全 文 ：通讯作者:周金辉 Tel:13905379297 E-mail:zhoujinhuilunwen@ 163． com
HPLC-DAD-ELSD法测定伤痛酊中氯化两面针碱、乙氧基白屈
菜红碱、岩白菜素和百两金皂苷 A的含量
王玉娟1 陶利1 崔苏镇1 梁竹1 周金辉2 (1．济南军区总医院 济南 250031;2．济宁医学院)
摘 要 目的:采用 HPLC-DAD-ELSD法测定伤痛酊( STD) 中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、岩白菜素和百两金皂苷 A
的含量。方法:采用 Hypersil C18色谱柱( 200 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流速: 0． 8 ml·min
－1 ;氯化两面针碱和乙氧基白屈菜红碱:
流动相 A为乙腈，流动相 B为0． 1%甲酸-三乙胺( pH 4． 5) ，检测波长为 273 nm。岩白菜素和百两金皂苷 A:甲醇-水( 25∶ 75)
为流动相;漂移管温度: 95℃，载气( N2 ) 流速: 2． 5 SLPM·min
－1。结果:氯化两面针碱与乙氧基白屈菜红碱进样量分别在
0． 021 ～ 0． 426 μg( r = 0． 999 5) 、0． 075 ～ 1． 494 μg( r = 0． 999 8) 与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为99． 22%、
98． 61%，ＲSD分别为0． 64%、0． 46% ( n = 9) ;岩白菜素和百两金皂苷 A 分别在0． 215 ～ 4． 304 ( r = 0． 999 3) 、0． 286 ～ 5． 728 μg
( r = 0． 999 7) 进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值良好的线性关系，平均加样回收率分别为99． 15%、99． 25%，ＲSD分
别为0． 77%、0． 56% ( n = 9) 。结论:该测定方法结果准确、灵敏度高、重复性好，可用于伤痛酊中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜
红碱、岩白菜素和百两金皂苷 A的含量测定。
关键词 伤痛酊;氯化两面针碱;乙氧基白屈菜红碱;岩白菜素;百两金皂苷 A; HPLC-DAD-ELSD法
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2014)05-0782-04
Determination of Nitidine Chloride，5-Ethoxychelerythrine，Bergeninum and Ardisiacrispin A in Shangtong
Tinctures by HPLC-DAD-ELSD
Wang Yujuan1，Tao Li1，Cui Suzhen1，Liang Zhu1，Zhou Jinhui2(1． Department of Pharmacy，Ji＇nan Military General Hospital，Ji’
nan 250031，China;2． Jining Medical University)
ABSTＲACT Objective:To develop an HPLC-DAD-ELSD method for the determination of nitidine chloride，5-ethoxychelerythrine，
bergeninum and ardisiacrispin A in Shangtong tinctures (STD)． Methods:A Hypersil C18 column was used as the chromatographic
column，the flow rate was 0． 8 ml·min －1 ． For nitidine chloride and 5-ethoxychelerythrine，the mobile phase A consisted of acetoni-
trile，the mobile phase B consisted of 0． 1% formic acid-triethylamine (pH 4． 5)，and the DAD detection wavelength was at 273 nm．
For bergeninum and ardisiacrispin A，the mobile phase consisted of methanol-water(25∶ 75) ，the temperature of drift tube was set at
95℃，and the gas flow (N2)was set at 2． 5 SLPM·min
