全 文 ：杨梅叶多酚的自由基清除活性与防护 DNA损伤的研究
陈 卫 1，2 沈 洋 1 聂 颢 1 励建荣 3
（1浙江工商大学食品与生物工程学院 杭州 310035
2浙江大学生物系统工程与食品科学学院 杭州 310058
3渤海大学化学化工与食品安全学院 辽宁锦州 121013）
摘要 基于超声辅助提取技术，采用单因素和正交试验，优化杨梅叶多酚的提取工艺。结果表明：杨梅叶多酚的
最优提取条件是：温度 40 ℃，提取时间 45 min，乙醇体积分数 50%，料液比为 1∶25。 在此条件下，杨梅叶多酚的
得率为 6.45 mg/g，是优化前的 2.7 倍。 在此基础上研究了杨梅叶多酚的自由基清除活性，结果显示：杨梅叶多酚
的总抗氧化能力等价于 0.57 mg trolox，且多酚清除 DPPH 自由基、ABTS 自由基、超氧阴离子、羟自由基的 IC50
分别为 11.04，4.28，94.1，28.75 μg/mL。对杨梅叶多酚对神经胶质细胞 DNA 损伤的保护作用的研究表明，过氧亚
硝基阴离子（OONO-）能引起神经胶质细胞的 DNA 损伤（损伤率达 43.8%）和细胞毒性（细胞存活率为 49.5%），
而 15 μg/mL 杨梅叶多酚能显著抑制过氧亚硝基阴离子引发的 DNA 损伤（损伤率 24.1%）和细胞毒性（细胞存活
率 75.7%）。
关键词 杨梅叶多酚； 自由基； DNA 损伤； 细胞毒性
文章编号 1009-7848（2014）03-0009-08
植物多酚又称植物单宁， 是一类广泛存在于
植物中的多元酚类化合物[1]。多酚化合物是一类良
好的抗氧化剂， 其含有的酚羟基是优良的氢或中
子的给予体，能显著清除机体中的自由基。自由基
被认为是引起人体衰老和某些慢性疾病发生的原
因之一， 当人体内的自由基产生过多或清除过慢
时，就会转而攻击各种细胞器官并使之受到损伤，
从而加速机体的衰老过程并诱发各种疾病[2]。
近 30 年以来，随着天然产物分离纯化技术的
发展， 人类已经从植物中分离鉴定了上千种多酚
化合物，并对它们进行了广泛的药理学研究，结果
发现多酚类化合物具有多方面的药理作用， 除常
见的抗氧化、抗菌、消炎外，多酚还表现出抗肿瘤、
抗突变、抗变态反应、抗病毒等多种生物活性[3-4]。
杨梅（Myrica rubra Sieb. et Zucc.）属杨梅科
杨梅属植物，是我国的特色果树之一，在我国东南
部地区已经有 2000 多年的种植历史。 杨梅的果
实、树叶和树皮均可入药，具有较高的经济价值。
古代医书记载杨梅叶味苦、微辛、性温，可用于治
疗腹泻、黄胆肝炎、淋巴结核、慢性咽喉炎等疾病。
浙江省是杨梅种植大省， 为调节生长与结实的关
系，促进杨梅的持续、优质、高产，每年都需对杨梅
树进行整形修剪， 因而产生大量废弃杨梅枝叶 [5]。
开发利用杨梅叶资源， 不仅解决了废物处理所带
来的环境污染问题，而且增加了杨梅的产业价值。
本文优化了杨梅叶多酚的提取工艺， 并对杨梅叶
多酚的自由基清除活性、干预神经胶质细胞 DNA
损伤进行了研究， 以期为综合开发利用杨梅叶资
源提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
杨梅叶，2012 年 3 月采集于宁波余姚， 洗净
干燥后于-20 ℃储藏。
Folin-Ciocalteu（福林酚）试剂、Trolox、DPPH、
ABTS、MTT，购自美国 Sigma 公司；过氧亚硝基阴
离子（OONO-），购自美国 Calbiochem 公司；其他试
剂均为国产分析纯。
收稿日期： 2013-03-07
基金项目： 教育部博士点基金（20103326120006）；教育部
科学技术研究重点项目（210086）
作者简介： 陈卫，男，1980 年出生，博士，副教授
Vol． 14 No． 3
Mar． 2 0 1 4Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
