yw
u|1zv xu1xs z{1vt |u1xv
u|1zv xu1xs {u1{x tst1u |{1| w1t
u|1zv xu1xs {v1xy tsu1x
u|1zv xu1xs {u1xu tss1y
大黄素 ttv1v tvu1s uw{1z tsu1y
ttv1v tvu1s uwz1x tst1z
ttv1v tvu1s uw{1u tsu1u tss1x u1z
ttv1v tvu1s uwx1w tss1t
ttv1v tvu1s uws1t |y1sy
大黄酚 tu|1s tx{1x u|y1t tsx1w
tu|1s tx{1x u|x1z tsx1u
tu|1s tx{1x u|w1z tsw1x tsu1x v1w
tu|1s tx{1x u{y1w ||1vs
tu|1s tx{1x u{w1x |{1tt
大黄素甲醚 uy1vt wu1ss yz1|y ||1tu
uy1vt wu1ss yy1zx |y1u|
uy1vt wu1ss yx1sz |u1u| ||1s w1w
uy1vt wu1ss y{1zw tst1s
uy1vt wu1ss y|1zw tsv1w
219 样品分析
取批号为 susuuxt osttuu{t o||stszu 苦黄注射
液 o按 213制备样品 o平行 v份 o供试品溶液经 s1wx
Λ°有机膜滤过后 o直接进样 ux Λ进行分析 o采用
外标法定量 o测定结果见表 v ∀
3 讨论
大黄作为一味可用于治疗多种疾病的中药 o其
有效成分主要为蒽醌类化合物 o包括游离蒽醌和结
合蒽醌两类 ∀由于是水提醇沉工艺 o故在苦黄注射
液中 o游离的蒽醌含量很少 o很难检测到 o所以为了
能测定其中蒽醌的含量 o在测定前需要水解 ∀本实
验在参考原质量标准的基础上 o对水解条件进行了
选择 ∀
表 v 样品分析结果k ≅ tsp u °ª#°pt oν vl
批号 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚
susuuxt t1s| t1|s u1yy s1xtu
sttuu{t s1y{s u1uz u1{y s1xx{
||stszu s1y{w u1vx u1vs s1zt{
首先比较了氯仿 !乙醚 !醋酸乙酯和石油醚 w种
溶剂对蒽醌的提取效率 ∀结果 o石油醚作为提取溶
剂时 o测得的蒽醌含量最高 o而用乙醚提取时最低 o
故本文选择石油醚为提取溶剂 ∀
其次 o对水解的酸度进行了考察 o采用了不同比
例的盐酸和冰醋酸的混酸 o比例分别为 tΒts otΒ{ otΒ
x otΒw otΒv otΒu o结果发现比例为 tΒv时所测得的蒽
醌含量最高 o再增加酸度 o含量反而降低了 o见图 u ∀
#uwst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| o¶¶∏¨ tt
²√¨ °¥¨µoussw
这是由于大黄酚和大黄素甲醚对酸不太稳定 o酸度
太高使两者分解≈ts o导致测定结果降低 ∀
图 u 水解酸度对大黄蒽醌含量测定的影响
t1大黄酸 ~u1 大黄素甲醚 ~v1 大黄素 ~w1 大黄酚 ~
x1w物质总和k图 v同l
本研究还对水解时间进行了考察 o通过对水解
以后的样品进行分析可知 otus °¬±时水解基本完
全 otus °¬±和 t{s °¬±两时间点上的蒽醌含量已无
明显变化 o如图 v ∀
图 v 水解时间对大黄蒽醌含量测定的影响
水 !热 !³ 等都可以影响蒽醌类物质的稳定
性≈tt2tv o主要是发生氧化还原反应 o这些反应可以
使蒽醌类物质发生降解或者转化 ∀本实验在制样过
程中由于加酸 !加热 o可能会使某些物质发生转化 o
另外 o供试样品制备需要较多步骤 o这也会产生操作
误差 o因而导致个别成分的重现性和回收率的 ≥⁄
偏大 ∀
4 结论
本实验所建立的大黄素 !大黄酸 !大黄酚和大黄
素甲醚含量同时测定方法专属性好 o回收率高 o分析
时间较短 o重现性好 o可以为完善苦黄注射液质量标
准提供方法学参考 ∀
≈参考文献
≈t 鲁祥明 o吴化敏 1 大黄的临床应用及药理浅析 1 中医药信息 o
t||z otwkvl }t{1
≈u 张希恩 o王利华 1 大黄保肝利胆作用的药理与临床 1 中医药研
究 ot||x okwl }xy1
≈v ¬¨2½¬o ÷¬¤²2¶«¨ ±ªo÷ ¤¬2µ²±ªo ετ αλ1 «¨¬±¬±«¬¥¬·¶ ¬¯√ µ¨
©¬¥µ²¶¬¶¬±§∏¦¨§¥¼ ¦¤µ¥²± ·¨·µ¤¦«¯²µ¬§¨ ¬± µ¤·¶1 Αχτα Πηαρµαχολ Σιν o
ussu ouvk{l }zv|1
≈w 黄兆胜 o王宗伟 1大黄素基原及药理作用研究 1 国外医学#中
医中药分册 ot||z ot|kxl }|1
≈x 纪德宝 o王永玉 1 苦黄注射液质量标准研究 1 中成药 ot||y ot{
kvl }|1
