全 文 ：HPLC法同时测定矮地茶配方颗粒中岩白菜素
和槲皮苷
陈向东1，张光大1，刘法锦2，孙冬梅2，何文江1
(1．广东一方制药有限公司，广东 佛山 528244;2．广东省中医研究所，广东 广州 510095)
摘要:目的 建立矮地茶配方颗粒中岩白菜素和槲皮苷的含量测定方法。方法 以 Diamonsil C18柱(4． 6
mm × 250 mm，5 μm)为色谱柱，以乙腈(A)-0． 1%(体积分数)H3PO4(B)为流动相，进行梯度洗脱，流速
1． 0 mL /min，检测波长 256 nm，柱温 30 ℃。结果 岩白菜素在 0． 082 5 ～ 1． 32 μg之间呈良好的线性关系
(r = 0． 999 6) ，平均回收率为 99． 45%，RSD为 1． 62%。槲皮苷在 0． 022 8 ～ 0． 364 8 μg之间呈良好的线
性关系(r = 0． 999 8) ，平均回收率为 99． 21%，RSD为 1． 87%。结论 该方法精密度、重复性良好，可为矮
地茶配方颗粒质量控制提供参考。
关键词:矮地茶;配方颗粒;岩白菜素;槲皮苷;HPLC法
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1006-8783． 2012． 05． 014
文章编号:1006-8783(2012)05-0522-04
Simultaneous determination of bergenin and quercitroside in Ardisiae Japonicae
Herba Dispensing Granules by HPLC
CHEN Xiang-dong1，ZHANG Guang-da1，LIU Fa-jin2，SUN Dong-mei2，HE Wen-jiang1
(1． Guangdong Yifang Pharmaceutical Company Limited，Foshan 528244，China;2． Guangdong Province
Institute of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510095，China)
Abstract:Objective To establish an method for determining bergenin and quercitroside simultaneously in
Ardisiae Japonicae Herba Dispensing Granules． Methods HPLC was performed on Diamonsil C18 column
(4． 6mm × 250 mm，5 μm)at 30 ℃ with the mobile phase of acetonitrile (A)－ 0． 1% phosphoric acid
(B)for gradient elution at a flow rate of 1． 0 mL /min． And the ultraviolet detection wavelength was 256
nm． Results The linear range of bergenin was 0． 082 5 － 1． 32 μg(r = 0． 999 6) ，and the average recovery
ratio was 99． 45 %(RSD = 1． 62%)． The linear range of quercitroside was 0． 022 8 － 0． 364 8 μg (r =
0． 999 8)． The average recovery ratio was 99． 21% (RSD = 1． 87%)． Conclustion The method is
accurate with good repeatability，which may provide reference evidence for the quality control of Ardisiae
Japonicae Herba Dispensing Granules．
Key words:Ardisiae Japonicae Herba ;Dispensing Granules;bergenin;quercitroside;HPLC
收稿日期:2012-08-07
基金项目:广东省科技创新平台建设专项(2011A091000005)
作者简介:陈向东(1975 －) ，男，制药高级工程师，从事中药配方颗粒研究，电话:0757-85603332，Email:chenxd66@ 126． com。