中 国 食 品 学 报第 14 卷 第 3 期
2 0 1 4 年 3 月
中 国 食 品 学 报 2014 年第 3 期
1.2 试验仪器
循环水式多用真空泵， 郑州长城科工贸有限
公司；电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公
司；微量分析天平，上海精科仪器有限公司；Infi-
nite M200 酶标仪， 瑞士 TECAN 公司；LGJ-10 冷
冻干燥机，北京四环科学仪器厂；旋转蒸发仪 RE-
2000，上海亚荣生化仪器厂；低温冷却液循环泵，
杭州大卫科教仪器有限公司。
1.3 试验方法
1.3.1 提取操作流程 杨梅叶→干燥→粉碎→60
目过筛→石油醚脱脂→烘干→超声波水浴提取→
离心→上清液浓缩→冷冻干燥→测定
1.3.2 杨梅叶多酚得率计算
1） 标准曲线绘制 精确称取没食子酸标准
品 1 000 mg， 用水溶解并定容到 100 mL， 得 10
mg/mL 的标准品溶液。 精密吸取标准品溶液 0.1
mL 于 10 mL 容量瓶中，定容到 10 mL，得 0.1 mg/
mL的对照品标准溶液。 将 0.1 mg/mL的标准品溶
液分别取 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL 加入 10 mL
容量瓶， 先加入 5 mL 蒸馏水， 再依次加入 1 mL
Folin-Ciocalteau 试剂， 摇匀， 待 5 min 后加入 2
mL 15% Na2CO3溶液定容到 10 mL， 室温下反应
2 h后测定 760 nm处的吸光值（A）。以没食子酸浓
度 X为横坐标，A值为纵坐标绘制标准曲线，得没
食子酸回归方程 A=0.0549X+0.065，R2=0.9975。
2） 得率测定 取适量待测样品于 10 mL 容
量瓶中， 先加入 5 mL 蒸馏水， 再依次加入 1 mL
Folin-Ciocalteu 试剂，摇匀后等待 5 min，再加人 2
mL Na2CO3，最后加蒸馏水定容到 10 mL，室温下
反应 2 h 后，于 760 nm 处测定吸光值，根据标准
曲线计算总多酚，以没食子酸当量表示。得率的计
算方法：
W= C / M
式中，W——多酚得率 （mg/g）；C——提取物
多酚的量 （mg），M——杨梅叶粉末质量（g）。
1.3.3 杨梅叶多酚样品的制备 精密称取一定量
石油醚脱脂处理后的杨梅叶粉末， 在最优工艺条
件下提取， 收集提取液， 用旋转蒸发仪浓缩提取
液， 再用冷冻干燥机冻干浓缩液制备杨梅叶多酚
样品， 将样品稀释成适当浓度进行抗氧化活性测
定。
1.3.4 DPPH 自由基清除能力的测定 二苯代
苦味酰基自由基（DPPH）是一种稳定的自由基，若
受试物能将其清除， 则提示受试物具有降低羟自
由基、烷自由基、过氧化自由基、脂质过氧化的作
用。 DPPH 在 517 nm 处有强吸收，其乙醇水溶液
呈深紫色，加入受试物后，在 517 nm 处可动态监
测其对 DPPH的清除效果。
根据参考文献的方法[6]，在适量的 0.1 mmol/L
DPPH 溶液中加入适量的样品液，充分混匀，在室
温条件下反应 30 min（避光），然后测定 517 nm 波
长的吸光值， 记为 Ai； 以等量的双蒸水代替样品
液，然后测定 517 nm波长的吸光值，记为 A0，作为
空白对照。
DPPH自由基清除率（%）=[（A0-Ai）/A0]×100%
以抗氧化剂 Trolox作为阳性对照。
1.3.5 ABTS·+自由基清除能力的测定 ABTS[2，
2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）]法可用于
测定生物样品的抗氧化能力。ABTS经活性氧氧化
后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS·+，若受
