全 文 ：收稿日期:2011 － 04 － 18
作者简介:齐洁(1987 －) ，女，在读硕士研究生，主要从事中药及制剂分析研究。
* 通讯作者:刘丽芳(1969 －) ，女，江西萍乡人，博士，教授，主要从事中药活性成分研究。E － mail:liulifang69@ 126． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2012． 01． 010
HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷的含量
齐 洁，万竹青，李默影，吴秋月，刘丽芳*
(中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室，江苏 南京 210009)
摘 要 目的:建立 HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷含量的方法。方法:采用 Diamonsil C18(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)
柱，流动相乙腈 － 0． 1%磷酸水溶液梯度洗脱，流速 1． 0 mL /min，检测波长 358 nm，柱温 30 ℃。结果:杨梅苷在
0． 088 － 0． 880 mg /mL内与峰面积呈良好线性关系，A = 36113C － 401． 56，r = 0． 9994;平均回收率为 102． 4%，RSD =
1． 9%(n = 9)。测得杨梅叶中杨梅苷含量为 1． 43%。结论:该测定方法准确，可靠，对于杨梅的进一步开发利用具
有重要的参考意义。
关键词 高效液相色谱法;杨梅叶;杨梅苷
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2012)01 － 0035 － 03
Determination of Myricitrin in Leaves of Myrica rubra
Sieb． et Zucc． by HPLC
Qi Jie，Wan Zhuqing，Li Moying，Wu Qiuyue，Liu Lifang
(State Key Laboratory of Natural Medicines，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China)
Abstract Objective:To develop an HPLC method for determination of myricitrin in leaves of Myrica
rubra Sieb． et Zucc． ． Methods:The samples were separated on a Diamonsil C18(150 mm × 4． 6 mm，5
μm)column with the mobile phase of acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid (gradient elution)． The flow
rate was 1． 0mL /min． The detection wavelength was 358 nm． The column temperature was 30 ℃ ． Re-
sults:The linear range of myricitrin was 0． 088 － 0． 880mg /mL，A = 36113C － 401． 56，r = 0． 9994． The
average recovery was 102． 4%，RSD = 1． 9% (n = 9)． The content of myricitrin in leaves of Myrica
rubra Sieb． et Zucc． was 1． 43% ． Conclusion:The method was accurate and reliable，which is useful
for the further exploring of this plant．
Key words HPLC;leaves of Myrica rubra Sieb． et Zucc．;myricitrin
杨梅叶为杨梅科杨梅属植物杨梅(Myrica rubra
Sieb． et Zucc．)的干燥叶，杨梅广泛分布于我国长
江以南的浙江、江苏、福建、广东、广西、江西、湖南等
省。其果实是深受人们喜欢的水果之一。根据《中
华本草》记载，杨梅叶味苦、微辛，性温，功能为燥湿
袪风，止痒，主治皮肤湿疹，外用适量，煎水洗便
可［1］。杨梅苷是杨梅叶中的有效成分之一，具有明
显的 DPPH 自由基清除能力［2］，对四氧嘧啶所致糖
尿病小鼠有降血糖作用［3］，且具有明显的降压［4］、
