全 文 ：浙江农业学报 A 。 za A g 八 〔、 a lr u r a e zh ej i`, ,睽 e ,了5 15 3 ( 3 ) : 12 7一 13 2 , 19 9 0
两种茄科蔬菜病毒检测方法的研究
林瑞芬 余舰斌 金登迪 叶 栋 (浙江省农 业科学院病毒实验室 , 杭州 3 1 002 1)
摘 要 : 本文研究应 用 三种酶联免疫吸附测定法 ( E LI S A ) , 检测为害茄科蔬菜的两种主要病
毒 , 即烟草花叶病毒 ( T M V ) 和黄瓜花叶病毒 ( C M V ) 。 其中双抗体夹心法 旧 A S一 E L I S A ) 和
A 蛋 白间接夹心 法 ( p A S一 F L I s A ) 可 检测 T M v 提纯 病毒 0 . 1月g / m l 与 o刀 l声` g / rn l , e M v
0
.
2拜g / m l 与 0 . 0 0 8召g / m l 。 田 间病株样品检测结果与生物测定对照结果相符 。 亲和素 生物素复
合物间接夹心法 ( A B C 一 E LI S A ) 可检测 C M V 提纯病毒 住 0 0 16召g / m ! , 病烟汁为 l : 12 8 0 0 , 并
能检 测带毒蚜群 体内的病毒 。 此法 所用试剂的 工 作浓度为 , C M V 的兔抗血 清 ( R A V一 lg G )
5乒, g / m l , 鼠腹水抗体 (M A V一 A b ) l : 5 0 0 , 生物素化羊抗鼠 I g G ( b一 s A M G ) 一 : 2 0 0 0 , 亲和
素 与生物素化过氧化物酶复合试剂 ( A B C ) 1 : 3 0伙
关键词 : 烟草花叶病毒 ; 黄瓜花叶病毒 ; A 蛋白 ; 生物素 ; 亲和素
S t u d i e s o n m e t h o d s fo r d e t e e t i o n o f tw o S o l a n a c e o u s v e g e t a bl e v i r “ s e s : L i n r 滋fe n , Y u J i a n bi n , J i n d e n g d i
a n d Y e L i ( V lr ` , 5 l a 方` , r u z o ,几、、 , Z h刁 i a n g 月 e a de ,、 少, of 月g r i` 、 l z u r a l 、 `
·扮 n e e s , H a , ,g : h o u 了10 0 2 ]夕
A b s t r a e t : T h e P a p e r s t u d i e s o n t h r e e fo r m s o f e m z ym e一 l一n k e d lm m u n o s o r b e n d a s s a y ( E L IS A ) m e t li -
o d s t o d e t e e t tw o n l a in e a u s a l v i r u s e s o f 5 0 ]a n a e e o u s v e g e t a b l e v i r u s d a s e 七一s e s 、 一 e
.
t o b a e e o m o s a r e v i r u s
( T M V ) a n d c u e u m b e r m o s a l e v l r u s ( C M V )
.
T h e d 一r e e t d o u b le a n t i b o d y s a n d w j e h fo r m o f E L I S A
( D A S一 E L I S A ) a n d P r o t e l n A in d l r e e t s a m d w i e h E L IS A ( P A S一 E L I S A ) w e r e a b l e t o d e t e e t th e lo w -
e s t e o m e e n t r a t一o n s o f T M V P u r l if e d P r e P a r a t i o n a t 0
.
1声之g / m l , 0 . 0 11艺g / m l , r e s P e e t l v e ly . a n d t h a t o f
C M V P u r z if e d P r e P a r a t io n a t 0
.
2谈之g / m l , 0 . 0 0 8召g 八n l , r e s P e e t i v e ly . R e s u l t s o f d e t e e t i o n w i th E L I S A
m e t h o d s fo r if e ld v l r u s一 i n fe e t e d P l a n t s e o n fo r m e d t o th e r e s u l t s o f t }l e m w 一th b i o a s s a y A n e w s y s t e m o f
a v id i n一 b 盏o t一n一 p e r o x ld e a s e e o m p le x i n d i r e e t s a n d w i e h E L I S A ( A B C 一 E L I S A ) e n a b l e t o d e t e e 飞 t h e 、o w -
e s r e o m e e n t r a t一o n o f C M V P u r i if e d P r e P a r a t io n a t o刀0 1 6召g / m l a n d r h e h ig h e s t d l l u t l o ll o f C M V 一 I n
fe e t e d t o b a e c o s a P a t l : 12 8 0 0
.