试物能与 ABTS·+发生反应而使反应体系褪色，则
提示受试物具有降低 ABTS·+自由基的活性。
根据参考文献的方法 [7]，配制 ABTS·+工作液，
在适量的 ABTS·+工作液中加入适量的样品液，充
分混合，室温条件下反应 6 min（避光），测定 734
nm下的吸光度 Ai，以等量的双蒸水代替样品液做
空白，记其吸光度为 A0。
ABTS·+自由基清除率（%）=[（A0-Ai）/A0]×100%
以 Trolox作为阳性对照。
1.3.6 羟基自由基清除能力的测定 H2O2/Fe2+体
系可通过 Fenton 反应产生羟自由基，总反应可用
下式表示：Fe2++H2O2-Fe3++OH-+OH·。 邻二氮菲-
Fe2+水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲-Fe3+后，其
536 nm最大吸收峰消失。根据上述原理，以 A536变
化反映羟自由基的氧化作用。
根据参考文献的方法[8]，取一定量的邻二氮菲
无水乙醇溶液，依次加入适量的 0.2 mol/L 磷酸缓
冲溶液（pH 7.40）和双蒸水，充分混匀后，再加入
适量的 5 mmol/L硫酸亚铁溶液（FeSO4），混匀后加
入适量的 0.001％双氧水，于 37 ℃水浴 60 min（避
光），在 536 nm 测其吸光值，即损伤管的吸光值
A损。
10
第 14 卷 第 3 期
未损伤管以等量的双蒸水代替损伤管中
0.001％双氧水，536 nm测定 A 未损。 样品管以等
量的样品溶液代替损伤管中的双蒸水， 测得样品
管的吸光值 A 样。
羟自由基清除率（%）=（A 样-A 损）/（A 未-A 损）×
100%
以维生素 C作为阳性对照。
1.3.7 超氧阴离子自由基清除能力的测定 模拟
机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统， 产生超
氧阴离子自由基 O2·-， 加入电子传递物质及 gress
氏显色剂，使反应系统呈现紫红色，可用分光光度
计测其吸光度， 当被测样本中含有 O2·-抑制剂时，
则测定管的吸光度低于对照管的吸光度。 本文采
用南京建成生物工程研究所的抗超氧阴离子自由
基试剂盒测定。
1.3.8 抗氧化能力的测定 铁离子还原法（ferric
reducing antioxidant power assay： FRAP assay），
是对试样总抗氧化活性的测定， 其基本原理是
Fe3+-三吡啶三吖嗪（tripyridy-triazine，TPTZ）可被
试样中还原物质还原为 Fe2+而呈现蓝色， 在 593
nm 处有最大吸光度，根据吸光度大小计算出试样
的抗氧化活性。
根据参考文献的方法 [9]，在适量的 FRAP 试液
中加入适量的样品业或 Trolox（阳性对照），充分
混匀， 然后在 37 ℃水浴条件下反应 30 min （避
光），测定 593 nm处的吸光值。
用 Trolox当量表示样品的抗氧化能力。
1.3.9 DNA 损伤测定 参考文献的方法 [10]，制备
大鼠原代神经胶质细胞， 用含 10%胎牛血清的
DMEM培养基进行培养。 在含有不同浓度的杨梅
叶多酚（0～25 μg/mL）的条件下，分别用过氧亚硝
基阴离子（500 μmol/L）处理神经胶质细胞 12 h，用
胰蛋白酶消化细胞，1 000 r/min离心收集细胞。 将
收集的细胞按照参考文献的方法 [11]进行单细胞凝
胶电泳测定。 电泳后，用溴化乙锭染色，使用荧光
显微镜进行观察，并用彗星分析系统，定量分析不
同样品处理后的细胞的 DNA损伤率。
1.3.10 细胞存活率测定 （MTT 法） 按照参考文
献的方法[12]，采用 MTT法检测细胞的存活率。将细
胞接种到 96 孔细胞培养板中（浓度为 5×103个细
胞/孔），孵育 24 h 后；在含有不同浓度的杨梅叶多
酚（0～25 μg/mL）的条件下，分别用过氧亚硝基阴