抑菌［5］等多种药理活性，在食品抗氧化方面也具有
很强的优越性。因此，本文采用 HPLC 法对杨梅叶
中的杨梅苷含量进行测定，该方法快速，简单，准确，
为杨梅苷的进一步开发利用提供科学的依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪;分析天平(Sarto-
rius) ;KH －250DB超声清洗仪(昆山禾创超声仪器
有限公司) ;RE － 5203 旋转蒸发器(上海亚容生化
仪器厂) ;乙腈(色谱纯，Merck 公司) ;纯净水(娃哈
哈纯净水) ;乙醇、磷酸(分析纯)。
杨梅苷对照品(购于上海同田生化技术有限公
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第 31 卷第 1 期
2012 年 2 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol． 31 No． 1
Feb． 2012
司，纯度大于 98%) ;杨梅叶(采自江西) ，经中国药
科大学刘丽芳教授鉴定为杨梅(Myrica rubra Sieb．
et Zucc．)的干燥叶。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Diamonsil C18(150 mm × 4． 6 mm，5
μm)柱;流动相:乙腈(A)－ 0． 1%磷酸水溶液(B)
梯度洗脱程序(见表 1) ;流速:1． 0 mL /min;检测波
长:358 nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μL。在该色谱
条件下，杨梅苷理论塔板数为 9750，杨梅苷与各峰
的分离度 R均大于 1． 5(见图 1、2)。
表 1 梯度洗脱程序
时间 0 min 10 min 15 min 20 min
A% 20 30 50 80
B% 80 70 50 20
图 1 杨梅苷对照品色谱图
图 2 样品色谱图
2． 2 对照品溶液的制备
精密称取杨梅苷对照品 4． 40 mg，置于 5 mL 量
瓶中，以 20% 乙腈超声溶解，定容，摇匀，配置成
0． 880 mg /mL，作为对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备
取杨梅叶粗粉 2． 5 g，精密称定，以 50 mL 50%
乙醇水浴回流提取 1 h，过滤后，滤渣再同法提取 2
次，合并提取液。将提取液减压回收乙醇后，用
20%乙腈溶解定容至 100 mL 量瓶中，摇匀后，过
0． 45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。
2． 4 标准曲线
精密吸取上述杨梅苷对照品溶液 0． 1，0． 2，
0． 4，0． 6，0． 8，1． 0 mL，分别置于 1 mL 量瓶中，加
20% 乙腈稀释至刻度，摇匀，分别配成 0． 088，
0． 176，0． 352，0． 528，0． 704，0． 880 mg /mL 的系列对
照品溶液;分别精密吸取上述不同浓度对照品溶液
20 μL注入色谱仪，按照上述色谱条件测定，以峰面
积(A)为纵坐标，杨梅苷浓度(C)为横坐标，绘制标
准曲线，计算得过原点的回归方程为 A = 36113C －
401． 56，r = 0． 9994，表明杨梅苷浓度在 0． 088 ～
0． 880 mg /mL内与峰面积呈良好线性关系。
2． 5 精密度试验
精密吸取对照品溶液 20 μL，在上述色谱条件
下，重复进样 6 次，测定杨梅苷峰面积，RSD =
0． 5%，表明精密度良好。
2． 6 重复性试验
取同一批杨梅叶样品，平行称定 6 份，按照供试
品溶液制备方法制备，每份精密吸取 20 μL，测定峰
面积并计算杨梅苷的含量，RSD = 2． 8%，表明该方
法重复性较好。
2． 7 稳定性试验
取同一供试品溶液分别在 0，1，3，6，12，24 h 测
定，进样 20 μL，测定杨梅苷峰面积，RSD =1． 9%，表
明样品在 24 h内稳定。
2． 8 回收率试验
取已测定杨梅苷含量的杨梅叶适量，精密称定
9 份，每 3 份为一组，分别加入样品中所含杨梅苷量
的 80%，100%，120%对照品，按照供试品溶液的制
备方法制备后，取续滤液 20 μL进行测定，所得平均
回收率为 102． 4%，RSD =1． 6%。结果见表 2。
2． 9 样品测定
按照上述条件测定样品，外标法计算得杨梅叶
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 31 卷
中杨梅苷的平均含量为 1． 43%(n = 3)。
表 2 回收率试验结果(n = 9)
