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青梅叶中岩白菜素的提取工艺研究



全 文 :食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY2012年 第37卷 第1期 提取物与应用
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青梅(Vatica mangachpoi Blanco)系龙脑香科
(Diptercocarpaceae)青梅属(Vatica genus)植物,主要
分布于海南[1]。在民间,青梅叶长期用作杀菌消
毒,治疗肝炎及提取中药龙脑香。
收稿日期:2011-07-15 *通讯作者
基金项目:海南省教育厅高等学校科学研究资助项目(Hjkj2010-26)。
作者简介:莫峥嵘(1969—),女,海南琼海人,硕士,副教授,主要从事天然产物化学研究工作。
通过对青梅叶的有效成分的提取、分离、纯
化及结构鉴定,确定青梅叶中含有岩白菜素。岩
白菜素主要作用是止咳祛痰,用于治疗慢性支气
管炎,目前已应用于临床。临床上单用,或制成
莫峥嵘,陈光英*,王锦慧,王天山,戴春燕,袁 媛
(海南师范大学省部共建热带药用植物化学教育部重点实验室,
海南师范大学化学与化工学院,海口 571158)
摘要:目的:研究青梅叶中提取岩白菜素的最佳工艺。方法:以岩白菜素含量为指标,比较冷
浸提取、超声提取、回流提取3种方法提取物中岩白菜素含量,确定最佳提取方法。并以正交
实验确定最佳提取工艺。结果:3种提取方法中冷浸提取法为最佳提取方法,正交实验优化条件
为:提取料液比1:12,乙醇浓度65%,提取时间36 h。结论:在此最佳参数组合下,岩白菜素的
含量为3.88%。
关键词:青梅;岩白菜素;提取工艺
中图分类号: TS 284.2 文献标志码: A 文章编号:1005-9989(2012)01-0207-03
The extraction technology of bergenin from the leaf of Vatica
Mangachpoi Blanco
MO Zheng-rong, CHEN Guang-ying*, Wang Jin-hui, WANG Tian-shan, DAI Chun-yan, YUAN Yuan
(Key Laboratory of T ropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education,
College of Chemistry & Chemical Engineering, Hainan Normal University, Haikou 571158)
Abstract: Objective: To study the best extraction technology of bergenin from the leaf of Vatica
mangachpoi Blanco growing in Hainan. Methods: The cold-soaked extraction, ultrasonic extraction and
heat refl ux extraction techniques were respectively used for extraction of bergenin. The best extraction
method of bergenin was determined by its content. The best extraction technology was determined
through orthogonal experimental investigation. Results: The cold-soaked extraction was chosed as the
best extraction method. The optimized parameters were as follows: the ratio of material and solvent was
1:12, the concentration of alcohol was 65%, the extracting time was 36 h. Conclusion: The yielding content
of bergenin was 3.88% at the condition of optimum parameters.
Key words: Vatica mangachpoi Blanco; bergenin; extraction technology
青梅叶中岩白菜素的提取工艺研究
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2012.01.016
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第37卷 第1期提取物与应用
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复方制剂,经过较广泛的临床验证,证明疗效比
较稳定,复方制剂疗效更高。其特点是对咳嗽中
枢有选择性抑制作用,不良反应小,且连续使用
不产生耐药性[2]。近年的药理实验发现岩白菜素还
具有抗炎、护肝、抗溃疡、提高免疫等作用[3]。
本课题组前期已对青梅茎皮及青梅茎中岩白
菜素的含量进行测定,结果表明:青梅茎皮中岩
白菜素的含量为0.8%[4],青梅茎中岩白菜素的含
量0.23%[5]。在研究青梅叶的化学成分时,发现青
梅叶中岩白菜素含量很高。因此,为了充分利用
青梅药用植物,本实验拟对青梅叶岩白菜素的含
量进行测定,并对青梅叶中岩白菜素的提取工艺
进行实验和比较,以期优化、筛选出理想的提取
工艺。
1 仪器、试剂及实验材料
大连依利特公司UV230紫外检测器,P230
高 压 恒 流 泵 ( 双 泵 ) , E C 2 0 0 0 工 作 站 : 日 本 ;
SHIMADZU十万分之一天平。
甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂为分
析纯;岩白菜素标准品:芜湖尔塔医药科技有限
公司;青梅药材:海南万宁,经海南师范大学生
命科学学院钟琼芯副教授鉴定为龙脑香科青梅属
植物Vatica mangachpoi Blanco。样本保存在海南师
范大学省部共建热带药用植物化学教育部重点实
验室。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[4]
色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5
μm);流动相:A:0.5%冰乙酸水溶液v/v,B:甲
醇。梯度洗脱,洗脱条件如下:0 min(A:80,B:20 v/
v);10 min(A:65,B:35 v/v);25 min(A:64,B:36 v/v);
30 min(A:0,B:100 v/v);42 min(A:20, B:80 v/v);流
速:0.4 mL/min;检测波长274 nm;柱温:30 ℃;
进样量:10 μL。
2.2 标准曲线的绘制
精密称取干燥至恒重的岩白菜素对照品10
mg,置于25 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容,
制成浓度为0.4 mg/mL的储备液。以此为母液配制
浓度为0.2 mg/mL溶液;再以0.2 mg/mL为母液,配
制浓度为0.1 mg/mL的溶液;依次类推,配制成浓
度分别为0.05、0.025、0.0125 mg/mL的标液[4]。精
密吸取不同浓度的对照品溶液各10μL,按上述色
谱条件测定峰面积,以峰面积为纵坐标,对照品
进样质量为横坐标,进行回归分析,则回归方程
为Y=3749. 86X-169.23,r =0.9993,结果表明,在
0.125~4 μg之间,峰面积与进样量之间的线性关
系良好。该定量分析方法可用于青梅叶提取液中
岩白菜素含量的检测分析。
2.3 不同提取方法提取物中岩白菜素含量比较[5]
称取青梅叶粗粉0.5 g 3份,分别加15倍量70%
的乙醇,用冷浸提取法冷浸2次,每次1 d;超声提
取法提取2次,每次20 min;回流提取法提取2次,
每次1.5 h。分别合并2次提取液,过滤,浓缩定
容至100 mL容量瓶,备用。按2.1色谱条件测定岩
白菜素含量,结果表明:用冷浸提取法得到的提
取物岩白菜素含量较高,而且冷浸提取法简单易
行,适于大量生产。所以以下实验选择冷浸法进
行提取条件优化筛选。
2.4 冷浸提取法提取条件优化筛选[5-8]
2.4.1 不同浓度乙醇提取溶剂对提取物岩白菜素
含量的影响 采用浓度分别为30%、40%、50%、
60%、70%、80%及95%的乙醇作为提取溶剂进行
筛选实验,结果表明:70%的乙醇为溶剂提取岩
白菜素的含量最高,因此选择70%乙醇为最佳提
取溶剂。
2.4.2 提取时间对提取物岩白菜素含量的影响 分
别以12、24、36、48、60、72 h为提取时间进行筛
选实验,结果表明:结果表明:随着冷浸时间的
延长,所提取的岩白菜素的含量逐渐增大,36 h
时,出现最大值,之后略有下降,故认为36 h为适
宜提取时间。
2.4.3 提取次数对提取物岩白菜素含量的影响 选
择提取次数分别为1次、2次、3次进行筛选实验,
结果表明:提取次数为1和2次时,所提取的岩白
菜素含量接近,提取次数为3时岩白菜素含量反而
下降。因此,以1次为较理想的提取次数。
2.4.4 提取料液比对提取物岩白菜素含量影响 选
择料液比1:10、1:12、1:15分别进行实验,结果表
明:当料液比为1:12时,出现最大值。因此,认
为料液比以1:12为最佳值。
2.4.5 冷浸提取法多因素正交实验 在上述单因
素实验的基础上,选取了料液比 (A)、乙醇浓度
(B)、提取时间(C)作为考察因素,分别称取0.5 g青
梅叶粗粉,以岩白菜素的含量作为考核指标,按
3因素3水平进行正交实验,其正交实验设计见表
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY2012年 第37卷 第1期 提取物与应用
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1,正交实验结果统计见表2。
表1 冷浸提取法多因素正交实验设计
因素
料液比 A 乙醇浓度/% B 提取时间/h C
1 1:10 65 24
2 1:12 70 36
3 1:14 75 48
表2 L9(34)冷浸提取法多因素正交实验结果统计
实验号
因素
岩白菜素含量%A B C
1 1 1 1 2.55
2 1 2 2 3.09
3 1 3 3 2.48
4 2 1 2 3.88
5 2 2 3 2.68
6 2 3 1 2.50
7 3 1 3 2.69
8 3 2 1 2.47
9 3 3 2 3.10
k1 2.71 3.04 2.50
k2 3.02 2.74 3.36
k3 2.75 2.69 2.62
极差 0.31 0.35 0.86
以正交试验法优选了乙醇冷浸提取青梅叶中
岩白菜素的提取工艺,结果表明:从直观分析可
知,极差大小变化为C>B> A。说明提取时间的改
变对岩白菜素的提取影响最大,其次为乙醇浓度
和提取料液比。
根据正交实验结果:确定最佳提取工艺为:
提取料液比1:12,乙醇浓度65%,提取时间36 h。
3 结论
本实验确定了冷浸提取法提取青梅叶岩白菜
素的工艺条件。冷浸提取法单因素实验最佳条件
为:70%乙醇为提取溶剂、提取料液比为1:12、提
取次数为1、提取时间为36 h。
冷浸法正交实验表明:各因素对提取效果
的影响主次关系为提取时间>乙醇浓度>提取料液
比,确定最佳提取工艺为:提取料液比1:12,溶
剂浓度65%,提取时间36 h。在优化条件筛选时,
以正交实验结果为准。
青梅叶中岩白菜素的含量高达3.88%,明显
高于青梅茎皮及青梅茎部分。青梅叶具有开发利
用的价值。
参考文献:
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