离子（500 μmol/L）处理神经胶质细胞 12 h，然后用
MTT（0.5 mg/mL）孵育 4 h。 生成的沉淀物溶解于
150 μL 的 DMSO 中， 用酶标仪检测 490 nm 处的
吸光度。
细胞存活率（%）=[A 样品/A 空白]×100%
1.4 数据统计分析
所有试验均重复 3 次以上， 采用 SPSS 16.0
软件进行方差分析，显著性水平设置为 P＜0.05。
2 结果与分析
2.1 单因素试验
2.1.1 提取溶剂对杨梅叶多酚得率的影响 在料
液比 1∶15、温度 40℃，提取时间 45 min 的条件下，
研究不同提取溶剂（乙醇、丙酮、甲醇 3 种常规提
取多酚的溶剂）对多酚得率的影响，确定最佳的提
取试剂。 如图 1a 所示，乙醇、丙酮、甲醇对杨梅叶
多酚的提取率分别为 3.76、3.67、3.23 mg/g。综合溶
剂价格、安全性等方面考虑，选取乙醇作为最佳提
取溶剂。
2.1.2 乙醇浓度对杨梅叶多酚得率的影响 将乙
醇体积分数设为 30% 、40％ 、50％ 、60％ 、70％ 、
80%、90%、100%， 考察乙醇浓度对多酚得率的影
响。结果表明采用 50%乙醇提取，杨梅叶多酚得率
最高，达到 4.72 mg/g（图 1b）。 根据单因素试验结
果，选取 50%、60%、70% 3个水平进行正交试验。
2.1.3 提取时间对杨梅叶多酚得率的影响 将提
取时间分别设为 15、30、45、60、75、90、105、120
min，考察提取时间对多酚得率的影响。如图 1c所
示，提取时间为 45 min 时，杨梅叶多酚得率最高，
达到 4.46 mg/g。综合提取得率和能耗等因素，选取
30、45、60 min 3个水平进行正交试验。
2.1.4 温度对杨梅叶多酚得率的影响 将温度设
为 30、40、50、60、70 和 80 ℃， 考察提取温度对多
酚得率的影响。 结果表明提取温度为 40 ℃时，杨
梅叶多酚得率最高，达到 4.43 mg/g（图 1d）。 综合
提取得率和能耗等因素，选取 30、40、50℃ 3 个水
平进行正交试验。
2.1.5 料液比对杨梅叶多酚得率的影响 将料液
比设为 1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25 和 1∶30， 考察料
液比对多酚得率的影响。 结果表明料液比为 1∶25
杨梅叶多酚的自由基清除活性与防护 DNA损伤的研究 11
中 国 食 品 学 报 2014 年第 3 期
时，杨梅叶多酚得率最高，达到 4.79 mg/g（图 1e）。
综合提取得率和能耗等因素， 选取 1∶5，1∶15，1∶25
3个水平进行正交试验。
5
4
3
2
1
0
乙醇 丙酮 甲醇
杨
梅
叶
多
酚
得
率
/m
g·
g-
1
（a）
5
4
3
2
1
0
15 30 45 60 75 90 105 120
杨
梅
叶
多
酚
得
率
/m
g·
g-
1
5
4
3
2
1
0杨
梅
叶
多
酚
得
率
/m
g·
g-
1
1∶5 1∶10 1∶15 1∶20 1∶25 1∶30
料液比（g∶mL）
摄取时间/min
5
4
3
2
1
0杨
梅
叶
多
酚
得
率
/m
g·
g-
1
40 50 60 70 80 90 100
乙醇体积分数/%
5
4
3
2
1
0
30 40 50 60 70 80
提取温度/℃
杨
梅
叶
多
酚
得
率
/m
g·
g-
1
（b）
（c） （d）
（e）
注：（a）提取溶剂对多酚得率的影响； （b）乙醇体积分数对多酚得率的影响； （c）提取时间对多酚得率的影响； （d）提取温度
对多酚得率的影响； （e）料液比对多酚得率的影响。
图 1 杨梅叶多酚提取工艺的优化
Fig.1 Optimization of bayberry leaf polyphenol extraction
2.2 正交试验
在单因素试验的基础上，选取提取温度（正交
