全 文 ：收稿日期:2011-07-06
基金项目:国家“重大新药创新”科技重大专项资助项目(2011ZX09102 － 006 － 02)
作者简介:杨茜(1985-) ，女(汉族) ，辽宁沈阳人，硕士研究生，E-mail yangxi777@ yahoo． com． cn;张卫东(1966-) ，男
(汉族) ，山东济南人，教授，博士，主要从事中药及复方的药效物质基础、质量控制、体内代谢及创新中药的研究，
Tel． 021-81871248，E-mail wdzhang@ hotmail． com。
文章编号:1006-2858(2012)02-0116-05
HPLC法同时测定旋覆花属植物中
5 种倍半萜内酯成分的含量
杨 茜1，刘 慧1，何雅君2，苏 娟1，张卫东1
(1. 第二军医大学 药学院，上海 200433;2. 上海交通大学 药学院，上海 200240)
摘要:目的 建立同时测定旋覆花属植物中 5 种倍半萜内酯含量的方法。方法 采用 HPLC 法。色
谱柱为 Agilent Zorbax SB-C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为乙腈(A)-水(B) ，梯度洗脱，
A 相的含量体积分数随时间变化为 0 min 30%、20 min 40%、25 min 55%、40 min 65%、45 ～ 55 min
95%;流速 1. 2 mL·min －1;检测波长 205 nm;柱温 25 ℃。结果 5 种倍半萜内酯类化合物旋覆花次
内酯、1β-羟基-土木香内酯、ivangustin、japonicone A 及 inulanolide A 在 55 min内基线分离，其质量
浓度分别在 13. 4 ～ 402 mg·L －1、6. 53 ～ 196 mg·L －1、6. 85 ～ 206 mg·L －1、10. 4 ～ 312 mg·L －1、6. 65
～ 200 mg·L －1内与峰面积呈良好的线性关系，R2 分别为 0. 999 8、0. 999 8、0. 999 9、0. 999 8、0. 999
7。平均加样回收率分别为 99. 0%、97. 6%、99. 3%、97. 9%、100. 8%，RSD 分别为 1. 0%、0. 68%、
2. 1%、0. 97%、1. 9%。结论 该方法可用于旋覆花属植物中 5 种倍半萜内酯的含量测定;不同种旋
覆花属植物倍半萜内酯含量有显著差异。
关键词:旋覆花属;高效液相色谱法;倍半萜内酯;含量测定
中图分类号:R 917 文献标志码:A
旋覆花属(Inula)属于菊科(Compositae) ，该
属植物全世界约有 100 种，分布于欧洲、亚洲及非
洲，以地中海地区为主。我国有 20 余种和多种变
种，多为民间药用植物。本属多种植物常供药用，
如旋覆花干燥地上部分金沸草(Inulae Herba)具
有降气、消痰、止水等功效［1］。倍半萜内酯类成
分为本属植物的特征性成分［2］。近年来有文献
报道，倍半萜内酯奥索千里光碱及异土木香内酯
等具有抗肿瘤功效，1-O-乙酰旋覆花内酯可以抑
制血管平滑肌的炎症反应［3］。亦有文献报道倍
半萜内酯类化合物对一氧化氮(NO)的产生有抑
制作用［4 － 6］，此外，其还有抗氧化等作用［7 － 9］。有
文献对旋覆花属植物的指纹图谱进行研究［10］，但
对其中倍半萜内酯类化合物含量测定未有报道。
本文作者采用 HPLC 法同时测定旋覆花属植物中
5 种倍半萜内酯的含量，并将该方法应用于不同
产地的 14 个批次旋覆花属植物中这 5 种成分的
含量测定，为其质量评价提供可靠的依据。
1 仪器与材料
Agilent-1100 高效液相色谱仪(美国 Agilent
公司) ，KS5200H超声波清洗器(上海科导超声仪
器有限公司) ，BP211D 电子天平(德国 Sartorius
公司) ，Milli-Q50 SP 纯水系统(美国 Millipore 公
司)。乙腈(色谱纯，美国 Merck 公司) ，Milli-Q
水(美国 Millipore 公司) ，其他试剂(分析纯，市
售)。
实验收集旋覆花属植物共 14 批，其中 9 批由
本实验室分别采自安徽、西藏、云南、辽宁、湖北等
地，包括旋覆花(I． japonica)、线叶旋覆花(I． lin-
eariifolia)、湖北旋覆花(I． hupehensis)、锈毛旋覆
花(Inula hookeri)、滇南羊耳菊(Inula wissmanni-
ana)以及西藏旋覆花(Inula falconeri) ;5 批金沸
草饮片购自上海雷允上大药房等，批号分别为
10701024、 20090711、 20090507、 20090636、
20090519) ，均由第二军医大学药学院生药学教研