W
o 水 i n g e o n e e n r r a t一o n o f r a b b l t a n t i s e r u n o f C M V ( R A V 一 I g G )
m o u s e a s e l t l c fl u id a n r l b ld y (M A V一八b ) , b io t l n 一 l a be l e d s h e e p a n t一b o d y o f m o u s e ( b一 S A M G ) a n d
a v l d 一n 一 b io t l n一 p e r o x l d a s e c o m p le x ( A B C ) u s e d fo r A B C 一 E L I S A m e t h o d w e r e s 声`g / ; n l l : 5 0 0 d ilu -
t i o n
,
l : 2 0 0 0 d z l u t l o n a n d l : 30 0 d ilu t i o n
.
K e y w o r d s : T M V
.
C M V
.
P r o t e z n A
.
b l o t l n
,
a v xd l n
近年来的研究报道 〔 ’ 一4 〕 , 我国茄科蔬菜
病 毒 病 的 主 要 毒 源 有烟 草 花 叶 病 毒
( T M V ) 和黄瓜花叶病毒 ( C M V ) 。 因此茄
科蔬菜的抗性育种需从 多抗的水平加以考
虑 。 鉴于田间病毒种群组成和致病性的分化
收稿 日期 : 19 9 1二0 4一 1 1
与生态条件的改变密切相关 , 故常年进行毒
源消长的监测是抗病育种的基础 。 目前毒源
检测和抗性鉴定仍沿用鉴别寄主法 。 本文所
述 两 种病 毒 的 E LI S A 检测 法 , 国内报
道 〔 5〕 仅涉及病毒的鉴定 , 将生物素 、 亲和
素引人 E LI SA 检测 C M V 也未见报道 。 本
试验研究 T M V 、 C M V 的 3 种 E LI S A 检
《浙江农业学报》 第 3卷 门 9 9 D
测法 , 为病株样品的快速检侧和提高抗性鉴
定水平 , 提供了高灵敏度的手段 。
材料与方法
(一 ) 材料
L 毒 源 供试毒源 T M V ( 87 一 15) 为 O
株系 (杭州 ) , C M V ( 8 6一 4 8 ) 系杭州番茄
分离 株 。 分别 以大 黄金烟 ( N . t a b ac u m
C V ) 和 新 西 烟 ( N . t a b a e u n l ( ’ V
.X an hit
一nc ) 为繁殖寄主 , 接种后 ’ r M v 经
25 一30 天 、 C M V 经 14 天采 收毒源 , 置
一 3 0℃低温下保存备用 。
2
.试 剂 葡萄球菌 A 蛋 自 、 酶联 A 蛋
白 、 生物素化羊抗鼠 I g G 伪一 S A M G ) 、 亲
和 素 与生 物 素 化 过 氧 化物 酶 复合 试剂
(A v , d i n 一 B i o t i n一 P e r o x i d a s e C o m p l e x 简称
A B C ) 和 A B C 稀释剂由上海生物制品所与
荣盛试剂厂提供 。 T M V 、 C M V 的兔抗血
清及其 酶标 抗体 、 C M V 小鼠 腹水 抗体
(M A V一 A b) 均系自制 。
3
.
E L IS A 系 统 其缓冲液的配制见文献
〔6〕 。
(二 ) 方法
L病 毒 提 纯 C M V 提 纯 参 照 毋谷
穗 凶 、 rF an ck l 〔 ’ 。少法略作修改 。 病叶与 2
倍量 0 . sm ol 含 s m m ol 乙 二胺四 乙酸二钠
( E D T A ) p H 6
.