试验中代码为 A，后面相同）、提取时间（B）、乙醇
浓度（C）和料液比（D）4 个因素进行正交试验，每
组试验做 5 个平行。 结果表明影响多酚得率的因
素主次顺序为 C（乙醇体积分数）>B（提取时间）>
A（提取温度）>D（料液比），最优组合为 A2B2C1D3，
即温度 40 ℃、 提取时间 45 min、 乙醇体积分数
50%、料液比为 1∶25（表 1）。
取适量杨梅叶粉末在最优条件下做 3 组验证
试验，杨梅叶多酚的得率为 6.45 mg/g，是优化前的
2.7倍，说明由正交试验筛选出来的工艺条件是稳
定可靠的。
2.3 抗氧化试验结果
2.3.1 杨梅叶多酚的总抗氧化能力 首先采用铁
离子还原法（FRAP 法）检测杨梅叶多酚的总抗氧
化能力， 以 Trolox 作为阳性对照， 测得杨梅叶多
酚（每毫克干重）的总抗氧化能力相当于 0.57 mg
Trolox，表明杨梅叶多酚具有较好的抗氧化活性。
2.3.2 杨梅叶多酚清除 DPPH 自由基的能力 我
12
第 14 卷 第 3 期
们进一步采用 DPPH 等多种自由基检测方法分别
检测杨梅叶多酚的抗氧化活性。 如图 2a 所示，在
低浓度范围内， 随着杨梅叶多酚浓度的增大， 对
DPPH 自由基的清除率呈线性增长， 当多酚质量
浓度达到 25 μg/mL 时，对自由基的清除率趋于平
缓。 通过计算杨梅叶多酚对 DPPH 自由基清除率
的半数抑制浓度， 可得 IC50为 8.98 μg/mL， 略低
于阳性对照 Trolox（IC50 为 11.04 μg/mL），表明杨
梅叶多酚具有较好的清除 DPPH自由基的活性。
2.3.3 杨梅叶多酚清除 ABTS·+自由基的能力
杨梅叶多酚对 ABTS·+自由基的清除能力如图 2b。
结果显示，在低浓度范围内，随着杨梅叶多酚浓度
的增大， 对 ABTS·+自由基的清除率呈线性增长，
当多酚质量浓度达到 10 μg/mL 时，自由基的清除
率趋于平缓。 通过计算杨梅叶多酚对 ABTS·+自由
基清除率的半数抑制浓度， 可得 IC50 为 4.28 μg/
mL， 略低于阳性对照 Trolox（IC50为 2.78 μg/mL），
表明杨梅叶多酚具有较好的清除 ABTS·+自由基
的活性。
2.3.4 杨梅叶多酚清除超氧阴离子自由基的能力
杨梅叶多酚对超氧阴离子自由基的清除能力如图
2c。 结果表明，在低浓度范围内，随着杨梅叶多酚
浓度的增大， 对超氧阴离子自由基的清除率呈线
性增长。 通过计算杨梅叶多酚对超氧阴离子自由
基清除率的半数抑制浓度， 可得 IC50为 94.16 μg/
mL。
阳性对照维生素 C清除超氧阴离子自由基的
能力与浓度相关，线性方程为 Y=1.2738X+32.001，
相关系数 R2=0.9907，IC50为 14.13 μg/mL。 上述结
果表明杨梅叶多酚对超氧阴离子自由基具有一定
的清除能力。
2.3.5 杨梅叶多酚清除羟自由基的能力 杨梅叶
多酚对羟自由基的清除能力如图 2 d。 结果显示，
在低浓度范围内， 随着杨梅叶多酚浓度的增大，
自由基的清除率呈线性增长。 通过计算杨梅叶多
酚对超氧阴离子自由基清除率的半数抑制浓度，
可得 IC50为 28.75 μg/mL。
阳性对照维生素 C清除羟自由基的能力与浓
度相关，线性方程为 Y=5.6857X+1.7337，相关系数
R2=0.9914，IC50为 8.49 μg/mL。 上述结果表明杨梅
叶多酚对羟自由基具有较好的清除能力。
序号 A/℃ B/min C/% D/g∶mL 杨梅叶多酚提取率/mg·g-1
1 1（30） 1（30） 1（50） 1（1∶5） 4.55 ± 0.07
2 1 2（45） 2（60） 2（1∶15） 4.53 ± 0.05
3 1 3（60） 3（70） 3（1∶25） 2.67 ± 0.05
4 2（40） 1 2 3 5.31 ± 0.04
5 2 2 3 1 4.29 ± 0.06