室张汉明教授鉴定。旋覆花次内酯、1β-羟基-土
第 29 卷 第 2 期
2 0 1 2 年 2 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 29 No. 2
Feb． 2012 p. 116
木香内酯、ivangustin、japonicone A、inulanolide A
标准品(自制，经 HPLC 峰面积归一化法测定纯
度质量分数均大于 98. 0%，化学结构式见图 1)。
Fig． 1 Structures of inulicin(1)，1β-hydroxyalantolactone(2)，ivangustin(3)，japonicone A(4)and inulanolide(5)
图 1 旋覆花次内酯(1)、1β-羟基-土木香内酯(2)、ivangustin(3)、japonicone A(4)和 inulanolide(5)的化学结构式
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相:A 为乙腈、B 为水，梯度
洗脱，A 相的含量体积分数随时间变化为 0 min
30%、20 min 40%、25 min 55%、40 min 65%、
45 ～ 55 min 95%;流速:1. 2 mL·min －1;检测波
长:205 nm;柱温:25 ℃;进样量:10 μL。在此色
谱条件下，5 个峰的理论塔板数均大于 3 000，各
组分色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1. 5。
对照品和样品 HPLC 图见图 2。
1—Inulicin;2—1β-Hydroxyalantolactone;3—Ivangustin;4—Japonicone A;5—Inulanolide A
Fig． 2 HPLC chromatograms of mixed reference substance(A)and Inulae Herba(B)
图 2 混合对照品(A)和金沸草提取物(B)的 HPLC色谱图
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照溶液的制备
分别 精 密 称 取 对 照 品 旋 覆 花 次 内 酯
8. 04 mg、1β-羟基-土木香内酯 3. 92 mg、ivangus-
tin 4. 12 mg、japonicone 6. 24 mg、inulanolide
4. 00 mg，分别置于 5 mL 量瓶中，用乙醇溶解并
稀释 至 刻 度，摇 匀，配 制 成 质 量 浓 度 为
1. 608 g·L －1旋覆花次内酯、0. 784 g·L －11β-羟基-
土 木 香 内 酯、0. 824 g · L －1 ivangustin、
1. 248 g·L －1 japonicone、0. 800 g·L －1 inulanolide
的对照储备液，于 4 ℃冰箱中保存。
2. 2. 2 供试溶液的制备
取药材粉末 1. 0 g，精密称定。置于 25 mL
量瓶中，加入体积分数为 80%乙醇 20 mL，超声
提取 1 h。取出放冷，用体积分数 80%乙醇稀释
至刻度，摇匀，经 0. 45 μm 微孔滤膜过滤后作为
供试溶液备用，于 4 ℃冰箱中保存。
711第 2 期 杨 茜等:HPLC 法同时测定旋覆花属植物中 5 种倍半萜内酯成分的含量
2. 3 线性关系考察
分别吸取质量浓度为 1. 608 g·L －1旋覆花次
内酯、0. 784 g· L －1 1β-羟 基-土 木 香 内 酯、
0. 824 g·L －1 ivangustin、1. 248 g·L －1 japonicone、
0. 800 g·L －1 inulanolide的对照储备液各2. 5 mL，
置于 10 mL 量瓶中，用体积分数 80%乙醇稀释至
刻度，分别制成质量浓度为 402 mg·L －1、
196 mg·L －1、206 mg · L －1、312 mg · L －1、
200 mg·L －1的对照溶液，逐级稀释，分别制成6 个
质量浓度梯度的对照溶液。对一系列稀释的标准
溶液进行测定。以信噪比(S /N)3 ∶ 1 计，确定各
物质的检测限;以信噪比(S /N)10 ∶ 1 计，确定他
们的定量限。分别吸取各对照溶液 10 μL，按
“2. 1”条色谱条件进样分析，记录各色谱峰面积。
以对照溶液质量浓度(ρ，mg·L －1)为横坐标，峰面
积的积分值(A)为纵坐标，绘制标准曲线，各对照
品的线性回归方程、检测限和定量限见表 1。
Table 1 Regressive equations，coefficient correlations，test ranges，LLOD and LLOQ of the 5 compounds
