全 文 ：青藏高原龙胆属中 10种野生药材的
4种主要活性成分的测定分析
张小龙1 ,2 , 张海涛1 ,2 , 纪兰菊 1
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810008;2.中国科学院研究生院 , 北京 100049)
摘　要:建立反相高效液相色谱法同时测定青藏高原龙胆属中 10 种常用野生
药材的獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐芽菜苷 、异荭草苷的含量。方法:采用反相高
效液相色谱法。乙腈-水(0.1%的H3PO4)为流动相 , 梯度洗脱 , 洗脱条件为 0.01
min※20.00 min※20.01 min※40.00 min※40.01 min※50.00 min , 乙腈:12%※
12%※15%※33%※100%※100%, 体积流量 1.0 mL min , 检测波长为 240 nm ,
柱温 25 ℃。4种成分均达到基线分离 , 线性良好。
关键词:RP-HPLC;獐牙菜苦苷;龙胆苦苷;獐芽菜苷;异荭草苷;龙胆属
　　我国有龙胆科植物 23属 427种 , 各地虽均有
分布 , 但呈群落生长态势的集中分布多在青藏高
原高海拔地区 , 青藏高原主产龙胆除收载在国家
药典的麻花秦艽 、粗茎秦艽外 , 还有《藏药部颁标
准》(1992 年版)和青海及西藏地方药材标准中的
乌奴龙胆 、青藏龙胆等数种植物 , 它们均具有解
毒 、清热等功效 , 常用于感冒 、风湿病症治疗的组
方药物[ 1 ～ 3] 。它们所含的主要活性成分为裂环环
烯醚萜苷类[ 4] , 如獐牙菜苦苷(swertiamarin)、龙胆
苦苷(gentiopicroside)、獐牙菜苷(sweroside)等 , 及
黄酮类 , 如异荭草苷(isoorientin)等 。龙胆属中 , 除
现行国家药典标准和地方标准中规定的品种外 ,
其他品种尤其是藏药在民间广泛应用。因此 , 本
实验利用高效液相色谱法 , 对民间常用且在青藏
高原分布广泛的 10种野生药材进行了系统的测定
分析 , 旨在为民间用药提供有效的质量控制标准
和为新药源的开发利用提供科学依据。
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂与药材
LC-10ATVP 二元泵(岛津公司);Rheodyne7725
进样器(美国);SPD-M10AVP 二极管阵列检测器
(岛津公司);Class-VP 液相色谱工作站(岛津公
司);Milli-Q超纯水装置;AT-130柱温箱;AB104-
N电子天平(Mettler-toledo 公司);ZM 震动超微粉
碎机;2200B 超声波仪 。乙腈(色谱纯 , 山东禹王
试剂公司);甲醇(分析纯 , 天津市百世化工公司
化学试剂厂);H3PO4(分析纯 , 天津市百世化工公
司化学试剂厂);水为重蒸水并经 0.45 μm滤膜过
滤。獐牙菜苦苷(批号 0785-200203)购自中国药品
生物制品检定所;龙胆苦苷 、獐芽菜苷 、异荭草苷
为中国科学院西北高原生物研究所孙洪发教授赠
送 , 纯度均大于 98%。
样品采自青藏高原 , 采集时间为 2007年 8 、 9
月。所采样品均由中国科学院西北高原生物研究
所卢学峰博士鉴定 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为 Kromasil C18(250 mm ×4.60 mm , 5
μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液;梯度洗脱 ,
洗脱条件为0.01 min※20.00 min※20.01 min※40.00
min※40.01 min ※50.00 min , 乙腈:12%※12%※
15%※33%※100%※100%;流速为1 mL min;检测
波长为 240 nm;柱温为25 ℃。进样体积为5μL。
2.2　对照品溶液的制备
分别精密称取适量獐芽菜苦苷 、龙胆苦苷 、
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第 28卷增刊