网络出版时间:2012-10-08 16:45 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． R． 20121008． 1645． 002． html
矮地茶别名紫金牛［1］、平地木、地枇杷、千年
矮、不出林，主产于广东、广西、湖南、湖北及华东等
地［2］，为紫金牛科植物紫金牛 Ardisia japonica
(Thunb．)Blume的干燥全草。夏、秋二季茎叶茂盛
时采挖，除去泥沙，干燥。具有化痰止咳、清利湿热、
活血化瘀等功效［3］。
矮地茶主要含挥发油类、酚类、苯醌类、三萜类、
黄酮类等成分，其中，苯醌类成分包括岩白菜素(又
称矮茶素，bergenin)［4］，黄酮类成分包括槲皮苷、杨
梅苷。药理研究表明，矮地茶中的岩白菜素有明显
的止咳作用，黄酮苷有增加动物气管分泌和促进气
管绒毛排痰的作用［5］。矮地茶临床主要用于各种
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Oct． 2012，28(5)
咳嗽的治疗，已制成包括复方矮地茶胶囊、抗痨胶
囊、清热镇咳糖浆等 20 多种中成药制剂。
目前，矮地茶药材及其复方制剂的含量测定主
要以岩白菜素为指标成分［6 － 10］，也有报道测定槲皮
素、山柰酚等含量［11］，但同时测定岩白菜素和槲皮
苷尚未见报道。矮地茶配方颗粒是遵循传统汤剂的
制备特点，以水为溶媒，经过提取、浓缩、干燥、制粒
等一系列工序制成的单味制剂，供临床调配处方使
用，故该产品主要以水溶性成分为主。考虑到以单
一成分为指标难以反映产品的综合质量，本试验同
时测定矮地茶的 2 种药效成分。岩白菜素在热水中
溶解性较好，曾有报道采用矮地茶粗粉通过水提醇
沉工艺得到岩白菜素［12］，因此，岩白菜素可以代表
矮地茶配方颗粒的苯醌类成分;槲皮苷由槲皮素和
鼠李糖结合而成［13 － 14］，在热水中溶解性也较好，水
提取含量较高，可以代表矮地茶配方颗粒的黄酮苷
类成分。这 2 类成分既是矮地茶配方颗粒的药效成
分，又是水提富集的主要成分，同时测定对控制矮地
茶配方颗粒质量具有较高的现实意义。
1 仪器与试药
Agilent1260 系列液相色谱仪(G1311C 四元泵，
G1129B 自 动 进 样 器，G1314B 紫 外 检 测 器，
Chemstation色谱工作站) ，ABT-5DM 十万分之一电
子天平(德国 KERN 公司) ，BS110S 万分之一天平
(北京赛多利斯科学仪器有限公司) ，BS200S-WEI
千分之一电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公
司) ，CQ-25-6 超声波清洗器(上海音波声电科技公
司)。
岩白菜素对照品(中国药品生物制品检定所提
供，批号:1532-200202) ;槲皮苷对照品(中国药品生
物制品检定所提供，批号:111538-200302) ;矮地茶
配方颗粒(广东一方制药有限公司，批号:0906086、
1003370、1011209、1106270)。
乙腈为色谱纯(Merk) ;水为自制双蒸水;
H3PO4、乙醇为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18柱(4． 6 mm
×250 mm，5 μm) ;柱温:30 ℃;流动相:乙腈(A)
-0． 1%(体积分数)H3PO4(B) ，梯度洗脱，梯度洗脱
程序见表 1;流速:1． 0 mL /min;检测波长:256 nm;
进样量:5 μL。在此条件下，岩白菜素和槲皮苷色谱
峰与相邻成分均可达到基线分离，见图 1。
表 1 流动相梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution program of the mobile phase
t /min φ(流动相 A)/% φ(流动相 B)/%
0 ～ 15 10 90
15 ～ 25 10→25 90→75
25 ～ 45 25 75
70
60
50
40
30
20
10
0
1
2
1
2
B
C
A
0 10 20 30
t/min
Ab
un
da
nc
e/
m
AU
0 10 20 30
0 10 20 30
70
60
50
40
30
20
10
0Ab
un
da
nc
e/
m
AU
70
60
50
40
30
20
10
0Ab
un
da
nc
e/
m
AU
1．岩白菜素;2．槲皮苷。
图 1 岩白菜素对照品(A)、槲皮苷对照品(B)及供试品
(C)溶液的 HPLC色谱图
Figure 1 HPLC chromatogram of bergenin reference substance
