全 文 ：第 19卷　第 2期
2010年 3月 　　
云南民族大学学报(自然科学版)
JournalofYunnanUniversityofNationalities(NaturalSciencesEdition)
Vol.19　No.2
Mar.2010
收稿日期:2009-10-26.
基金项目:霍英东教育基金会:高等院校青年教师基金(101034).
作者简介:黄建梅(1970-), 女 ,博士 , 教授.主要研究方向:中药成分的化学与生物活性研究.
doi:10.3969 /j.issn.1672-8513.2010.02.010
高效液相色谱法测定八角属植物果实
中原儿茶酸的含量
黄建梅 1 ,段　磊1 ,段天璇 1 ,马长华1 ,薛　云 2
(1.北京中医药大学 中药学院 ,北京 100102;2.云南红河州食品药品监督管理局 , 云南 蒙自 661100)
摘要:目的:建立了八角果实中原儿茶酸的含量测定方法 ,明确八角科植物果实中原儿茶酸的含
量.方法:HPLC法 ,采用 DiamonsilTMC18柱 ,甲醇 -水(含 0.8%冰醋酸)为流动相 ,检测波长为 260
nm.结果:该方法线性关系良好 ,精密度高 ,平均回收率 99.11%, RSD=1.85%(n=5).得出了大
八角和野八角果实中的原儿茶酸的含量较高 ,超过 6%,为原儿茶酸的资源植物的结论.
关键词:高效液相色谱法;原儿茶酸;八角属
中图分类号:R282.6 文献标识码:A 文章编号:1672-8513(2010)02-0110-03
DeterminationofProtocatecheuicAcidintheFruitofIliciaceaePlantsbyHPLC
HUANGJian-mei1 , DUANLei1 , DUANTian-xuan1 , MAChang-hua1 , XUEYun2
(1.SchoolofChinesePharmacy, BeijingUniversityofChineseMedicine, Beijing100102, China;
2.YunnanHongheFoodandDrugAdministration, Mengzi661100 China)
Abstract:TheresearchaimstoestablishamethodfordeterminingtheconcentrationofprotocatecheuicacidinIli-
ciumfruitsandusesHPLCwithDiamonsilTMC18 columnasstationaryphase, methanol-water(including0.8%gla-
cialaceticacid)asmobilephaseandλ260nmasdetectionwavelength.Theresearchfindingsshowthatthemeth-
odhasalinearcalibrationcurve, highinprecisionandsatisfactoryinrepeatability;theaveragerecoveryis99.
11%;theconcentrationofprotocatecheuicacidinthefruitofIliciummajusandIliciumsimonsiishigherthan
othersandIliciumfruitcanserveasasourceofprotocatecheuicacid.
Keywords:HPLC;Protocatecheuicacid;Ilicium
　　八角科植物为单一属科 ,在全世界共有 34种 ,
我国有 24种 ,为八角科植物的主要分布区.我国西
南地区八角科植物的资源比较丰富.八角茴香和地
枫皮为中国药典 2005版收载的来源于八角属的品
种.八角属植物果实中的主要成分有挥发油 、倍半萜
内酯 、黄酮 、木质素及有机酸等成分[ 1] .有机酸类成
分在各种果实中普遍存在 ,而且含量较大 ,其中主要
成分为莽草酸 [ 2]和原儿茶酸.药理实验表明原儿茶
酸具在体外具有明显的抑制血小板聚集活性和抗菌
活性[ 3] ,还有能够降低心肌耗氧量 , 拮抗肾上腺素
所致的心肌耗氧量增加 ,提高心肌耐氧能力 ,减慢心
率 ,改善缺血中心区的乳酸和 K+的产生 ,显著减小
心肌梗死范围 [ 4]的作用.本文建立八角属植物果实
中原儿茶酸的高效液相含量测定方法 ,并测定了八
角科 15种植物果实中原儿茶酸的含量 ,扩大原儿茶
酸的资源.
1　仪器与试药
HP1100高效液相色谱仪(VWD检测器 ,四元泵 ,
Aglient化学工作站), DiamonsilTMC18 (25 mm×4.60
mm, 5μm)色谱柱;水为娃哈哈纯净水 ,甲醇为色谱
纯 ,冰醋酸为化学纯;原儿茶酸对照品为本室自制 ,熔
点 200 ～ 202℃,其 EI-MS、13CNMR及 1HNMR与文
献一致 ,色谱归一化测得含量为 98.24%;八角属果实
经北京中医药大学中药学院黄建梅教授鉴定.
2　方法与结果
2.1　色谱条件
DiamonsilTMC18(25mm×4.60 mm, 5 μm)色谱
柱;检测波长:260 nm;流动相:甲醇 -水(含 0.8%
冰醋酸)(20∶80);流速:1.0 mL/min,色谱图见图 1
～ 2.
2.2　对照品溶液的制备
精密称取原儿茶酸对照品约 5g,置 50mL量瓶
中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度.
2.3　供试品溶液的制备
将八角药材粉碎 ,过 40目筛 ,精密称取药材粉
末约 0.1g,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 -0.8%
冰醋酸(40∶60)20mL,密塞 ,称重 ,超声提取 50min,
提取完毕后再精密秤定并用甲醇 -0.8%冰醋酸
(40∶60)补足至原重量 ,吸取 5mL上清液 ,用 0.45
μm的微孔滤膜滤过 ,取续滤液备用.