5 的柠檬酸缓冲液和 0 . 5%
( v / v) 疏基乙酸匀浆 , 加等量 v( / v)
H e C I: 疏 : 乳化 。 离 心 取 土清 液加 8%
(w / v) 聚乙二醇 ( P E G ) 、 住Zm ol 氯化钠
( N a C )I
,
4℃ 下搅拌至溶 , 并静置数小时 。
离 心 取 沉 淀 , 用 s m m o l 含 0 . 5m m o l
E D T A
、
p H g力 的硼酸缓冲液 (下称 B )B
和 l % T irt o n X 一 10 悬浮 。 离心取 上清 , 以
10 5 0 0 0 9 9 0m i n 超离 2 次 , 沉淀以 B B 悬
浮 。 上清经 6 5 0 0 0 9 2 10m i n 10一4 0 ;0 的蔗
糖梯度离心 。 收集病毒层 , 经超离沉淀浓缩
获病毒制剂 。 T M V 的提纯参考 A . A s se h n
和 M . Z a i t li n 的方法 〔 7〕 , 并加以简化 。 即
以 o . l m ol 磷酸缓冲液 与 l % 琉基乙醇抽提
病 叶 , 8%正 丁 醇 澄 清病 汁 , 4% P E G 、
0
.
2m o lN a C I沉淀病毒 , 经 90 0 0 0 9 70m in Z
次超离和 10 一40 % 蔗糖梯 度 6 5 0 0 0 9 离心
1 30 m in
。 提纯病毒液以 2%磷钨酸 ( P T A )
负染 , 电镜 ( O p t o n EM 10 9 ) 观察形态 ,
紫外光分光光度计 (岛津 2 10 A ) 测定吸收
光谱 ; 枯斑鉴另l]寄主测定侵染性 , 以 r 解其
纯度和活性 。
2
.抗血清制 备 选用 日本大耳兔和成年杂
交小白鼠为免疫动物 。 以全佐剂乳化抗原腿
肌 、 脚垫和纯抗原耳静脉交替免疫试验兔 ;
以全佐剂 叻口青 、 链霉素 ) 乳化抗原皮下和
纯抗原尾静脉免疫小白鼠 。 免疫兔子从颈动
脉采血 ; 小白鼠腹腔注射腹水瘤 ( 51 80)
细胞后 , 从腹腔抽取腹水抗体 。 以琼脂双扩
散法或小试管微量沉淀法测定抗体滴度 。
3
.酶 标抗体制 备 抗血清先以相应的健烟
提取液吸收 , 然后以 (N H 4 ) 2 5 0 4 常规盐析
和二乙氨乙基纤维素 (D E A )E 层析法分离免
疫球蛋白 I g G 。 用戊二醛二步法交联辣根过
氧化物酶 (上海东风试剂厂 R Z 3 . 0) , 测定
酶 标抗体 在 4 03 n m 、 2 80 n m 波长的 吸收
值 , 以计算其克分子比值和酶的标记率 。
4
.
E L IS A 测 定程序 以 4 0 孔聚乙烯微孔
板为固相载体 。
双 抗 体 夹 心 法 (D A S一E LI S A ) ,见 文 献
〔8〕
A 蛋 白 夹 心 法 (P A S一E LI S A )见 文 献
〔9 〕
亲 和 素 一生 物 素 复合 物 夹 心 法 ( A B C
一 E L is A )包被 R A V一 gI G 一封板一待测样品
一 小鼠腹水抗体一 b一 S A M G ~ A B C ~ 底物
~ 终止反应 一 , 读 A 值 。 各层加液量均 为
0
.
