全 文 ：薄层扫描法测定香科属植物中 4种新克罗烷型二萜的含量
王　磊＊ , 罗淑荣 , 李广义
(中国医学科学院 、中国协和医科大学药物研究所 ,北京 100050)
摘要　目的:用薄层扫描法测定香科属植物中 4 种新克罗烷型二萜:teucvidin (I), 19-acetyl-teuspinin (II),
teusco rodonin(III), teupernin A(IV)。方法:样品经丙酮超声提取后 ,用 XAD-2 型大孔树脂去除色素;在高效硅胶薄
层板上点样后展开 ,展开剂为乙酸乙酯—正己烷(6∶5)。所得斑点用 Ehrlich 试剂显色 ,扫描测定。结果:各新克罗烷
型二萜的线性范围在 0.63 ～ 2.18 μg ,回收率为 92.4%～ 97.8%, 应用本法测定了香科属植物铁轴草 、庐山香科丙酮
浸膏中新克罗烷型二萜的含量。结论:本法简便易行 ,分析速度快 , 重现性好 ,可用于香科属植物中新克罗烷型二萜
的测定。为开发资源 ,评价药物质量 , 提供了科学依据。
关键词　薄层扫描法;香科属;新克罗烷型二萜;teucvidin;19-acetyl-teuspinin;teuscorodonin;teupernin A
　　香科属(Teucrium)植物为唇形科筋骨草亚科 ,
约100 种 ,广布于全球。我国约 18 种 , 药用有 6
种[ 1] 。其中铁轴草(Teucrium quadri farium)可清
热解毒 ,止痛;庐山香科(Teucrium pernyi)则用于
痢疾 ,白斑 ,外用跌打损伤[ 2] 。活性成分为新克罗
烷型二萜(neo-clerodane diterpenoids), 现代药理学
研究发现其具有昆虫拒食 、抗微生物和抗真菌的作
用[ 3] ,可望成为新一代的杀虫剂和新型消炎药 。但
有关其含量分析的资料较少 ,未见有单独的报道 。
为此 ,我们用薄层扫描法测定了香科属植物铁轴草 、
庐山香科丙酮浸膏中新克罗烷型二萜的含量 ,取得
了满意的结果 ,可为今后的研究提供参考。
材 料 与 方 法
仪器和药品 　薄层色谱扫描仪 Shimadzu CS-
930;高效硅胶薄层板 10 cm ×10 cm (E.Merck 公
司);微量毛细管 1 ,2 , 5μL (美国 Drummond);色谱
缸12 cm ×4 cm×10 cm;超声清洗机(无锡超声电
子设备厂);旋转蒸发器(中国科学院科龙仪器厂)。
标准品 teucvidin(I), 19-acetyl-teuspinin (II),
teuscorodonin(III)及 teupernin A (IV)及庐山香科
丙酮浸膏均由李广义提供;铁轴草由广西桂林雁山
中国科学院广西植物所孟丽珊老师采集并鉴定。
XAD-2型大孔树脂(Fluka Chemie 公司);对二
收稿日期:1999-07-05
＊Tel:(010)62557910 , Fax:(010)63017757 ,
E-mail:wanglei@public.fhnet.cn.net
甲氨基苯甲醛(AR ,北京化工厂);其他试剂规格均
为 AR级 。
薄层分离条件　吸取一定量混合标准品溶液和
两种植物的提取液 ,点于同一块高效薄层板上 ,展开
剂为乙酸乙酯-正己烷(6∶5),室温(25℃)下饱和
20 min ,直立上行展开至前沿 。取出薄层板 ,挥干溶
剂 ,用 5%对二甲氨基苯甲醛乙醇液浸板 ,吹干 ,浓
盐酸蒸气熏 10 min。待无酸味后再用液体石蜡—
正己烷(2∶1)溶液保护 , 50℃下放置 60 min 后 ,于
Shimadzu CS-930薄层扫描仪上 ,510 nm 处测定 ,狭
缝 0.1 mm×7 mm ,灵敏度:中 。
结 果
1　薄层色谱
按薄层分离条件项操作 , 4 种新克罗烷型二萜
可得到很好的分离 ,色谱图见图 1。
Fig 1 　HPTLC separat ion of T .pernyi and T .
quarifarium .Lane 1 , 3 , 5 , 7 and 9:mix ture of
standards (I.teucvidin;II.19-acetyl-teuspinin;
III.teusco rodonin;IV.teupernin A);Lane 2 , 4:
sample of T .pernyi;Lane 6 , 8:sample of T .
quarifarium .