样品量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD%
0． 2000 2． 96 2． 37 5． 40 102． 6 102． 4 1． 6
0． 2004 2． 97 2． 38 5． 44 103． 8
0． 2002 2． 97 2． 37 5． 42 103． 5
0． 1999 2． 96 2． 96 5． 90 99． 0
0． 1998 2． 96 2． 96 5． 93 100． 2
0． 2003 2． 97 2． 97 5． 95 100． 4
0． 2000 2． 96 3． 56 6． 67 104． 1
0． 2001 2． 97 3． 62 6． 72 103． 8
0． 2005 2． 97 3． 62 6． 73 103． 6
3 讨 论
实验中曾对提取条件进行了优化，通过正交试
验法考察了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数
对杨梅苷含量的影响，并经验证得到最优提取条件
为 20 倍 50%乙醇提取 1h，提取 3 次。
杨梅苷具有多种药理作用，在临床上具有广泛
的应用价值。杨梅叶在我国长江以南地区分布广
泛，为可再生资源，且其中杨梅苷含量高，本次实验
为杨梅叶的合理开发利用奠定了一定的理论基础。
参考文献:
［1］ 中华本草编委会．中华本草［M］．上海:上海科学技术出版社，
1999:367 － 369．
［2］ 赵 丽，徐淑萍，张 蕾，等．杨梅素及类似物乙酰胆碱酯酶抑
制和抗氧化活性研究［C］/ /2010 年中国药学大会暨第十届中
国药师周论文集，2010．
［3］ 张 立．杨梅苷对四氧嘧啶模型小鼠降血糖作用的初步研究
［J］．中国现代药物应用，2009，3(15) :29 － 30．
［4］ 张秀桥，沈 伟，陈树和，等．大叶蛇葡萄提取物对肾性高血压
大鼠降压作用的实验研究［J］． 中国医院药学杂志，2008，28
(24) :2095．
［5］ 张绍勇，李 桥，陈安良．杨梅叶抑菌活性成分初步分离与鉴
定［J］．农药学学报，2011，13(2) :
櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚
149 － 154．
(上接第 34 页)
醚、乙酸乙酯萃取，萃取完全后于水浴锅上挥去有机
溶剂，将处理的样品分组:石油醚组、乙酸乙酯组、醇
提液组;称取 0． 5 g白花蛇舌草粉末，用 50 mL水回
流提取 2 h，定容至 50 mL，得到水提液组。
2． 2 化感活性生物测定方法
在培养皿中加 2 层滤纸，每个放入 50 粒白花蛇
舌草种子，按上面第 8 组的条件定时浇灌相应样品
液，待发芽完全，计算种子的发芽率。
2． 3 实验结果
不同的处理组对种子有不同的影响，其结果见
表 4。
表 4 白花蛇舌草不同部位提取液对种子发芽的影响
处理
开始发芽时间 /d
1 2 3
平均发芽时间 /d
发芽率 /%
1 2 3
平均发芽率 /%
石油醚组 6 5 6 5． 7 74 78 66 72． 6
乙酸乙酯组 9 8 7 7． 6 48 52 50 50
醇提组 11 10 8 9． 7 36 28 40 35
水提液组 11 9 9 9． 7 34 40 26 33
空白组 5 4 5 4． 5 72 66 76 71
表 4 数据表明，不同部位的白花蛇舌草的提取
液对种子萌发具有不同的影响，除石油醚组外均出
现了抑制作用。
3 讨 论
3． 1 通过正交实验寻找到白花蛇舌草种子发芽的
最佳条件，即在 25 ℃，24 h、20%的光照强度下、采
用机械破碎贮藏 12 个月的种子发芽率最高，通过实
验发现刚采收的种子发芽率较低，这可能是因为种
子需一个后熟期，时间大约为 1 年。
3． 2 通过 SPSS统计分析:光照强度的变化对种子
发芽具有显著性，随着光照强度的增加种子发芽率
升高，并且在 60%时达到最大，随后又降低。
3． 3 通过化感部位的研究发现石油醚组对种子发
芽起到了促进作用，醇提组、水提液和乙酸乙酯组均
出现了明显的抑制，作用大小:水提组 ＞醇提组 ＞乙
酸乙酯组，白花蛇舌草化感作用可能是多部位共同
作用的结果。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中国药典(一部) ［M］． 化学工业出版社:
2005:附录 22．
［2］ 江苏新医学院．中药大辞典:上册［M］． 1997．
［3］ 邰淑彩，孙韫玉，何娟娟，等．应用数理统计［M］． 2 版．武汉:武
汉大学出版社． 2005:附录二．
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第 1 期 齐 洁，等:HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷的含量