l m l
。 包被层 4℃过夜 。 加底物前其余各
层均以 37 ℃温育 Z h 。 各层温育后均洗板 3
次 。 反应终止后立即在 D G 3 O2 2 酶标检测
仪 4 9 0 n m 波长 读 A 值 。 以阳性反应与阴性
反应之比 ( P / N ) 值 > 2 . 0 为检测植物样品
的阳性判别标堆
两种茄科蔬菜病毒检测方法的研究
结果与分析
(一 ) 特异抗体
以蔗糖梯度离心法提纯的病毒抗原 , 其
A 2 6 0 l l m / A 2 80 n rn 的 比 值 C M V 为 1 . 7 ,
T M v 为 1 19 , 与 文 献 〔 ’ o , , ’〕 一 致 :用
2% P T A 负染 ,在电镜下可见均一的 C M V
或 T M V 病毒质粒 二生物接种具侵染活性 。
免疫家兔获抗血清的滴度 C M V 为 :1 2 56
(双 扩 散 法 ) , T M V 为 1 : 2 5 6 0
(试管沉淀法 ) , C M v 小白鼠腹水抗体的滴度
为 1 : 6 4 用 戊二醛二 步法制备的 T M V 、
C M V 酶标抗体克分子 比值约 1 .住酶的标记
率约 50 % 。
(二 ) E LI S A 反应条件
按 3 种 E LI S A 的反应程序 , 分别测定并
选择各层反应试剂的最适工作浓度为 :
D A S一 E LI S A 包被抗体 gI G 浓度 , T M V
8 /, g / m l
,
C M V 4 / , g / m l ; 酶 标 抗 体 ,
T M V I : 4 0 0 ( 5 1` g / m l )
,
C M V I : 16 0 0
(9召g / m l ) 。
P A S一 E L IS A 预 包 A 蛋 白 浓 度
5雌 / nl 。 色 被 抗 体 和 检 测 抗 体 浓 度 ,
T M V 粗抗血清 l : 10 0 0 或 Ig G S拜g / m l ;
e M v 粗抗血清 l : 2 0 0 或 Ig G 20 # g / m l 。
为简化操作并考虑到检测田间样品的需要 ,
本试验包被抗体和检测抗体采用同一浓度 。
酶联 A 蛋 白工作浓度 , 测定 T M V 为 :l
2 0 0
, 测定 C M V 为 l : 2 0 0一 l : 4 0 0 。
A B C 一E LI S A 包被抗体浓度 C M V R A V
一 Ig G 为 5户g / In ;l 小白鼠腹水抗体稀释度
l : 16 0 0
, 检 测 蚜 虫 时 用 l : 5 0 0 0
b一 S A M G 为 1 : 2 0 0 0 、 A B C 为 1 : 3 00 。
但 应予 以注 意 的是 配制 b一 S A M G 的加
T w e e n 一2 0 的磷酸盐缓冲液 ( P B S T ) 应含
10 % (
v / v) 小牛血清 ; 配 制 A B C 需用
A B C 稀释剂和含 10 % v( / v) 小牛血清 ,
另 用含 10 % v( / v) 小牛血清的 P B S T 封板 ,
才能获得满意结果 。
(三 ) 三种 E LI s A 法的特异性与灵敏度
1
.特 异性 病毒的血清学检测方法是基于
病毒抗血清的特异性 , 所以评价一种检测方
法的实用性首要的因素是特异性强弱 。 本试
验以 D A S一 E L IS A 和 P A S一 E LI SA 系统的
最佳测定条件 , 以同源病毒为对照 , 测定了
儿种常见的蔬菜病毒和 C M V 、 T M V 的主
要蔬菜寄主的无病毒样品 。 结果表明 (表
l )
,
C M V
、
T M V 与 同源病毒和有血清学
关系的长叶车前草花叶病毒 ( RI M V) A
值大于 0 . 30 , 呈阳性反应认与异源病毒和
无毒蔬菜样品的 A 值为 住0 4 士 .0 02 , 呈阴
性反应 。
表 1 C M V T M V 抗体特异性的测定结果
T a b
.
l T h e d e t e e t i n g r e s u l t s o f C M V a n d T M V
a n t i s e r a m s P e e l e i ft i e s ( 19 8 9一 19 9 0 )
抗源类别 E LI S A A 值
A n t i g e n t y P e s E L I S A A v a lu e s
( 4 9 0 n m )
C M V T M V
同源病毒
H o m o l o g o u s
V l f l S
异源病毒
H e t e r o lo g o u s
V l r U S
无病毒样品
H e a l t h y
v e g e r a b l e
s a m P l e s
C 入I V
T M V
0
.