≈y ⁄²½¤± ⁄o¶¶¤§¬≠1 ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ¶¬±µ«∏¥¤µ¥µ²²·¶o
§²¦®©¯²º µ¨¶¤±§¶¨±±¤¯¨ ¤√¨ ¶¥¼ ±²µ°2³«¤¶¨ «¬ª« ³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§
¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼1 Ταλαντα ot||x owukyl }{yt1
≈z ¬∏≤ o«∏° o¬∏ ≤1≤²°³∏·¨µ2¤¬§¨§§¨ √¨ ²¯³°¨ ±·²©¤«¬ª«2³¨µ2
©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦ °¨ ·«²§©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²© «¼2
§µ²¬¼¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ §¨µ¬√¤·¬√ ¶¨¬± ≤«¬±¨ ¶¨ «¨µ¥ ° §¨¬¦¬±¨ µ«∏¥¤µ¥1 ϑ
Χηροµατογρα Αot||| o{xz }tyz1
≈{ ≥ ÷¬¤²2¼∏o≠«∏²2¥¬±1 ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¤¦·¬√¨ ¦²°³²±¨ ±·¶
¬± «∏¥¤µ¥¤±§¶·∏§¼ ²©·«¨¬µ«¼§µ²³«²¥¬¦¬·¼ ¥¼ °¬¦¨¯¯¤µ¨¯ ¦¨·µ²®¬±¨ ·¬¦
¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼1 Βιοοργ Μεδ Χηεµ Λεττ oussv otv }ytz1
≈| 姚仲青 1°≤法同时测定黄连上青丸中大黄素 !大黄酚 !及大
黄素甲醚的含量 1 中草药 ousst ovuk{l }yy|1
≈ts 于 超 o兰红梅 o王 宇 1°≤ 法测定不同产地决明子中五
种蒽醌类化合物 1 基层中药杂志 oussu otykul }{1
≈tt 何盛琪 o章新生 o欧润妹 o等 1 不同提取方法对大黄游离蒽醌
含量及其抑菌活性影响的研究 1 中国药学杂志 ousst ovykzl }
w{v1
≈tu 苏子仁 o吴碱中 1 大黄在提取精制工艺中的化学成分变化研
究k ´l大黄素的湿热降解机理探讨 1 药物分析杂志 ot||{ ot{
kul }{v1
≈tv 苏子仁 o曾元儿 1 大黄煎煮过程的化学变化初探 1 中国中药
杂志 ot||| ouwkxl }u|t1
Σιµ υλτανεουσ δετερµινατιον οφ w αντηραθυινονεσιν Κυηυανγ
ινϕεχτιον βψ ΡΠ2ΗΠΛΧ
• ≠²±ª2¬¤±ªo≤∞¬¤±2∏±o≤∞ ≠¬2¼∏
( ∆επαρτµεντ οφ Χηινεσε Μεδιχινε Σχιενχε ανδ Ενγινεερινγ , Χολλεγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨ √¨¯²³¤ ±¨ º «¬ª«2³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦° ·¨«²§©²µ¶¬°∏¯·¤±¨ ²∏¶ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²±
#vwst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| o¶¶∏¨ tt
²√¨ °¥¨µoussw
²©w ¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ¶¬± ∏«∏¤±ª¬±¨¦·¬²±1 Μετηοδ : ׫¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¶¨³¤µ¤·¬²± º¤¶³¨µ©²µ° §¨²± ¤¬¦«µ²¶³«¨µ≤t{ ¦²¯∏°± kw1y °° ≅
uxs °° ox Λ° ol o ¬¯±¨ ¤µªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²± ²© k≤v≤Βu tΒtssl ¤±§
k≤v≤ΒuΒ≤v≤ tΒusΒ{sl º¤¶∏¶¨§1 ׫¨
©¯²º µ¤·¨ º¤¶s1{ °#°¬±p t ¤±§¦²¯∏°±·¨°³¨µ¤·∏µ¨ º¤¶¶¨·¤·vx ε 1 ׫¨ ∂ §¨·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«º¤¶¶¨·¤·uxw ±°1 Ρεσυλτ : ׫¨ µ¨¦²√ µ¨2