6 2 3 1 2 4.71 ± 0.05
7 3（50） 1 3 2 3.85 ± 0.06
8 3 2 1 3 5.21 ± 0.09
9 3 3 2 1 3.05 ± 0.02
K1 11.75 13.71 14.47 11.89
K2 14.30 14.02 12.89 13.09
K3 12.11 10.44 10.81 13.19
k1 3.92 4.56 4.82 3.96
k2 4.77 4.67 4.29 4.36
k3 4.04 3.48 3.61 4.39
R 0.85 1.19 1.22 0.43
表 1 L9（34）试验方案和结果
Table 1 L9（34） Trial schemes and test results
杨梅叶多酚的自由基清除活性与防护 DNA损伤的研究 13
中 国 食 品 学 报 2014 年第 3 期
100
80
60
40
20
0
1 2.5 5 10 25 50
杨梅叶多酚/μg·mL-1
DP
PH
自
由
基
清
除
率
/%
80
60
40
20
0
1 2.5 5 10 25 50 100 200
杨梅叶多酚/μg·mL-1
超
氧
阴
离
子
自
由
基
清
除
率
/%
（a）
（c）
100
80
60
40
20
0
1 2.5 5 10 25 50
杨梅叶多酚/μg·mL-1
（b）
80
60
40
20
0
AB
TS
·
+ 自
由
基
清
除
率
/%
羟
自
由
基
清
除
率
/%
1 2.5 5 10 25 50 100
杨梅叶多酚/μg·mL-1
（d）
注：（a）清除 DPPH 自由基的能力； （b）清除 ABTS·+自由基的能力； （c）清除超氧阴离子自由基的能力； （d）清除羟自由基的能力。
图 2 杨梅叶多酚的抗氧化活性
Fig.2 Antioxidant activities of bayberry leaf polyphenol
2.4 杨梅叶多酚干预 DNA损伤的能力
过氧亚硝基阴离子（OONO-）是生物体内产生
的一种强氧化剂和细胞毒性物质， 它在体内的过
度积聚会导致神经退行性疾病的发生 （如老年痴
呆症） [13]。 基于杨梅叶多酚具有较好的抗氧化能
力， 因此我们推测杨梅叶多酚可能具有干预过氧
亚硝基阴离子引起的 DNA 损伤和细胞毒性。 如图
3a 所示，过氧亚硝基阴离子作用神经胶质细胞，能
引起神经胶质细胞的 DNA 损伤， 与对照相比，损
伤率达到 43.8%；进一步研究发现，在低浓度范围
内，随着杨梅叶多酚浓度的增大， 对 DNA 损伤的
抑制率呈线性增长，15 μg/mL 的杨梅叶多酚就能
显著抑制 DNA 的损伤（损伤率 24.1%）。 我们进一
步采用 MTT 法检测过氧亚硝基阴离子对神经胶
质细胞的毒性， 结果显示过氧亚硝基阴离子对神
经胶质细胞具有较强的毒性，与对照相比，过氧亚
硝基阴离子作用的神经细胞存活率为 49.5%；而
杨梅叶多酚在低浓度范围内， 就能剂量依赖性地
抑制过氧亚硝基阴离子引起的细胞毒性，15 μg/
mL 的杨梅叶多酚就能显著抑制细胞毒性（细胞存
活率 75.7%）（图 3b）。上述结果证实了杨梅叶多酚
具有干预过氧亚硝基阴离子引起的 DNA 损伤和
细胞毒性。
60
40
20
0
DN
A
损
伤
率
/%
多酚/μg·mL-1
ONOO-/500 μmol/L
- - 5 15 25
- + + + +
100
50
0
多酚/μg·mL-1
ONOO-/500 μmol/L
- - 5 15 25
- + + + +
（a） （b）
细
胞
存
活
率
/%
注：（a）对 DNA 损伤的干预作用； （b）对细胞毒性的干预作用。
图 3 杨梅叶多酚干预过氧亚硝基阴离子（OONO-）引起的 DNA 损伤和细胞毒性
Fig.3 Bayberry leaf polyphenol protects against OONO- induced DNA damage and cytotoxicity