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2　显色方法
新克罗烷型二萜化合物的共轭结构较少 ,如不
显色 ,紫外和可见光区内均无明显的吸收 ,无法进行
定量测定。但考虑其结构中的共性 ,均含有一个呋
喃环 ,使用专属显色剂 Ehrlich试剂(5%对二甲
氨基苯甲醛乙醇液)浸板 ,薄层板晾干后在浓盐酸蒸
气中熏 10 min ,所得斑点均为红色 ,颜色一致 ,可在
同一波长(510 nm)下测定。
为使显色后的斑点稳定 ,以液体石蜡—正己烷
(2∶1)溶液为保护剂 ,将薄层板涂层 ,使其与空气隔
绝 ,可使斑点稳定。
考察不同温度(40 , 50 , 60 , 100℃)、不同加热时
间(0 ,15 , 30 ,45 ,60 , 90 min)对显色后斑点强度及稳
定性的影响 ,结果在 50℃加热 60 min时斑点颜色最
强且稳定 。
3　线性范围 、稳定性及精密度
精密称取 4 种新克罗烷型二萜标准品:
teucvidin(I),19-acetyl-teuspinin(II), teuscorodonin
(III)及 teupernin A(IV)各 1.5 ～ 2.5 mg ,分别置 2
mL 量瓶中 ,用乙醇溶解并稀释至刻度 。取各溶液
50μL ,在一小样品管中混合均匀。吸取 2 , 4 , 6 , 8 ,
10μL ,点于同一块高效薄层板上 ,展开 ,显色 ,测定 。
以点样量(μg)为横坐标 ,斑点峰面积为纵坐标 ,绘制
标准曲线 ,得到 4条直线 ,回归方程及线性范围见表
1。
Tab 1　Calibration curves of the diterpenoids
Diterpenoid
Regression equation
(Y =area , X=μg) γ
Liner range
/μg
Teucvidin Y =264.5+2816.4X 0.9975 0.63～ 3.14
19-Acetyl-teuspinin Y =407+1104.7X 0.9953 0.38～ 1.90
Teuscorodonin Y =417.3+1984.1X 0.9998 0.47～ 2.18
Teupernin A Y =270.5+1022.9X 0.9961 0.42～ 2.08
吸取标准品混合液 5 μL 点样 ,展开 ,测定 。间
隔一定时间(10 ,20 , 30 ,40 ,50 ,60 ,80 , 100 ,120 min)
再次测定 , 其 RSD 分别为:I.1.4%;II.2.3%;
III.2.5%和 IV.3.8%。说明4种化合物经显色后
在 2 h 内稳定。
吸取标准品混合液 5 μL ,在同一块薄层板上平
行点样8次 ,展开 ,显色。其 RSD分别为:I.1.4%;
II.3.5%;III.2.1%和 IV.1.9%。在不同薄层板
(n =8)上 ,其 RSD 分别为:I.3.5%;II.4.6%;
III.4.0%和 IV.3.1%。
4　提取条件的选择
主要考察了铁轴草(全草 ,过 40目筛)的提取溶
剂 、提取方式以及超声时间对提取效率的影响。结
果以丙酮为提取溶剂 ,超声提取 3次 ,每次 30 min
条件最佳。
5　样品预处理
5.1　庐山香科　取浸膏50 mg ,精密称定 ,加丙酮1
mL超声使溶解 ,加于 5 g 预先处理的 XAD-2型大
孔树脂柱上[ 4] ,用蒸馏水 50 mL 和 50%乙醇溶液
25 mL 冲洗 ,弃去洗脱液 ,然后用无水乙醇 25 mL
洗脱 ,即为供试液 。
5.2　铁轴草　取全草粉末(40 目)0.5 g , 精密称
定 ,用丙酮超声提取3次 ,每次 30 min ,合并提取液 ,
浓缩 ,加于 5 g 预先处理的 XAD-2 型大孔树脂柱
上 ,以下操作同庐山香科。
6　测定方法
取上述供试液浓缩至干 ,以无水乙醇溶解 ,转移
至 1 mL 量瓶中 ,定容 。按上述薄层分离条件进行
分离测定 ,以外标法计算含量。
7　回收率
取铁轴草全草粉末(40目)和庐山香科丙酮浸
膏各 4份 ,精密称定 ,其中 3份加入适量的对照品溶
液 ,另 1份不加 ,依上法提取 、分离及测定 ,用外标法
计算回收率。在此薄层色谱条件下 ,铁轴草只测出
teucvidin , 庐山香科丙酮浸膏测出 teucvidin , 19-
acetyl-teuspinin和 teupernin A 的斑点 ,对检出的斑
点进行了回收率实验。其回收率在庐山香科丙酮浸
膏中 teucvidin 为 96.2%;19-acety l-teuspinin 为
92.4%;teupernin A 为 96.0%。铁轴草中 teucvidin
为 97.8%。结果见表 2。
Tab 2　Recovery of the diterpenoids of T.pernyi
and T .quadri farium (n =3)
Sample Diterpenoid
Amount
added
/μg
Amount
found
/μg
Recovery
/ %
T .pernyi Teucvidin 4.132 3.974 96.2
19-Acetyl-t euspinin 2.178 2.013 92.4
Teupernin A 2.088 2.004 96.0