(A) ，quercitroside reference substance(B)and sample
solution (C)
2． 2 对照品溶液的制备 分别取岩白菜素、槲皮苷
对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成岩白菜素、槲
皮苷质量浓度分别为 150、45． 2 μg /mL 的对照品溶
液。
2． 3 供试品溶液的制备 取矮地茶配方颗粒适量，
研细，取约 0． 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密
加入稀乙醇 50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率
200 W，频率25 kHz)30 min，放冷。再称定质量，用稀
乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 4 线性关系的考察 分别取岩白菜素、槲皮苷对
照品适量，精密称定，分别加稀乙醇制成岩白菜素、
槲皮苷质量浓度分别为 330、91． 2 μg /mL 的对照品
储备液。分别精密吸取岩白菜素对照品储备液适
量，加稀乙醇依次稀释成质量浓度为 0. 016 5、
325第 5 期 陈向东，等． HPLC法同时测定矮地茶配方颗粒中岩白菜素和槲皮苷
0. 033、0. 066、0. 132、0. 198、0. 264 mg /mL 的溶液，
分别精密吸取 5 μL，注入液相色谱仪，按“2． 1”项下
色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值对岩白菜素
进样量进行回归处理，得回归方程 Y1 = 5． 04 × 10
3X1
－ 1． 44453，r = 0． 999 6，岩白菜素进样量在 0． 082 5
～ 1． 32 μg范围内呈良好的线性关系。分别精密吸
取槲皮苷对照品储备液适量，加稀乙醇依次稀释成
质量浓度为 4. 56、9. 12、18. 24、36. 48、54. 72、72. 96
μg /mL的溶液，分别精密吸取 5 μL，注入液相色谱
仪，按“2． 1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积积
分值对槲皮苷进样量进行回归处理，得回归方程为
Y2 = 3． 06 × 10
3X2 + 1． 92082，r = 0． 999 8，槲皮苷进
样量在 0． 022 8 ～ 0． 364 8 μg 范围内呈良好的线性
关系。
2． 5 精密度试验 分别精密吸取岩白菜素、槲皮苷
对照品溶液 5 μL，重复进样 6 次，测定岩白菜素和
槲皮苷峰面积并计算其 RSD 值，结果岩白菜素、槲
皮苷峰面积的 RSD 值分别为 0． 83%和 1． 15%，表
明仪器精密度良好。
2． 6 稳定性试验 取同一批矮地茶配方颗粒(批
号:0906086)供试品溶液，分别于 0、1、2、4、8、12 h
进样，依法测定岩白菜素和槲皮苷峰面积并计算
RSD值，结果岩白菜素和槲皮苷峰面积的 RSD 值分
别为 1． 21%和 1． 15%。结果表明，供试品溶液在
12 h内基本稳定。
2． 7 重复性试验 取同一批矮地茶配方颗粒(批
号:0906086) ，共 6 份，按“2． 3”项下方法制备供试
品溶液 6 份，分别测定岩白菜素和槲皮苷质量分数。
岩白菜素平均质量分数为 41． 86 mg /g，RSD 值为
1． 86%;槲皮苷的平均质量分数为 5． 12 mg /g，RSD
值为 1． 07%。结果表明，本方法重复性良好。
2． 8 加样回收率试验 取已知质量分数(岩白菜
素质量分数 41． 86 mg /g，槲皮苷质量分数 5． 12 mg /
g)的同一批(批号:0906086)矮地茶配方颗粒，共 6
份，每份取约 0． 1 g，精密称定，分别精密加入岩白菜
素对照品溶液(质量浓度为0． 27 mg /mL)15 mL，槲皮
苷对照品溶液(质量浓度为 0． 050 7 mg /mL)10 mL，
按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回
收率，结果见表 2。结果表明，本方法回收率良好。
2． 9 样品测定 分别取 3 批矮地茶配方颗粒，按
“2． 3”项下方法制备供试品溶液，0． 45 μm 微孔滤
膜滤过后，分别精密吸取供试品溶液 5 μL 进样，依
法测定其中岩白菜素和槲皮苷质量分数，平行测定
3 次，结果见表 3。
表 2 加样回收率试验结果
Table 2 Results of recovery tests(n = 6)