0 2
0
.
4 3
I
J任,、éǎ /l成Uj”,勺`, 、0n住l让
R IM V
T u M V
番茄
T o m a t o
甜椒
S w e e t P e P Pe r
茄子
E g g P l a n t
白菜
C址 n e s e e a b b a g e
烟草
T o b a e c o
0
.
4 0
0
.
0 1
0
,
0 6
0
.
0 6
0
.
( )8
0
t
0 3
0 0 2
2
.灵敏度 本试验对 T M V 、 C M V 的 几
种 E L sI A 法的灵敏度进行了对比测定 , 结
果 T M V 的 D A S一 E LI S A 与 P A S一 E LI SA
法 可 分 别检 测 提 纯病 毒 的 最低 浓 度 为
0
.
1尸g / m l 和 住01 尽g / m 仁 病 烟汁为 l :
2 56 0 和 1 : 10 0 0 0 。 C M V 的 D A S一
E L I S A
、
P A S一E L IS A 和 A B C一E LI S A 法
13 0 浙江农业学报 第 3 卷 ( 19 9 1)
竺( )
` 六 入、气 、 .、 _ .’ 、 ., . - , 气
1( )
饭、
、 l几仁
,
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` 一伙 。 ` -
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数 】
、
1〕奋Ic ` )
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图 1 检 侧 C M V 的三 种 E L is A 法灵敏度 的比 较
F ig
.
1 T h e e o m P a r l s o n o f s e n s i t一v i t 1e s fo r t h e d e t e c t i o n o f C M V w i t h th r e e E L I S A m e t h o d s
表 2
T a b
.
2
E L sI A 法测定田间病样的结果
E L I S A d e tec t i n g r e s u i r s o f if e l d v j r u s一 n fe c t e d P l a n t s ( 19 8 9一 19 9 0 )
方法
V i r U s&
M e th o d s
样品
S a m P le s
种类
S P e e i e s
番茄 T o m a t o
甜椒 S P
瓜类 M e lo n
番茄 T o m a t p
白菜类 C C
番茄 T o m a t p
白菜类 C C
甜椒 S P
数量
N 0
测定结果 D e z e e r jn g r e s u l r s
阳性反应
P o s i t lv e r e a t e t一。
数量 A 值
N o
.
A v a lu e s
阴性反应
N e g a t一v e
数 量
N O
.
!
`
e 比 C t l o fl
A 值
A 丫 a lu e s
一ù护八、、I
ù汇n文J尺
1l
r、飞ólC M V
D A S一 E L I S A
PA S一 E L I S A
0
.
3 7土 0 . 1 3
0
.
3 9土 0 . } 2
0
.
3 0士 0 0 8
0
.
2 7 士 0 . 1 1
,一O八
1
0一//O只气气今乙z-、、,1
T M V
P A S一 E L I S A
1 6
+ 索
( 72
.
7 )
1 5( 5 3
.
6 )
0 ( 0 )
] 3
+
( 7 2 2 )
4
十
( 2 3 5 )
0 (0 )
0 (0 )
0 (0 )
0
.
10 土 0 0 3
0
`
0 5 土 0 0 3
0
`
0 7
0
.
0 9 土 0 . 0 2
0
.
04 士 0 . 0 2
0
.
0 6 土 0 0 2
0
.
0 3土 0 t 0 1
0
.
0 5 土 0 . 0 1
, 表示生物测定阳性 “ + ’ 和阳性 “ 一 ” ` S h o w , n g b i o a s s a y o p o s」t i v e (+ ) a 〕l d n e g a t ,v e卜 ) r e a e t一o n
括号内的数据为阳性率% D a t a 一n b r a c k e t s a r e p o s l t l v e p e r e e n t a g e
S P 之 S w e e t P e P P e r C C ! e h l n e s e e a b b a g e
检测提纯病毒最低浓度依次为 0 . 2户g / m l、
0
.