T .quadr ifarium Teucvidin 4.132 4.042 97.8
8　样品测定
用本法对铁轴草(T .quadri farium)全草粉末
和庐山香科(T .pernyi)丙酮浸膏中新克罗烷型二
萜成分进行测定 ,结果见表 3。
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Tab 3　Determination of diterpenoid in samples
by HPTLCS
Diterpenoid
content/ %
T .quadr ifar ium T .pernyi
Teucvidin 0.38 4.10
19-Acetyl-t euspinin - 2.05
Teuscorodonin Trace -
Teupernin A - 2.54
-:not-detected.
讨 论
庐山香科丙酮浸膏和铁轴草提取液中含大量色
素 ,如不经处理 ,薄层展开时形成一条绿色色带 ,干
扰测定 ,故需预处理。比较了 XAD-2 型大孔树脂 、
硅胶 G和活性炭等物质去除色素的效果 ,以大孔树
脂最佳 。
薄层展开后 ,各斑点基本为规则的扁圆形 ,采用
线性扫描方式 ,分析速度快 ,所测各成分达基线分
离 。此法可推广应用于本属其他植物中新克罗烷型
二萜的测定 。
参 考 文 献
1　余传隆 ,黄泰康 , 丁志遵 , 等.中药辞海.第一卷.北京:中
国医药科技出版社 , 1993.1140
2　张惠源 ,张志英.中国中药资源志要.北京:科学出版社 ,
1994.1113 ～ 1114
3　朱元元 , 李广义.铁轴草二萜成分的化学研究.药学学
报 , 1993 , 28∶679
4　刘蓉 ,杨国华 , 李广义.血见愁化学成分的研究.中草药 ,
1994 , 25∶234
DETERMINATIONOF FOUR NEO-CLERODANE DITERPENOIDS
OF TEUCRIUM SPECIES BY HPTLC SCANNING
Wang Lei , Luo Shurong and Li Guangyi
(Inst itute of Materia Medica , Chinese Academy of Medical Sciences and
Peking Union Medical Col lege , Beijing 100050)
ABSTRACT　AIM:To establish a TLC scanning method for the separation and determinat ion of the four
neo-clerodane diterpenoids:teucvidin(I), 19-acety l-teuspinin (II), teuscorodonin (III)and teupernin A(IV)
in T .quadri farium and the acetone ext ract of T .pernyi from Teucrium species.METHODS:The sample
w as ex tracted with supersonic w aves w ith acetone.Then XAD-2 macroporous resin was used to remove the
pigment.EtOAc — n-hexane(6∶5)was used as developing solvent on the HPTLC silica gel plate.After that ,
the spots were identif ied by Ehrlich reagent and then determined with a Shimadzu CS-930 TLC scanner.
RESULTS:The calibrat ion curves were linear in the range of 0.63 ～ 2.18 μg for the four neo-clerodane
diterpenoids and the recoveries were 92.4%～ 97.8%.The method had been applied to the analy sis of tw o
plants.CONCLUSION:The method is simple , feasible , rapid and reproducible.It of fered a scientific basis for
seeking and utilizing botanic resources , and evaluating the quality of herb medicines.
KEY WORDS 　thin layer chromatography scanning;Teucrium species;neo-clerodane diterpenoids;
teucvidin;19-acety l-teuspinin;teusco rodonin;teupernin A
·296· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2000 , 35(4)∶294～ 296