－1 ． Ｒesults:There was a good linear relationship between the concentration
and peak area for nitidine chloride and 5-ethoxychelerythrine within the range of 0． 021-0． 426 μg (r = 0． 999 5)and 0． 075-1． 494 μg
(r = 0． 999 8)，respectively． The average recovery was 99． 22%(ＲSD = 0． 64%)and 98． 61%(ＲSD = 0． 46%) ，respectively． There
was a good linear relationship between the concentration and peak area for bergeninum and ardisiacrispin A within the range of 0． 215-
4． 304 μg(r = 0． 999 3)and 0． 286-5． 728 μg(r = 0． 999 7) ，respectively． The average recovery was 99． 15%(ＲSD = 0． 77%)and
99． 25%(ＲSD = 0． 56%)accordingly． Conclusion:The method is accurate，sensitive and reproducible，and can be used in the de-
termination of nitidine chloride，5-ethoxychelerythrine，bergeninum and ardisiacrispin A in STD．
KEY WOＲDS Shangtong tinctures;Nitidine chloride;5-Ethoxychelerythrine;Bergeninum;Ardisiacrispin A;HPLC-DAD-ELSD
伤痛酊为中药复方制剂，处方源于《卫生部药
品标准》中药成方制剂第 7 册，由两面针、朱砂根、
芙蓉叶、徐长卿、雪上一枝蒿、薄荷脑、樟脑、肉桂油
等 8 味药物组成，具有去瘀活血，消肿止痛的功效，
可用于扭伤、挫伤、挤压伤、腱鞘炎等急性软组织损
伤。原质量标准仅对性状进行了控制，未对方中的
任何药味进行定性或定量研究［1，2］。为保证产品质
量，确保临床疗效，本文采用 HPLC-DAD-ELSD 法对
两面针中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱和朱砂
根中岩白菜素、百两金皂苷 A 进行含量测定方法研
究，为完善该制剂质量标准提供依据。
1 仪器与试药
日本岛津 LC-10ATVP型高效液相色谱仪;岛津
自动进样器 SIL-10ADVP;ANASTAＲ 色谱数据工作
站;SPD-1OAVP型紫外可见检测器;Alltech 2000ES
型蒸发光散射器。氯化两面针碱对照品(批号:
110848-200603)、乙氧基白屈菜红碱对照品(批号:
110847-200601)和岩白菜素对照品(批号:111532-
201203，含量以94． 4%计)均购于中国食品药品检定
研究院;百两金皂苷 A对照品(批号:23643-61-0，纯
度98． 0%)购于上海金穗生物科技有限公司;伤痛
酊(规格:每瓶 30 ml，批号为 130911、130915、
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130923)购自广西邦琪药业集团有限公司;甲醇(色
谱纯，湖北杜克化学科技有限公司);乙腈(色谱纯，
天津赛孚瑞科技有限公司);甲酸(分析纯，济南金
恒益化工有限公司);三乙胺(分析纯，无锡市晶科
化工有限公司)。
2 方法与结果
2． 1 氯化两面针碱和乙氧基白屈菜红碱的含量测
定［3 ～ 7］
2． 1． 1 色谱条件及系统适应性 Hypersil C18色谱
柱(200 mm × 4． 6 mm，5 μm);流动相 A 为乙腈，流
动相 B 为0． 1%甲酸-三乙胺(pH 4． 5)，0 ～ 13 min:
流动相 A 为 25． 0%，流动相 B 为 75． 0%;14 ～
26min:流动相 A 为 25． 0%→55． 0%，流动相 B 为
75． 0%→45． 0%;27 ～ 40min:流动相 A 为 55． 0%，
流动相 B 为 45． 0%进行梯度洗脱;检测波长:273
nm;流速为 0． 8ml·min －1。在此条件下氯化两面针
碱、乙氧基白屈菜红碱与其他组分分离效果良好，以
氯化两面针碱计理论塔板数应不低于 3 000。