表 1 5 种化合物的回归方程、相关系数、检测范围、LLOD和 LLOQ值
Compound Regression equation R2 ρ(liner range)/(mg·L －1) m(LLOD)/ng m(LLOQ)/ng
Inulicin A = 9. 722ρ + 4. 371 0. 999 8 13. 4-402 8. 92 22. 3
1β-Hydroxyalantolactone A = 7. 814ρ + 8. 386 0. 999 8 6. 53-196 15. 2 43. 5
Ivangustin A = 8. 802ρ + 5. 192 0. 999 9 6. 87-206 11. 2 34. 3
Japonicone A A = 8. 984ρ + 7. 406 0. 999 8 10. 4-312 9. 82 26. 0
Inulanolide A A = 7. 828ρ + 2. 643 0. 999 7 6. 67-200 15. 8 44. 3
2. 4 精密度试验
吸取质量浓度为 1. 608 g·L －1旋覆花次内
酯、0. 784 g · L －1 1β-羟 基-土 木 香 内 酯、
0. 824 g·L －1 ivangustin、1. 248 g·L －1 japonicone
A、0. 800 g·L －1 inulanolide A 各 1 mL，置于同一
10 mL 的量瓶中，用体积分数 80%乙醇定容，配
成混合对照溶液，摇匀。按“2. 1”条色谱条件测
定，连续进样 6 次，测得峰面积，计算 RSD 分别为
旋覆花次内酯 0. 94%、1β-羟基-土木香内酯
1. 2%、ivangustin 0. 85%、japonicone A 0. 73%、
inulanolide A 1. 6%，表明仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验
取批号为 20090636 金沸草药材粉末约
1. 0 g，精密称定。按“2. 2. 2”条方法制备供试溶
液，室温放置，分别在 0、4、8、12、24、48 h 进样，按
“2. 1”条色谱条件测定。5 种倍半萜内酯在 48 h
内峰面积的积分值的 RSD 分别为:旋覆花次内酯
2. 2%、1β-羟基-土木香内酯 1. 3%、ivangustin
2. 6%、japonicone A 2. 7%、inulanolide A 3. 6%，
表明供试溶液在室温下 48 h内稳定。
2. 6 重复性试验
精密称定同一批号(20090636)的金沸草药
材粉末约 1. 0 g，平行称取 6 份。按“2. 2. 2”条方
法制备供试溶液，按“2. 1”条色谱条件进样分析，
测定峰面积，计算含量。测得 RSD 值分别为旋覆
花次内酯 1. 5%、1β-羟基-土木香内酯 1. 2%、
ivangustin 2. 0%、japonicone A 1. 7%、inulanolide
A 0. 93%，表明方法重复性良好。
2. 7 回收率试验
平行称取 9 份已知含量的金沸草药材粉末
(批号为 20090636) ，每份约 0. 5 g，平均分 3 组，
每组中分别加入质量浓度为 0. 402 g·L －1旋覆花
次内酯、0. 196 g·L －1 1β-羟基-土木香内酯、
0. 206 g·L －1 ivangustin、0. 312 g·L －1 japonicone
A、0. 200 g·L －1 inulanolide A 的对照溶液(每种分
别相当于供试品药材原有含量质量分数的 50%、
100%、150%)适量，按“2. 2. 2”条方法制备供试
溶液，按“2. 1”条色谱条件测定，计算回收率，结
果见表 2。
2. 8 供试品含量测定
取不同来源的药材粉末各约 1. 0 g，精密称
定。按“2. 2. 2”条方法制备供试溶液，在“2. 1”条
色谱条件下进行 HPLC 分析，结果见表 3。
3 讨论
3. 1 提取方法的选择
考察了渗漉、超声、回流 3 种提取方法。超声
提取法含量略高，考虑到操作的简便程度，提取效
率高，最后确定超声法提取。
3. 2 提取溶剂的选择
采用超声提取方法，分别考察了水、不同体积
分数的甲醇、乙醇等溶媒。结果表明体积分数为
80%的乙醇提取效率最高。
811 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 29 卷
Table 2 Results of recovery of the 5 compounds(n =3)
表 2 5 种化合物的回收率结果(n =3)