14
第 14 卷 第 3 期
3 结论
1） 本文通过单因素试验结合正交试验优化
了杨梅叶多酚提取工艺， 正交试验结果表明影响
多酚得率的主次因素顺序为乙醇浓度>提取时间>
提取温度>料液比，最优提取条件为温度 40 ℃，提
取时间 45 min， 乙醇体积分数 50%， 料液比为 1∶
25；在此条件下，杨梅叶多酚的得率为 6.45 mg/g，
是优化前的 2.7倍。
2） 杨梅叶多酚清除自由基活性的研究结果
显示：杨梅叶多酚的总抗氧化能力等价于 0.57 mg
trolox， 且多酚清除 DPPH 自由基的 IC50 为 11.04
μg/mL， 清除 ABTS 自由基的 IC50 为 4.28 μg/mL，
清除超氧阴离子的 IC50=94.16 μg/mL，清除羟自由
基的 IC50为 28.75 μg/mL。
3） 过氧亚硝基阴离子（OONO-）能引起神经
胶质细胞的 DNA 损伤（损伤率达到 43.8%）和细
胞毒性 （细胞存活率为 49.5%）；15 μg/mL 的杨梅
叶多酚就能显著抑制过氧亚硝基阴离子（OONO-）
引发的 DNA 损伤（损伤率 24.1%）和细胞毒性（细
胞存活率 75.7%）。
参 考 文 献
[1] 谭仁祥. 植物成分分析[M]. 北京：科学出版社， 2002： 514-528.
[2] Barry Halliwell. The wanderings of a free radical[J]. Free Radical Biology & Medicine， 2009， 46（5）： 531-542.
[3] Ioana Ignat， Irina Volf， Valentin I. Popa. A critical review of methods for characterisation of polyphenolic com-
pounds in fruits and vegetables[J]. Food Chemistry， 2011， 126（4）： 1821-1835.
[4] 张欣， 赵新淮. 几种多酚化合物抗氧化性的不同化学评价及相关性分析[J]. 食品科学， 2008， 29（10）： 85-89.
[5] 金志凤， 邓睿， 黄敬峰. 基于 GIS 的浙江杨梅种植区划[J]. 农业工程学报， 2008， 24（8）： 214-218.
[6] Saeedeh Arabshahi-Delouee， Asna Urooj. Antioxidant properties of various solvent extracts of mulberry （Morus indi-
ca L.） leaves[J]. Food Chemistry， 2007， （102）： 1233-1240.
[7] Fang Zhongxiang， Zhang Yuhuan， Lü Yuan. Phenolic compounds and antioxidant capacities of bayberry juices [J].
Food Chemistry， 2009， （113）： 884-888.
[8] Li Yanhong， Jiang Bo， Zhang Tao. Antioxidant and free radical-scavenging activities of chickpea protein hydrolysate
（CPH）[J]. Food Chemistry， 2008， （112）： 444-450.
[9] Zhou Shaohuan， Fang Zhongxiang， Lü Yuan. Phenolics and antioxidant properties of bayberry（Myrica rubra Sieb. et
Zucc.）pomace[J]. Food Chemistry， 2009， （112）： 394-399.