2． 1． 2 混合对照品溶液的制备 精密称取氯化两面
针碱对照品和乙氧基白屈菜红碱对照品各适量，加
75%甲醇制成对照品混合溶液(氯化两面针碱为
0． 021 3 mg·ml －1，乙氧基白屈菜红碱为0． 074 7 mg
·ml －1)。
2． 1． 3 供试品溶液的制备 精密量取本品 2 ml，置
10 ml量瓶中，精密加入 75%甲醇至刻度，摇匀，过
滤，取续滤液作为供试品溶液。
2． 1． 4 阴性样品溶液的配制 按伤痛酊处方比例
称取适量除两面针的其余药味，按伤痛酊的生产工
艺制成缺两面针的阴性样品，按照上述供试品溶液
的配制方法制成缺两面针的阴性样品溶液。
2． 1． 5 线性关系考察 精密吸取对照品混合溶液
1，5，10，15，20 μl，按上述色谱条件进行测定，以峰
面积(Y)为纵坐标，氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红
碱的进样量(X，μg)为横坐标分别绘制标准曲线，得
回归方程。氯化两面针碱:Y = 3． 5 × 106X － 357． 3，r
= 0． 999 5;乙氧基白屈菜红碱:Y = 2． 9 × 106X +
297． 6，r = 0． 999 8。结果表明氯化两面针碱在
0． 021 ～ 0． 426 μg、乙氧基白屈菜红碱在0． 075 ～
1． 494 μg进样量与峰面积线性关系良好。
2． 1． 6 干扰试验 分别精密吸取 10 μl 的供试品
溶液、对照品溶液及阴性样品溶液，按上述色谱条件
进行色谱分析，结果供试品溶液色谱中，在与氯化两
面针碱对照品及乙氧基白屈菜红碱对照品相同保留
时间处有吸收峰，而阴性样品溶液在相同保留时间
处未显氯化两面针碱和乙氧基白屈菜红碱吸收峰，
结果见图 1。
A．对照品 B．供试品 C．阴性样品
1．氯化两面针碱 2．乙氧基白屈菜红碱
图 1 氯化两面针碱与乙氧基白屈菜红碱
的 HPLC-DAD的色谱图
2． 1． 7 精密度试验 取对照品混合溶液重复进样
6 次，按“2． 1． 1”项的色谱条件测定氯化两面针碱与
乙氧基白屈菜红碱的峰面积，氯化两面针碱 ＲSD 为
0． 94%，乙氧基白屈菜红碱 ＲSD 为0． 73%，结果表
明仪器精密度良好。
2． 1． 8 重复性试验 取同一批样品(批号:
130911)，按上述“2． 1． 3”供试品溶液的配制方法制
备 6 份供试品溶液，分别测定其含量，氯化两面针碱
和乙氧基白屈菜红碱的的平均含量分别为0． 104，
0． 368 mg·ml －1，ＲSD为0． 72%，0． 55%。结果表明
本方法具有良好的重复性。
2． 1． 9 稳定性试验 取同一供试品溶液，在放置
0，1，2，4，6，8 h 后精密吸取 10 μl进样，测定其峰面
积值，氯化两面针碱 ＲSD 为0． 48%，乙氧基白屈菜
红碱 ＲSD为0． 36%，供试品溶液 8 h内基本稳定。
2． 1． 10 加样回收率试验 取已知含量(氯化两面
针碱含量0． 104 mg·ml －1、乙氧基白屈菜红碱含量
0． 368 mg·ml －1)的同一批样品，精密量取 9 份，每
份各1． 0 ml，分别置于 10 ml 量瓶中，精密加入对照
品混合溶液 4 ml 3 份、5 ml 3 份、6 ml 3 份，分别精
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中国药师 2014 年第 17 卷第 5 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 5
密加入 75%甲醇溶液至刻度，摇匀，过滤，取续滤液
作为加样供试液。精密吸取加样供试液 10 μl，按上
述含量测定方法测定其峰面积，计算回收率，结果平
均加样回收率分别为99． 22%、98． 61%，ＲSD分别为
0． 64%、0． 46%(n = 9)。
2． 2 岩白菜素和百两金皂苷 A的含量测定［8 ～ 12］
2． 2． 1 色谱条件及系统适应性 色谱柱:Hypersil
C18(200 mm ×4． 6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(25∶
75)，柱温:室温;流速:0． 8 ml·min －1;ELSD检测器
检测参数:漂移管温度为 95℃，载气(N2)流速为2． 5
SLPM·min －1。理论塔板数以岩白菜素计算应不低
于 2 800。
2． 2． 2 混合对照品溶液的制备 精密称取岩白菜
素对照品和百两金皂苷 A对照品各适量，加 80%乙
醇溶液制成对照品混合溶液(岩白菜素为0． 215 2
mg·ml －1，百两金皂苷 A为0． 286 4 mg·ml －1)。
2． 2． 3 供试品溶液的配制 精密量取本品2． 0 ml，
置 10 ml具塞锥形瓶中，加 80%乙醇至刻度，摇匀，
