全 文 ：收稿日期:2009-09-15;　修订日期:2009-12-22
基金项目:国家自然科学基金(No.30500066)
作者简介:高　羽(1983-),男(汉族),江苏扬州人 ,现为南京中医药大学
药学院在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药及天然物活性成分研究
工作.
＊通讯作者简介:梁侨丽(1970-), 女(汉族),江西九江人 , 现任南京中医
药大学药学院副教授 ,硕士生导师 ,博士学位 ,主要从事中药及天然产物
活性成分研究工作.
大戟属 4种植物中大戟醇的含量测定
高　羽1 ,梁侨丽 1＊ ,戴传超 2 ,吴启南1 ,巢建国 1 ,蒋继宏3
(1.南京中医药大学 药学院 ,江苏 南京　210046;　2.南京师范大学 生命科学学院 ,江苏 南京　210097;
3.徐州师范大学 江苏省药用植物生物技术重点实验室 ,江苏 徐州　221116)
摘要:目的 建立大戟属植物中大戟醇(euphol)的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法 采用 RP-C18色谱柱 , 以乙腈为
流动相 , 流速 1.0 ml/min,检测波长为 217 nm。结果 进样量在 0.58 ～ 7μg范围内有良好的线性关系 , r=0.999 5;平均加
样回收率为 99.93%, RSD为 2.18%(n=5)。结论 该法简便准确 、灵敏度高 、重现性好 , 可用于大戟属植物中大戟醇的
含量测定。
关键词:高效液相色谱法;　大戟属;　大戟醇
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)05-1051-02
DeterminationofEupholinFourSpeciesofGenusEuphorbiabyHPLC
GAOYu1 , LIANGQiao-li1＊ ,DAIChuan-chao2 ,WUQi-nan1 ,CAOJian-guo1 ,JIANGJi-hong3
(1.SchoolofPharmacology, NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine, Nanjing210046, China;2.
SchoolofLifeScience, NanjingNormalUniversity, Nanjing210097 , China;3.KeyLaboratoryofBiotechnologyfor
MedicinalPlantsofJiangsuProvince, XuzhouNormalUniversity, Xuzhou221116, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodforthedeterminationofeupholintheplantofEuphorbiaLinn.Meth-
odsAchromatographiccolumnofDiamonsil-C18(C18 , 4.6mm×250mm, 5.0μm)wasused.Themobilephaseconsistedoface-
tonitri.Theflowratewas1.0 ml/minwithUVdetectionwavelengthat217 nm.ResultsAgoodlinearitywasobtainedwiththe
correlationcoeficientrangedof0.58 ～ 7μg(R=0.999 5).Theaveragerecoverywas99.93%, RSD=2.18%(n=5)Conclu-
sionThemethodissimple, accurate, sensitiveandwelrepeated.Itcanbewidelyappliedtodeterminethecontentofeupholinthe
plantsofEuphorbiaLinn.
Keywords:HPLC;　Euphorbia;　Euphol
　　大戟属 EuphorbiaLinn是大戟科(Euphorbiaceae)中最大的一
个属 , 全世界有二千余种 ,我国有八十多种 ,且新种仍在被发现。
该属植物有重要的药用价值 , 民间用于通便 、利尿 、治疗水肿 、结
核 、牛皮癣 、疥疮和无名肿毒 、抗肿瘤等 , 其化学成分主要有二萜 、
三萜 、黄酮和鞣质等 [ 1] 。 近些年大戟属植物化学成分含量分析
研究报道主要有:用分光光度法测定狼毒大戟水提物中总黄酮含
量 [ 2] , 以及利用 GC-MS测定甘遂中三萜化合物大戟醇(euphol)
和 tirucallol的含量等 [ 3] 。大戟醇是大戟属植物的特征性成分 , 文
献报道许多大戟属植物都含有大量的大戟醇 ,而用 HPLC法测定
大戟属植物中大戟醇的含量未见报道。 本实验利用从京大戟
EuphorbiapekinensisRupr.干燥根中分离纯化得到的大戟醇为标
准品 , 首次建立了测定大戟醇(euphol)的 HPLC法 , 并用建立的
分析方法测定了大戟属 4种植物京大戟 、狼毒大戟 、月腺大戟和
甘遂中大戟醇的含量的方法 ,可用于大戟属植物中大戟醇的含量
测定。
1　仪器与材料
美国 Waters公司高效液相色谱仪(Waters515型泵 , Waters
2996 PAD检测器 , WatersEmpower色谱工作站 , Waters色谱柱恒
温箱 , Waters717型自动进样器)。 Sartorious型 1/10万电子分析
天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。 KQ-500B超声波清洗器
(昆山超声仪器有限公司)。
大戟醇(euphol)对照品由本实验室自制 , 结构经波谱鉴定 ,
经 HPLC法测定纯度大于 98%。乙腈 、甲醇为 HPLC级(美国 Te-
dia公司),水为娃哈哈纯净水 , 其余试剂为分析纯。京大戟药材
采自南京郊区 ,经巢建国教授鉴定为 EuphorbiapekinensisRupr.的
新鲜根 ,洗净晒干用 , 狼毒大戟采自黑龙江齐齐哈尔郊区 ,经本校
药用植物教研室巢建国教授鉴定为 EuphorbiafischerianaSteud.