[10] Kim WK， Pae YS. Involvement of N-methyl-d-aspartate receptor and free radical in homocysteine-mediated toxicity
on rat cerebellar granule cells in culture[J]. Neuroscience Letter， 1996， 216： 117-120.
[11] Chen Wei， Li Yudong， Li Jianrong et al. Myricetin affords protection against peroxynitrite-mediated DNA damage
and hydroxyl radical formation[J]. Food and Chemical Toxicology， 2011， 49： 2439-2444.
[12] Chen Wei， Zhao Zhao， Li Ling et al. Hispolon induces apoptosis in human gastric cancer cells through a ROS-
mediated mitochondrial pathway[J]. Free Radical Biology & Medicine， 2008， 45： 60-72.
[13] Vauzour David， Ravaioli Giulia， Vafeiadou Katerina et al. Peroxynitrite induced formation of the neurotoxins 5-S-
cysteinyl-dopamine and DHBT-1： Implications for Parkinson’s disease and protection by polyphenols[J]. Archives of
Biochemistry and Biophysics， 2008， 476（2）： 145-151.
杨梅叶多酚的自由基清除活性与防护 DNA损伤的研究 15
中 国 食 品 学 报 2014 年第 3 期
Free Radical Scavenging and DNA Damage Protection Activities of
Bayberry Leaf Polyphenol
Chen Wei1，2 Shen Yang1 Nie Hao1 Li Jianrong3
（1College of Food Science and Biotechnology， Zhejiang Gongshang University， Hangzhou 310035
2College of Biosystem Engineering and Food Science， Zhejiang University， Hangzhou 310058
3College of Chemical Engineering and Food Safety， Bohai University， Jinzhou 121013， Liaoning）
Abstract This study investigated the extraction process of polyphenol from bayberry leaf. According to the single
factor and the orthogonal experiment， the optimum conditions for extraction were as follows： water bath at 40 ℃， 50％
ethanol， ultrasonic extracting for 45 min and the material-liquid ratio of 1∶25 （g∶mL）． Under this condition， the polyphe-
nol can be arrived to 6.45 mg/g， which is 2.7 times as optimization before. Further study indicated that the total antioxi-
dant activity of polyphenol equaled 0.57 mg trolox， moreover， polyphenol can significantly scavenge DPPH（IC50 11.04 μg/
mL）， ABTS （IC50 4.28 μg/mL）， superoxide anion （IC50 94.16 μg/mL） and hydroxyl radical （IC50 28.75 μg/mL）. Finally，
we found that OONO- can induce DNA damage（43.8%） and cytotoxicity（cell viability 49.5%） in rat astrocyte cells， fur-
thermore， bayberry leaf polyphenol （15 μg/mL） significantly inhibited DNA damage （24.1%） and cytotoxicity （cell viabil-
ity 75.7%）.
Key words bayberry leaf polyphenol； antioxidant activity； DNA damage； cytotoxicity
我国将试点建立食品安全授权制度
从国家食药监管总局获悉， 日前召开的全国食品安全监管工作会议要求各地监管部门抓
住治本之策，采取最严格的监管措施，依法落实食品生产经营者的主体责任，建立食品安全授
权、可追溯及诚信自律制度。
国家食药监管总局有关负责人表示，试点建立食品安全授权制度，核心是要求企业法人负
责或者法人书面授权设立质量安全负责人，对产品配方、原辅料入厂、生产过程式控制、产品出
厂检验和放行等实行“全过程”签字负责，切实解决企业管理层“人人负责、人人无责”的问题。
另外，食品安全可追溯制度建设方面，要求食品生产企业突出重点品种，全面实行原辅料采购
使用、生产过程式控制、产品检验、出厂销售等“全过程”记录制度，督促形成上下游食品质量安
全可查询、可控制、可追究的追溯体系和责任机制。
据了解，目前食品行业全国有 1000 多万家生产经营主体，食品安全监管呈现出食品生产
经营主体数量很多、食品类别很杂、食品需求量很大、食品生产经营过程复杂、食品安全隐患不
易发现的特点。 （消息来源：国家质量监督检验检疫总局）
政策法规
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