Compound moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% Mean recovery /% RSD /%
Inulicin 0. 664 8 0. 333 7 0. 980 5 98. 2
0. 670 5 0. 671 3 1. 324 0 98. 7 99. 0 1. 0
0. 681 3 1. 021 1. 704 0 100. 1
1β-Hydroxyalantolactone 0. 127 2 0. 0627 2 0. 186 9 98. 4
0. 128 6 0. 129 4 0. 251 0 97. 3 97. 6 0. 68
0. 129 5 0. 196 0 0. 316 4 97. 2
Ivangustin 0. 235 0 0. 117 2 0. 344 1 97. 7
0. 242 0 0. 241 0 0. 476 2 98. 6 99. 3 2. 1
0. 245 9 0. 370 8 0. 626 6 101. 6
Japonicone A 0. 212 4 0. 106 1 0. 311 8 97. 9
0. 216 3 0. 215 3 0. 418 7 97. 0 97. 9 0. 97
0. 221 2 0. 330 7 0. 545 8 98. 9
Inulanolide A 0. 121 1 0. 064 0 0. 183 1 98. 9
0. 122 0 0. 120 0 0. 243 9 100. 8 100. 8 1. 9
0. 123 2 0. 184 0 0. 315 5 102. 7
Table 3 The determination results of the contents(c)of 5 compounds of different samples(n =3)
表 3 不同样品中 5 种化合物的含量(n =3)
No． Source Species
Collected
date /
Batch No．
c /(mg·g －1)
Inulicin 1β-Hydroxy-alantolactone Ivangustin
Japonicone
A
Inulanolide
A Total
S1 Anhui Bozhou I． japonica 2010 －10 2. 68 ±0. 01 0. 20 ±0. 01 0. 36 ±0. 02 0. 78 ±0. 02 0. 32 ±0. 01 4. 34
S2 Henan I． japonica 2010 －07 0. 88 ±0. 01 0. 18 ±0. 01 0. 38 ±0. 01 0. 29 ±0. 01 0. 20 ±0. 01 1. 83
S3 Liaoning Benxi I． japonica 2007 －08 0. 72 ±0. 03 0. 70 ±0. 02 — — — 1. 42
S4 Liaoning Benxi I． japonica 2009 －07 0. 68 ±0. 01 0. 68 ±0. 01 — — — 1. 36
S5 Anhui I． lineariifolia 2007 －08 0. 80 ±0. 02 0. 84 ±0. 02 0. 21 ±0. 01 — 0. 18 ±0. 01 2. 03
S6 Anhui Inulae Herba 10701024 1. 44 ±0. 02 0. 22 ±0. 02 0. 48 ±0. 01 0. 38 ±0. 04 0. 28 ±0. 01 2. 80
S7 Anhui Inulae Herba 20090711 0. 87 ±0. 03 0. 21 ±0. 01 0. 32 ±0. 01 0. 30 ±0. 01 0. 19 ±0. 01 1. 89
S8 Guizhou Inulae Herba 20090507 — 0. 26 ±0. 02 0. 20 ±0. 01 0. 76 ±0. 01 — 1. 22
S9 Henan Inulae Herba 20090636 1. 47 ±0. 01 0. 18 ±0. 01 0. 48 ±0. 01 0. 34 ±0. 02 0. 18 ±0. 01 2. 65
S10 Henan Inulae Herba 20090519 0. 69 ±0. 01 0. 22 ±0. 01 0. 38 ±0. 02 0. 30 ±0. 01 0. 21 ±0. 02 1. 80
S11 Hubei Enshi I． hupenhensis 2007 －08 — — — — 0. 24 ±0. 01 0. 24
S12 Yunnan I． hookeri 2010 －08 0. 62 ±0. 02 — — 1. 50 ±0. 01 0. 21 ±0. 01 2. 33