¬¨¶²©µ«¨¬±o °¨²§¬±o¦«µ¼¶²³«¤±²¯ ¤±§³«¼¶¦¬²± º µ¨¨ |{1| h otss1x h otsu1x h ¤±§||1s h oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼1 ׫¨¬µ¯¬±¨ ¤µµ¤±ª¨¶º µ¨¨ s1s{z
x ∗ t1zx Λª©²µµ«¨¬±os1s{u x ∗ t1yx Λª©²µ °¨²§¬±os1tx| ∗ v1tz Λª©²µ¦«µ¼¶²³«¤±²¯ ¤±§s1sxu x ∗ t1sx Λª©²µ³«¼¶¦¬²±oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼1
Χονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§º¤¶¤¦¦∏µ¤·¨oµ¨³¨ ¤·¤¥¯¨¤±§¶∏¬·¤¥¯¨·² §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ¦²±·¨±·¶²©w ¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ¶¬± ∏«∏¤±ª¬±¨¦·¬²±1
[ Κεψ ωορδσ] °2°≤ ~∏«∏¤±ª¬±¦·¬²±~¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ~×≤
≈责任编辑 袁桂京
雪莲注射液 °≤指纹图谱研究
苗爱东t 3 o孙殿甲u o彭 燕v o朱国强w o王本富v o胡 辉v
kt1 军事医学科学院 放射医学研究所 o北京 tss{xs ~
u1 新疆医科大学 o新疆 乌鲁木齐 {vssxw ~
v1中国人民解放军第 wzw医院 o新疆 乌鲁木齐 {vsstt ~
w1新疆中药厂 o新疆 乌鲁木齐 {vssssl
≈摘要 目的 }研究雪莲注射液的 °≤ 指纹图谱测定方法 ∀方法 }以紫丁香苷为对照品 o应用 °≤ o色谱柱
⁄¬¤°²±¶¬¯× ≤t{kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l o流动相甲醇2t h冰醋酸k线性梯度洗脱l o柱温 vs ε o检测波长 uzs ±° o分析
时间 ys °¬±o流速 t1s °#°¬±p t ∀结果 }标示出雪莲注射液的 tt个特征指纹峰 ∀结论 }该方法准确 !重复性好 o为雪
莲注射液的指纹图谱质量控制提供了依据 ∀
≈关键词 雪莲注射液 ~指纹图谱 ~°≤
≈中图分类号 u{v ~ u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswltt2tsww2sv
≈收稿日期 ussw2sv2ty
≈基金项目 国家科技部西部开发专项kusss2st2sx2sul
≈通讯作者 3 苗爱东 oר¯ }kstsly{ut{zx| okstslyy|vtwuv o∞2
°¤¬¯}°¬¤²¤¬§²±ª ¶¬±¤1¦²°
雪莲注射液由天山雪莲花 Σαυσσυρεα ινϖολυχρατα
¤µ1 ·¨¬µ1 经提取 !精制而成的注射液 o属5卫生部
药品标准6收载的制剂≈t ∀具有消炎镇痛 !消肿 o活
血化瘀的作用 o临床上用于急慢性风湿关节炎 !类风
湿关节炎 o疗效肯定 ∀目前 o关于其质量控制和分析
方法的报道主要是定性鉴别和比色法测定总黄酮的
含量 o对其指纹图谱的研究未见报道 ∀本实验采用
°≤研究了雪莲注射液的指纹图谱质控技术 ∀
1 仪器与试药
111 仪器
高效液相色谱仪 p zsss型 o包括 p ztss双
泵 op zwss紫外可见检测器 op zvss柱温箱k日本
日立公司l ~ • p usss色谱工作站k南京千谱软件
公司l ~×⁄p w型离心机k上海安亭科学仪器厂l ~
≤≥ƒ p uxs p v 超声波清洗器k济宁超声电子仪器
厂l ∀
112 试药
甲醇k美国 ×∞⁄ o色谱纯l o其余试剂为分析
纯 ∀紫丁香苷对照品k中国药品生物制品检定所 o批
号 tttxzw2ussustl o雪莲花对照药材k中国药品生物
制品检定所 o批号 tutusx2ststl o雪莲注射液k新疆
中药厂提供 ott批次 o批号 sustst osustsu osustsv o
susust osusvst o susvsu o susvsv o susvsw o suswst o
susxst osus|stl ∀
2 方法与结果
211 试验条件
色谱柱 }⁄¬¤°²±¶¬¯× ≤t{ kw1y °° ≅ uxs °° ox
Λ° o北京迪马科技公司l ~检测波长 uzs ±° ~柱温 vs
ε ~甲醇2t h 冰醋酸线性梯度洗脱 o程序为 s ∗ ys
#wwst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| o¶¶∏¨ tt
²√¨ °¥¨µoussw