0 0 8拜g / m l 和 0 . 0 0 16拜g / m l , 其 P / N 值
相应为 2 . 5 、 3 . 3 和 .5 ;0 病烟汁浓度依次为
l : 4 0 0
、
l : 3 20 0和 l : 12 8 0 0 , 其 P / N 值
为 2 . 0 、 2 . 0 和 2 . 4 (图 1 ) 。
(四 ) 病株样品测定结果
在用 E L is A 检测田间样品时 , 因样品层
可变性大 , 如病样中病毒浓度的差异或有血
清学关系的病毒复合感染等 , 都会使样品的
E L IS A 反应出现假阴性或假阳性 。 因此在
检测病样的试验 中设置 了生物学测定为对
照 。 C M V 的 D A S一 E L IS A 法检测 番茄 、
甜 椒 病 样 的 阳 性 率 分 别 为 72 7% 和
5 3
.
6% ; PA S一E L I S A 法检测番茄和 十字花
科 蔬 菜 病 样 的 阳 性 率 分 别 为 72 . 2% 和
23
,
5%
, 与生物学测定的结果相符 。 T M V
两种茄科蔬菜病毒检 J m方法的研究
表 3 A D S一 L EIs A 法测定不同抗性番茄病株的结果
品种
V ar le t一e s
抗性
Rf七5 ls r ib l l lt y
各病级测定的 A 值 (4 O 9n m)
A
’
V a lu e ( 4 0 9n m) o f e ae h d一s e as e dg r a de
0
.
3 5
6 0 0
0
.
3 1
0
.
4 9
0
.
4 9
3 0 9
l
,、Q,一`0…00G C R 2 3 7弓虽力米寿8 6 7 0 耐病 T o l e r a 一I t).戈病 S u s e e P t: b le耐病 T o l e 一遇 n t
`
2 个试验的平均数 . 每试验 3 次重复
* A v e r a g e s fr o m tw o e x p e r im e n t s w i th t r e e r e p l i e a t i o n s e a e h
·
表 4
T a b
.
4
C M V A B C 一 E L I S A 法测定蚜虫的结果
C M V A B C一 E L I S A d e t e e t i n g r e s u l t s o f a p h id s
( 19 9 0 )
蚜虫 及病毒
A P h l d s & v i r u s
样品 数量 E L IS A A 值
N o o f 〔 L I S A A
s a l n 口 l e s v a l一z e s ( 4 9 0 n l n )
0 2 0
, 与无毒桃蚜的 A 值 比值为 1 . 80 ; 与
带毒 T u M V 的菜蚜及无毒菜蚜的 A 值比值
均为 2 . 20 。 由此表 明 , A B C一 E LI S A 法可
用于检测 C M V 介体蚜群的带毒水平 。
桃蚜 M l : , , `、 尸〔· , 、“ u 。
带毒虫 V i ,习 l , fe r o 、一s ( C M v )
无毒虫 N o n v , r u l l fe r o t: s
菜蚜 B ,℃ 、 , z〔 ( , , 一: , 召 l , ,丫之.、 、 `。二 e
带毒虫 落; r 、` l夕e ,二` , ` 、 ( T u M V )
无毒虫 N ` , , , , 。 : ` Il/ e ,丫月 ,万
{:
0 2 0 士 ( ) 0 4
0 1 1 士 0 . 0 2
() 0 9 士 0 t 0 2
0 0 9 士 0 . 0 2
的 P A S一 E L IS A 法 测定番茄 、 甜椒和 }一字
花科蔬菜病样的结果也与生物学检测的结果
相符 (表 2 ) 。 别外 , 用 D A S一 E L IS A 法测
定接种 T M V I 株系的番茄品种资源的病株
样品 , 结果表明 , E LI S A 测定方法既可应
用于病样检测 , 又能检测出不同抗性番茄品
种和不同发病级别的病株的病毒含量的相对
差异 (表 3 ) 。
(五 ) 带毒蚜虫测定结果
以饲食在 C M v 病烟上的桃蚜 。 试〕: us
p二 .5l 二日 、 T u M v 病 油 菜 上 的 菜 蚜