的新鲜根 ,洗净晒干用;月腺大戟药材采自南京郊区 ,经的巢建国
教授鉴定为 EuphorbiaebracteolataHayata.的新鲜根 ,洗净晒干用;
甘遂购自安徽药材市场 , 经巢建国教授鉴定为 Euphorbiakansui
T.N.LiouexT.P.Wang的干燥块根。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5
μm);流动相为乙腈;流速 1.0 ml· min-1;柱温 30℃;检测波长
217 nm。
2.2　对照品溶液的制备 精密称定大戟醇对照品适量 ,用甲醇溶
解 , 定容 ,制成 0.28mg· ml-1的对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备 4种药材粉末(过 60目筛)于烘箱中
(60℃)干燥至恒重 , 各取 0.5 g精密称定 , 置 50 ml具塞锥形瓶
中 , 精密加入甲醇 25 ml, 称重 , 超声提取 30 min, 放至室温 ,再称
重 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 ,过滤 , 弃去初滤液 ,取续滤液用
0.45 μm微孔滤膜过滤即为供试品溶液 ,备用。
2.4　线性关系考察 取上述对照品溶液以不同体积进样分析 , 分
别为 2, 4, 10, 20, 25 μl。记录各自峰面积 , 以峰面积(Y)对进样量
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5 时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期
(X, μg)进 行 线 性 回 归 分 析 , 得 回 归 方 程 为
Y=110 046X-54 607, r=0.999 5,表明大戟醇进样量在 0.58 ～
7μg与峰面积呈良好线性关系 , 色谱图见图 1。
2.5　精密度实验 取对照品溶液按上述色谱条件连续进样 5次 ,
每次 10μl,结果大戟醇峰面积的 RSD为 0.94%, 精密度良好。
2.6　稳定性实验 取供试品溶液分别在 0, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48 h
进样 10μl, 在上述色谱条件下测定 , 大戟醇峰面积的 RSD为
1.43%,表明样品溶液在 48h内性质稳定。
2.7　重复性试验 精密称取药材粉末 0.5 g, 称取 5份 , 按 “ 2.3”
项下操作制备供试液 , 进样 10 μl, 根据峰面积计算含量。结果大
戟醇含量的 RSD为 1.5% (n=5)。
2.8　加样回收实验 称取同一已知含量的京大戟药材粉末 5份 ,
每份约 0.5 g,每份精密加入一定量的大戟醇对照品 , 按 “ 2.3”项
下操作制备供试液 , 取供试液 , 进样 10 μl, 在上述色谱条件下测
定 , 计算回收率。结果见表 1。
表 1　回收率实验结果
编号 大戟醇量m/mg
加入量
m/mg
测得量
m/mg
回收率
(%)
平均值
(%) RSD(%)
1 7.744 7.500 15.358 101.52
2 7.763 7.500 15.405 101.89
3 7.778 7.500 15.016 96.51 99.93 2.18
4 7.741 7.500 15.179 99.17
5 7.728 7.500 15.269 100.55
2.9　样品测定 按 “ 2.3”项下方法制备供试品溶液 , 取 10μl, 进
样 , 按 “ 2.1”项下色谱条件测定大戟醇的含量。结果见表 2。代
表性色谱图见图 1。
表 2　供试品中大戟醇测定结果 mg· g-1
样品 产(采集)地 平均含量
京大戟 江苏南京 15.45
狼毒大戟 江苏南京 2.85
月腺大戟 黑龙江齐齐哈尔 0.48
甘遂 陕西 7.27
A-对照品　B-样品　 1.大戟醇
图 1　大戟醇对照品及样品HPLC图
3　讨论
3.1　提取条件的选择 以京大戟为代表性中药 , 根据测定目标化
合物大戟醇的理化性质 , 分别考察提取溶媒(90%甲醇 、 80%甲
醇 、甲醇)、提取方式(冷浸 、热回流 、超声提取)、溶剂量 、提取时
间 、提取次数 ,确定最佳提取条件为:以 50倍量甲醇超声提取 1
次 , 提取时间为 30min。此方法简便易行 , 测定时干扰少。
3.2　分离条件的选择 分析 HPLC二极管阵列紫外全波长扫描
图谱以及参考对照品的紫外光谱 , 确定 217 nm为大戟醇吸收峰
的检测波长 ,考察了 3种色谱柱:①Diamonsil-C18色谱柱(4.6
mm×250 mm, 5 μm);②AichromBond-1 C18色谱柱(4.6 mm×
150 mm, 5 μm);③ZorbaxExtend-C
18
色谱柱(250 mm×4.6 mm,
5 μm);3种流动相:①乙腈 -水(90∶10);②乙腈;③甲醇 ,进行
系统适用性试验 ,试验结果表明:在色谱条件 Diamonsil-C18色谱
柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 乙腈为流动相 , 流速 1.0 ml·
min-1 ,柱温为 30℃, 供试品中大戟醇得到较好分离 ,理论塔板数
不低于 4 000, 且分析时间较短。
3.3　4种大戟属植物中大戟醇含量的测定 从表 2中可以看出 ,
4种植物中大戟醇的含量差异很大 ,其中京大戟中含量最高 。已
有文献报道 , 大戟醇可以显著抑制炎性渗出增加及炎症组织中
TNFα、IL-6和 IL-1等炎症介质的释放而具有明显的抗炎作
用 [ 4, 5];大戟醇对十四烷酰佛波醇乙酸酯激活的爱 -巴病毒早期
抗原有强抑制作用 , 使含有该病毒的培养液中的 Raji细胞保持
很高的存活率 [ 6];此外 ,大戟醇还可以抑制犬血管平滑肌细胞的
增殖 , 可能具有一定的抗动脉粥样硬化活性 [ 7];大戟醇通过扩张
外周血管平滑肌表现有明显的降压活性 [ 8] 。大戟的药效是否与
大戟醇的含量有关 ,还有待于进一步深入的研究。
本研究用简单快捷的方法测定了 4种大戟属植物中大戟醇的
含量 ,它将为大戟醇的分离纯化及其药理作用的深入研究提供实
验依据 ,也为含大戟醇中药的开发和利用提供了一种新的思路。
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