用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2． 2． 4 阴性样品溶液的配制 按伤痛酊处方比例
称取适量除朱砂根的其余药味，按伤痛酊的生产工
艺制成缺朱砂根的阴性样品，按照上述供试品溶液
的配制方法制成缺朱砂根的阴性样品溶液。
2． 2． 5 线性关系考察 精密吸取对照品混合溶液 1，
5，10，15，20 μl，按上述色谱条件进行测定，以峰面积
的自然对数值为纵坐标，岩白菜素、百两金皂苷 A进
样量的自然对数值为横坐标分别绘制标准曲线，得回
归方程。岩白菜素:Y = 1． 215 7 X + 6． 268 4，r =
0． 999 3;百两金皂苷 A:Y = 1． 346 8X + 5． 957 3，r =
0． 999 7。结果表明岩白菜素在0． 215 ～ 4． 304 μg、百
两金皂苷 A在0． 286 ～5． 728 μg进样量的自然对数值
与峰面积的自然对数值良好的线性关系。
2． 2． 6 干扰试验 分别精密吸取 10 μl 的供试品
溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按 2． 2． 1项的
色谱条件进行色谱分析，结果供试品溶液色谱中，在
与岩白菜素对照品和百两金皂苷 A 对照品相同保
留时间处有吸收峰，而阴性对照溶液在相同保留时
间处未显岩白菜素和百两金皂苷 A吸收峰，见图 2。
2． 2． 7 精密度试验 取对照品混合溶液重复进样
6 次，按“2． 2． 1”项的色谱条件测定岩白菜素和百两
金皂苷 A 的峰面积，测试结果表明仪器精密度良
好，岩白菜素 ＲSD 为0． 43%，百两金皂苷 A 的 ＲSD
为0． 75%。
2． 2． 8 重复性试验 取同一批(批号:130911)样
品，按“2． 2． 3”项下供试品溶液的配制方法制备 6
A．对照品 B．供试品 C．阴性样品
1．岩白菜素 2．百两金皂苷 A
图 2 岩白菜素和百两金皂苷 A的 HPLC-ELSD色谱图
份供试品溶液，分别测定其含量，岩白菜素和百两金
皂苷 A 的平均含量分别为1． 08，1． 44 mg·ml －1，
ＲSD分别为0． 64%，0． 71%。结果表明本法具有良
好重复性。
2． 2． 9 稳定性考察 取同一供试品溶液，在放置
0，1，2，4，6，8 h 后，测定其峰面积值，岩白菜素 ＲSD
为0． 81%，百两金皂苷 A 的 ＲSD 为0． 65%，结果表
明供试品溶液 8 h内基本稳定。
2． 2． 10 加样回收率试验 取已知含量(岩白菜素
含量为1． 08 mg·ml －1、百两金皂苷 A 含量为1． 44
mg·ml －1)的同一批样品，精密量取 9 份，每份各
1． 0 ml，分别置于 10 ml 量瓶中，精密加入对照品混
合溶液 4 ml 3 份、5 ml 3 份、6 ml 3 份，分别精密加
入 75%甲醇溶液至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为
加样供试液。按上述含量测定方法测定其峰面积，
计算回收率，结果平均加样回收率分别为99． 15%、
99． 25%，ＲSD分别为0． 77%、0． 56%(n = 9)。
2． 3 样品测定
取 3批样品按“2． 1”项下氯化两面针碱和乙氧基
白屈菜红碱测定方法，分别精密吸取对照品混合溶液
和供试品溶液各 10 μl，注入液相色谱仪，测定氯化两
面针碱和乙氧基白屈菜红碱的含量，结果见表 1。
取 3 批样品按“2． 2”项下岩白菜素和百两金皂
苷 A测定方法，分别精密吸取对照品混合溶液 5，10
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μl和供试品溶液 10 μl，注入液相色谱仪测定，用外
标两点法对数方程分别测定本品中岩白菜素和百两
金皂苷 A的含量，结果见表 1。
表 1 四种成分含量测定结果(mg·ml －1，n =3)
批号 氯化两面针碱
乙氧基白
屈菜红碱 岩白菜素
百两
金皂苷 A
130911 0． 104 0． 368 1． 08 1． 44
130915 0． 121 0． 394 1． 21 1． 52
130923 0． 113 0． 385 1． 19 1． 47
3 讨论
3． 1 氯化两面针碱和乙氧基白屈菜红碱检测波长
的选择
分别取氯化两面针碱对照品和乙氧基白屈菜红
碱对照品适量，加 75% 甲醇溶解制成每 1 ml 含
50μg的溶液，在 200 ～ 400 nm 波长处进行紫外扫
描，结果氯化两面针碱对照品在 273 nm处有最大吸
收，乙氧基白屈菜红碱对照品在 274 nm处有最大吸
收，参照《中国药典》2010 年版一部两面针药材检验
项下的检测波长 273 nm，检测波长定为 273 nm。
3． 2 岩白菜素和百两金皂苷 A检测参数的选择
测定试验中曾对 ELSD参数进行反复研究，最终