成分 样品量 m /g 样品中的量 m /mg 加入量 m /mg 测得量 m /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
0． 102 3 4． 282 4． 05 8． 270 98． 47
0． 102 1 4． 274 4． 05 8． 290 99． 16
0． 102 2 4． 278 4． 05 8． 362 100． 84
岩白菜素
0． 100 7 4． 215 4． 05 8． 214 98． 74
99． 45 1． 62
0． 104 6 4． 379 4． 05 8． 331 97． 58
0． 101 2 4． 236 4． 05 8． 363 101． 90
0． 102 3 0． 524 0． 507 1． 022 98． 22
0． 102 1 0． 523 0． 507 1． 017 97． 44
0． 102 2 0． 523 0． 507 1． 030 100． 00
槲皮苷
0． 100 7 0． 516 0． 507 1． 026 100． 59
99． 21 1． 87
0． 104 6 0． 536 0． 507 1． 029 97． 24
0． 101 2 0． 518 0． 507 1． 034 101． 78
表 3 3 批样品中岩白菜素、槲皮苷测定结果
Table 3 Determination results of bergenin and quercitroside of samples(n = 3)
批号 岩白菜素 /(mg·g －1) RSD /% 槲皮苷 /(mg·g －1) RSD /%
1003370 48． 06 1． 23 5． 67 1． 63
1011209 44． 56 1． 02 5． 36 1． 75
1106270 44． 13 1． 17 5． 23 1． 39
425 广东药学院学报 第 28 卷
3 讨论
3． 1 供试品溶液的制备 根据待测成分的理化性
质，对供试品的提取溶剂、提取方式和提取时间进行
了考察和比较，确定了供试品溶液的制备方法为取
0． 2 g，加稀乙醇 50 mL，超声提取 30 min。
3． 2 测定波长的选择 分别对岩白菜素、槲皮苷对
照品溶液进行了紫外光谱扫描，结果岩白菜素在
274 nm处、槲皮苷在 256 nm处有最大吸收，因矮地
茶中岩白菜素含量较高，色谱峰响应值高，故选择
256 nm作为检测波长，在此波长下岩白菜素和槲皮
苷均有较好的吸收。
3． 3 流动相的选择 对不同的流动相，包括甲醇-
0. 1% H3PO4 不同配比与梯度洗脱、乙腈-0. 1%
H3PO4 不同配比与梯度洗脱进行考察，最终确定了
本试验的色谱条件。
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(责任编辑:刘晓涵
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)
研究发现儿童神经肌肉症机制
哥伦比亚大学医学中心(CUMC)的运动神经元中心的科学家们通过研究发现，脊髓性肌萎缩症(SMA)的病
因并非是普遍认为的运动神经细胞或肌肉细胞的功能障碍，而是运动神经回路功能障碍的结果。上述研究发表
在 2012 年 10 月的《Cell》网络版上。
以往的尸检报告表明该疾病死者的运动神经元死亡。但是不能确定究竟是运动神经元死亡引起疾病，还是
疾病引起运动神经元死亡。通过对 SMA果蝇模型的研究发现，该疾病引起运动神经回路异常，进而导致运动神
经元功能障碍。该研究首次清楚地表明在生物模型中运动神经元回路的功能缺陷是导致神经系统疾病的原因之
一。
SMA是一种遗传性神经肌肉疾病，其特征是肌肉萎缩和无力。该病是由 SMN1 基因缺陷引起的，其编码 SMN
蛋白。通过改变果蝇的基因，使果蝇的每个细胞都含有缺陷的 SMN1 基因。研究人员发现，果蝇细胞的 SMN蛋白
水平较低，导致肌肉变小、运功功能下降，与人类的 SMA 症状相似。之后，在该果蝇的运动神经细胞或肌肉细胞
引入功能无缺陷的 SMN1 基因，果蝇的情况没有改善。只有将 SMN1 基因放回至异常的运动神经回路中，特别是
本体感受神经元和中间神经元，肌肉的大小和运动功能才能恢复。进一步研究发现，SMN1 基因缺陷的果蝇的本
体感受神经元和中间神经元不能产生足够的神经递质。当果蝇的钾通道出现遗传性阻碍时，神经递质输出增加，
肌肉的大小和运动功能改善。给果蝇使用钾通道阻断剂会出现相同效果，这表明钾通道阻断剂可能有助于改善
SMA患者的症状。
(来源:Cell DOI:10． 1016 / j． cell． 2012． 09． 011 温玉琴 编译)
525第 5 期 陈向东，等． HPLC法同时测定矮地茶配方颗粒中岩白菜素和槲皮苷