( )B 二 飞介、 1’n e br lst 、 ic ae ) 和健康榨菜上的无
毒桃蚜 、 菜蚜 , 各取其中 20 头无翅蚜为一
样品单位 , 用 0 , 05 m ol 、 p H 7 . O 的磷酸缓冲
液匀浆 , 30 0 0 r p m I Om i n , 取上清液供试 。
以 C M V 的 A B C一 E L is A 法测定 , 结果
(表 4) 是 , 带毒 C M V 的桃蚜平均 A 值为
讨论
C M V
、
T M V 是为害茄科蔬菜的主要病
毒 。 因而就病害流行监测和杭病育种工作来
说 , 组建快速且适于大批量病样的血清学检
测技术 十分必要 。 本试验组建的 E LI SA 方
法灵敏度高 , 特异性强 , 为病害流行预测 、
抗性材料的筛选和抗源抗性水平的鉴定等多
方面的研究提供了有效的手段 。
血清学检测方法的灵敏度和特异性与所使
用的抗血清的效价高低及其特异性强弱密切
相关 。 C M V 的免疫原性较弱 , 病毒在寄主
体内的含量不高 , 病毒的提纯也较困难 。 在
本试验中 , 注意了适期采收毒源 , 粗提病毒
液再经 10一40 % ( w / v) 蔗糖梯度离心以
尽量减少病毒制剂 中的寄主成份 。 纯化的
C M V 采用免脚垫 、 腿肌和耳静脉交替注射
的免疫途径 , 从而获得 了较高效价的抗血
清 。
就方法而言 , D A S一 E L IS A 法的检测程
序简单 , 但要求制备纯化的抗体 gI G 和酶
标记抗体 。 P A S一 E LI S A 法和 A B C一 E LI S A
法的检测程序较繁 , 但是 , PA S 法借助于
A 蛋 白既能与抗血清 中的 gI G 的 F c 端结
合 , 又不影响 gI G 的 (F a b) : 端和抗原结
浙江农业学报 第 3卷 (19 9 1)
合 , 而且 A 蛋白本身又能为酶所标记的特
性 ; A B C 法则利用 了亲和素和生物素间有
强大的亲和力 , 并且它们本身都既能偶联抗
体 , 又能被酶所标记的特性 , 所以这两种方
法都不必制备纯化的抗体和酶标记抗体 。 另
外 , A B C 法 中 , 因为一分子亲和素蛋白能
给合 4 个生物素分子 , 用生物素标记的抗体
一般也没有未标记抗体的竟争而影响灵敏
度 , 所以它能达到 比 D A S 和 PA S 法更高
的检测灵敏度 , 为检测微量抗原提供 了新的
手段 。
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l a t e d P l a n t v l r u s e s b y E L I S A J
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V 一r o l
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M e t h o d s
13 : 1 2 1
编者语 : 我们经常听到有同志谈起或问及我国各种科技期刊所属的级别问题 , 现将国家
科委情报司宋培元同志在 《 中国科技期刊研究》 19 1年第 l 期 上发表的 “ 我国科技期刊
是怎样分级的? 爪介以转载 。
我国科技期刊是怎样分级的 ?
我国科技期刊按期刊的主管部门划分为全国性 期刊和地方性期刊 。 全国性期刊是指国务院所属各部 、
委 、 局 、 中国科学院 、 中国科协及全国性人民 团体主管的期刊 ; 地方性期刊是指省 、 自治区 、 直辖市各委 、
厅 、 局主管的期刊 必须 说明的 是 , 这种分级不是以期刊质量 、 学术 、 技术水平为划分依据 , 而是从 期刊的
行政管理机构来确定的 因此 , 不能说地方性期刊的质量 、 学术 、 技术水平低于全国性期刊 。 到 目前为止 ,
国家尚没有一 种从质量 、 学术 、 技术水平等方面为科技期刊定级的规定 为科技期刊的发展制订 一种从质
量 、 学术 、 技术水平等方面综合评价分级的规定或办法 , 是必要的 。 但这是一项非常细致 复杂 、 科学性很
强的工程 , 必须经过周密详尽的调查研究和学术论证 , 逐步开展和实施 (国家科委科技情 报司 宋培元 )