2.4　色谱系统适用性试验
按上述样品制备方法和色谱条件进行分析 ,以
原儿茶酸计算 ,测得理论塔板数为 9 000,原儿茶酸
和前后色谱峰达到基线分离 ,原儿茶酸色谱峰的拖
尾因子为 0.94,峰形基本对称.
2.5　方法学考察
1)线性范围:精密称取原儿茶酸对照品适量 ,用
甲醇溶解并配成原儿茶酸对照品溶液 48.8μg/mL,
精密吸取对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8, 10μL进样 ,以原儿
茶酸量(μg)为横坐标 ,原儿茶酸峰面积(mAU＊s)为
纵坐标进行线性回归 ,其回归方程为 A=3 446.1m-
14.551,相关系数 r=0.999 8,结果表明原儿茶酸在
0.048 8 ～ 0.488μg与峰面积线性关系良好.
2)精密度试验:精密吸取原儿茶酸对照品溶液
10μL,重复进样 5次 ,测定原儿茶酸得峰面积 ,结果
RSD=1.26%.
3)稳定性试验:分别配置原儿茶酸对照溶液
(19.52μg/mL)和供试品溶液(生药 5.35mg/mL),
分别在 0, 2, 4, 6, 8 h进样测定 ,测得对照品溶液的
RSD=1.93%,供试品溶液的 RSD=2.04%,结果表
明 ,样品溶液和供试品溶液在 8h内稳定.
4)重复性试验:精密称取厚皮香八角粉末约
0.1g共 5份 ,按 2.3所述方法处理 ,精密量取续滤
液 10μL进样 ,用外标一点法计算含量 ,测得原儿茶
酸含量为 3.49mg/g, RSD=2.20%.
5)加样回收率试验:精密称取已知含量的厚皮
香八角粉末 0.1g5份 ,置 50mL锥形瓶中 ,精密加
入 48.8μg/mL原儿茶酸溶液 8 mL,再加入甲醇 8
mL, 0.8%冰醋酸 24mL再按 2.3所述方法处理 ,精
密量取续滤液 10μL进样 ,以外标一点法计算质量
分数 ,并计算加样回收率 ,平均回收率为 99.11%,
RSD=1.85%.
2.6　样品的测定
按 2.3制备供试品溶液 ,分别精密量取对照品
溶液和供试品溶液各 10 μL,分别注入高效液相色
谱仪 ,测定色谱峰峰面积 ,用外标一点法计算含量 ,
结果见表 1.
表 1　样品的原儿茶酸含量
样品 产地
原儿茶酸的
平均含量 /
(mg· g-1)
I.verum八角茴香 广西桂林 1.46
I.ternstroemioides厚皮香八角 海南昌江 3.49
I.micranthum小花八角 云南文山 2.04
I.fargesi华中八角 四川南川四川筠连
2.16
1.19
I.simonsiMaxim野八角 贵州水城云南怒江
6.05
8.40
I.pachyphyllum厚叶八角 广西龙胜 3.21
I.majus大八角 云南新现 7.83
111第 2期　　　　　　　　　　黄建梅等:高效液相色谱法测定八角属植物果实中原儿茶酸的含量
续　表
样品 产地
原儿茶酸的
平均含量 /
(mg· g-1)
I.dunnianum红花八角 广西龙胜 2.73
I.lanceolatum披针叶八角 江西庐山 2.24
I.merrillianum滇缅八角 云南文山 3.40
I.jiadifengpivar.baishanense
百山祖八角 浙江庆元 2.27
I.micranthum小花八角 云南屏边 3.30
I.spathulatum匙叶八角 广西金秀 2.44
3　结语
提取条件的选择:分别采用甲醇 、甲醇 -水 、甲
醇 -酸水系统进行提取 ,发现甲醇 -酸水系统提取
效果比较好;又考察了酸水的量 ,结果 40%甲醇 -
酸水的提取效果较好;确定提取溶剂之后又考察了
超声 、浸泡 12h后超声 、索式提取 3种提取方法 ,最
终认为超声即可;最后又考察了超声提取时间 ,认为
50min即可提取完全 。
流动相选择:分别采用甲醇 -水 、甲醇 -0.5%
冰醋酸水 、甲醇 -0.8%冰醋酸水的流动相系统进行
分析 ,发现甲醇 -0.8%冰醋酸水系统不仅分离效果
较好 ,而且峰形也比较对称。
原儿茶酸已被证实对心血管系统具有明显的活
性 ,本研究结果表明:八角属植物果实均含有较大量
的原儿茶酸 ,可以作为原儿茶酸的资源植物 ,研究原
儿茶酸在八角属植物果实中的分布对该属植物的资
源利用有一定的实际意义。
参考文献:
[ 1] 杨春澍 , 孙建宁 , 黄建梅.细辛属和八角属中药研究与
应用 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 2006.
[ 2] 王晓强 , 郭亚健 , 杨春澍.高效液相法测定八角属部分
植物果实中莽草酸的含量 [ J] .中国中药杂志 , 2001, 26
(7):447-449.
[ 3] 杨东明 , 苏世文 ,李铣 , 等.五灵脂活性成分的研究 [ J] .
药学学报 , 1987, 22(10):765-768.
[ 4] 饶曼人 , 刘广余 ,高长忠 , 等.原儿茶酸对缺血区心肌代
谢及心肌梗塞范围的影响 [ J] .中国药理学报 , 1988, 9
(1):27-30.
(责任编辑　王　琳)
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