2009年 5 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.28.Suppl.2009-5
基金项目:青海龙胆科主要药用植物指纹图谱研究(2004-N-142)
作者简介:张小龙 , 男 , 硕士研究生;E-mail:zhangxiaol07@mails.gucas.ac.cn
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2009.0428
獐芽菜苷和异红草素用甲醇定容至 10 mL , 配成浓
度分别为 0.542 、 0.703 、 0.581 和 0.087 mg mL 的
对照品溶液。
2.3　供试品的制备
经过提取溶剂的对比实验 , 甲醇提取法效果
最好 , 操作简单。取样品全草 , 粉碎 , 过筛 , 混匀
后 , 精密称取 2.5 g 置具塞锥形瓶中 , 加入甲醇 50
mL , 称重 , 超声 30 min , 放至室温 , 再次称定重
量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 取少量用 C18
硅胶小柱滤去色素 , 再过 0.45μm 滤膜 , 弃去初滤
液 , 收集续滤液为供试品溶液。
2.4　线性关系
精密吸取对照品溶液 4 、 8 、 12 、 16 、 20 μL 进
样 , 作 HPLC分析 , 以峰面积对进样体积求得回归
方程 。得 3种成分的回归方程 、相关系数及线性范
围 , 见表1 。
表 1　4种成分的回归方程 、 相关系数及线性范围
活性成分 浓度 (mg mL) 线性范围 μg 回归方程 r
獐芽菜苦苷 0.542 2.71～ 10.84 Y=475187.2969X+143357.5 0.9997
龙胆苦苷 0.703 3.515～ 14.06 Y=694535.74X +164869.277 0.9995
獐芽菜苷 0.581 2.905～ 11.62 Y=315731.52X+26118.68 0.9998
异红草苷 0.087 0.435～ 1.74 Y=171883.15X-6005.1 0.9995
2.5　精密度试验
取同一份对照品溶液 , 按上述色谱条件连续
进样 5次 , 以峰面积计算可得獐芽菜苦苷(n =5)、
龙胆苦苷(n=5)、獐芽菜苷(n=5)和异红草苷(n
=5)的 RSD 分别为 1.22%, 1.41%, 2.21%和
1.79%。
2.6　重复性试验
将同一份全草样品用上述供试品溶液的制备
方法制备 5份 , 进行 HPLC分析 。獐芽菜苦苷(n=
5)、龙胆苦苷(n =5)、獐芽菜苷(n =5)和异红草
苷(n =5)的 RSD分别为 2.97%, 2.01%, 1.33%
和3.31%。
2.7　稳定性试验
将同一份样品按供试品溶液的制备方法制备
后 , 每隔 4 h测定 1次 , 可知獐芽菜苦苷(n=5)、
龙胆苦苷(n=5)、獐芽菜苷(n=5)和异红草苷(n
=5)的 RSD 分别为 2.89%, 2.65%, 3.37%和
2.59%。说明獐芽菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐芽菜苷和
异红草苷在 20 h内稳定。
2.8　回收率试验
取已知含量的样品药材适量 , 加入一定量的
獐芽菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐芽菜苷和异红草苷对
照品 , 按样品制备方法制备 , 进行 HPLC分析 , 测
得獐芽菜苦苷(n=5)、龙胆苦苷(n=5)、獐芽菜
苷(n =5)和异红草苷(n =5)的回收率分别为
100.27% (RSD = 1.97%)、 99.11% (RSD =
3.41%)、 100.94% (RSD =3.54%)、 100.79%
(RSD=3.14%)。
2.9　样品测定
按供试品溶液的制备方法 , 对所有样品进行
了定量提取 , 在限定的色谱条件下进行了 4种药
效成分的含量测定 。取峰面积的平均值 , 按标准
曲线计算含量 , 结果见表 2 , 对照品与样品色谱图
如图 1所示 。
表 2　样品中 4 种活性成分的含量(%, n =3)
样品 采集地点 海拔 S1 S2 S3 S4 合计
乌奴龙① 玉树称多 4300 0.69 1.93 0.82 0.42 3.86