S13 Yunnan I． wissmanniana 2010 －08 0. 52 ±0. 01 — 0. 20 ±0. 01 — 0. 26 ±0. 01 0. 98
S14 Xizang I． falconeri 2008 －08 — — 0. 54 ±0. 02 — 0. 20 ±0. 02 0. 74
3. 3 流动相系统的选择
实验中比较了甲醇-水和乙腈-水的流动相系
统，后者的洗脱效果好于前者，而且由于乙腈黏度
小，可有效降低柱压，起到保护柱子的作用，所以
采用乙腈-水系统［11］。笔者曾试图加入甲酸以改
善色谱峰的峰形，但由于 5 种成分的最佳吸收波
长在 205 nm，处于末端吸收，甲酸的加入造成基
线波动，最终选择乙腈和纯水作为流动相。
4 结论
作者同时测定了旋覆花次内酯、1β-羟基-土
木香内酯、ivangustin、japonicone A、inulanolide A
的含量，该法为该属植物的质量控制研究提供了
参考依据。
911第 2 期 杨 茜等:HPLC 法同时测定旋覆花属植物中 5 种倍半萜内酯成分的含量
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Simultaneous determination of the contents of five
compounds in Inula plants
YANG Xi1，LIU Hui1，HE Ya-jun2，SU Juan1，ZHANG Wei-dong1
(1． School of Pharmacy，Second Military Medical University，Shanghai 200433，China;2． Shanghai Jiaotong
University，Shanghai 200240，China)
Abstract:Objective To determine five main active sesquiterpenes in Inula plants．Methods The HPLC con-
dition was as follows-column:Agilent Zorbax SB-C18 column(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;mobile phase:A
was acetonitrile，B was water，with gradient elution;the gradient of A phase:0 min 30%，20 min 40%，
25 min 55%，40 min 65%，45-55 min 95%;flow speed:1. 2 mL·min －1;detection wavelength:205 nm;tem-
perature of column:25 ℃ ． Results Five sesquiterpenes(inulicin，1β-hydroxyalantolactone，ivangustin，japoni-
cone A，inulanolide A)were separated at baseline within 55 min． Their peak areas showed a good linearity
within the ranges of 13. 4-402 mg·L －1，6. 53-196 mg·L －1，6. 85-206 mg·L －1，10. 4-312 mg·L －1 and 6. 65-
200 mg·L －1，with the recovery rates being 99. 0%，97. 6%，99. 3%，97. 9%，100. 8% and RSD being
1. 0%，0. 68%，2. 1%，0. 97% and 1. 9%，respectively． Conclusions The present method can be used to de-
termine the contents of sesquiterpenes in Inula plants;the contents of sesquiterpenes in different plants have
some varieties．
Key words:Inula plant;high performance liquid chromatography;sesquiterpenes;content determination
021 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 29 卷