乌奴龙② 西藏拉萨 3720 0.55 2.03 0.25 0.64 3.47
青藏龙胆① 西藏巴青 4530 0.72 1.74 1.01 0.38 3.85
青藏龙胆② 囊谦扎曲 3750 0.35 1.99 0.94 0.52 3.80
白花龙胆① 玉树称多 4300 0.29 1.19 1.51 0.35 3.34
白花龙胆② 黄南州河南县 3960 0.31 1.55 0.86 0.62 3.34
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　　　　　续表 2
样品 采集地点 海拔 S1 S2 S3 S4 合计
云雾龙胆① 互助北山 3310 1.38 2.85 0.53 0.52 5.28
云雾龙胆② 海东青沙山 3300 0.73 2.30 0.91 0.75 4.69
刺芒龙胆① 互助北山 3310 0.32 1.72 0.39 0.52 2.95
刺芒龙胆② 玉树柳梢沟 3560 0.38 2.01 0.43 0.34 3.17
条纹龙胆① 化隆拉脊山 2990 0.60 1.32 0.47 0.95 3.34
条纹龙胆② 大通宝库乡 2920 0.23 2.23 0.36 0.69 3.51
条纹龙胆③ 玛可河林场 3740 0.80 2.10 0.23 0.79 3.92
线叶龙胆① 互助县北山 3090 1.44 3.01 0.58 0.22 5.25
线叶龙胆② 黄南州河南县 3560 0.61 2.12 1.60 0.29 4.62
线叶龙胆③ 玉树通天河 4280 1.61 3.99 0.77 0.19 6.56
粗茎秦艽① 西藏错那 4900 0.51 4.99 2.01 0.31 7.82
粗茎秦艽② 玉树下拉秀 4380 0.48 5.70 2.17 0.33 8.68
白花秦艽① 玉树州称多 4480 1.78 1.53 0.47 0.41 4.19
白花秦艽② 玉树黑马河 4320 1.89 1.27 0.39 0.31 3.86
秦艽① 果洛玛可河林场 3740 0.53 3.49 0.97 0.43 5.42
秦艽② 兴海县河卡山 3490 0.29 2.72 1.55 0.30 4.91
秦艽③ 化隆县拉脊山 2990 0.27 2.57 1.04 0.29 4.17
　　　　　注:S1-獐牙菜苦苷;S2-龙胆苦苷;S3-獐芽菜苷;S4-异荭草苷
图 1　对照品(a)及样品(b)的 HPLC 图
S1-獐牙菜苦苷;S2-龙胆苦苷;S3-獐芽菜苷;S4-异
荭草苷
3　结论
本文首次对龙胆属中 10种野生药材同时做了
定量的对比分析 , 发现獐芽菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐
芽菜苷和异红草苷均是这 10种野生药材共有的活
性成分。在现行的国家药典质量标准中[ 5] , 龙胆属
药材的检测 , 仅是对龙胆苦苷这一种活性成分规
定检测指标 , 而獐芽菜苦苷 、獐芽菜苷和异红草
苷也是该 10种龙胆属药材共有的活性成分 , 若能
对其进行多元的定量检测 , 则能更准确 、更科学
的对这 10种药材进行质量控制 。
通过对 10种植物的色谱图及其 4种活性成分
的含量进行对比分析 , 它们的色谱图和 4种成分
的含量比较相似 , 不仅为药材的替代提供了参考
依据 , 而且证明了 10种植物在系统分类上的科学
性。
本研究首次建立了青藏高原龙胆属 10种野生
药材的獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷及异荭
草苷4种药效成分的HPLC含量测定方法。测定结
果表明 , 该方法简便 、快速 , 准确 、有效 , 为药材
的品质评价和深度开发提供了科学依据。
参考文献
[ 1] 　中国植物志.1988 , 62:14
[ 2] 　中国药典(一部).2005.190
[ 3] 　杨永昌 , 何廷农 , 卢生莲等.藏药志.西宁:青海人
民出版社.1991.186
[ 4] 　纪兰菊 , 孙洪发 , 丁经业等.高原生物学 (集刊),
1992 , 11(6):113
[ 5] 　中国药典(一部).2005.64
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