确定甲醇-水(25 ∶ 75)为流动相，流速为0． 8 ml·
min －1，漂移管温度为 95℃，载气(N2)流速为2． 5
SLPM·min －1。此时样品中岩白菜素和百两金皂苷
A峰与其他组分峰可达基线分离，分离度良好，峰型
对称。
参 考 文 献
1 中国药典［S］． 2010年版．一部． 128-129，157-158，附录 30，附录 36
2 卫生部药品标准［S］．中药成方制剂．第 7册． 1998． 62
3 黄琪，雷鹏，刘英慧，等．高效液相色谱法同时测定毛两面针药材中
5种化学成分含量［J］．中国药学杂志，2012，47(18):1514-1517
4 黄琪，雷鹏，李秀杰，等．两面针与毛两面针药材中 5 种化学成分的
比较研究［J］．中国药科大学学报，2012，43(2):154-158
5 孙培文，刘海涛，雷鹏，等．反相高效液相色谱法同时测定毛两面针
中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱和毛两面针素的含量［J］．中
南药学，2011，09(3):175-178
6 李文仕． ＲP-HPLC法测定复方两面针含片中氯化两面针碱的含量
［J］．中国药事，2011，25(5):490-492，502
7 徐世霞． HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量［J］．北方药
学，2011，08(5) :7-8
8 李勇军，夏彬，龙庆德，等．朱砂根主要活性成分的含量测定研究
［J］．时珍国医国药，2011，22(8):1929-1931
9 范卫锋，石勇新，张文，等．广西朱砂根不同部位中岩白菜素含量的
研究［J］．中国中医药信息杂志，2009，16(1):53，101
10 麻秀萍，蒋朝晖，丁宁，等．高效液相色谱法测定朱砂根中岩白菜素
含量［J］．中国民族民间医药杂志，2004，6:347-348
11 彭光天，黄上志，黄仲立，等．朱砂根愈伤组织诱导及其岩白菜素含
量的测定［J］．热带亚热带植物学报，2004，12(1):51-56
12 黄珍珍，蔡佳仲，柯翠敏，等． HPLC-ELSD 法测定朱砂根中岩白菜
素和百两金皂苷 A的含量［J］．中南药学，2012，10(11):829-832
(2013-12-26 收稿)
通讯作者:胡昌勤 Tel:(010)67095308 E-mail:hucq@ nifdc． org． cn
氯霉素滴眼液中尼泊金乙酯含量合理性的探讨
肖璜1 林吉恒2 陈万胜3 马仕洪1 胡昌勤1 (1．中国食品药品检定研究院 北京 100050;2．舟山市食品药品检
验所;3．许昌市食品药品检验所)
摘 要 目的:调研国产氯霉素滴眼液中尼泊金乙酯含量不同产品是否符合《中国药典》规定。方法:通过抑菌剂效力检查法
测定含不同浓度尼泊金乙酯模拟产品的抑菌效力。结果:证明现行产品浓度尼泊金乙酯模拟产品的抑菌效力均符合药典规定。
结论:现行产品中的尼泊金乙酯处方浓度偏高。而处方中作为辅料的硼酸 /硼砂，除具有 pH调节作用外，对抑菌效力也有贡献。
关键词 氯霉素滴眼液;尼泊金乙酯;硼酸 /硼砂;抑菌效力
中图分类号:Ｒ944． 1 + 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2014)05-0785-04
Exploration of Ｒational Ethylparaben Contents in Chloramphenicol Eye Drops
Xiao Huang1，Lin Jiheng2，Chen Wansheng3，Ma Shihong1，Hu Changqin1(1． National Institutes for Food and Drug Control，Beijing
100050，China;2． Zhoushan Institute for Food and Drug Control;3． Xuchang Institute for Food and Drug Control)
ABSTＲACT Objective:To study whether domestic chloramphenicol eye drops with different ethylparabenin content meet the re-
quirements in Chinese Pharmacopoeia． Methods:Antimicrobial effect test was used to examine the antimicrobial effect of the different
eye drops． Ｒesults:The antimicrobial effect of the eye drops was in compliance with the requirements in the pharmacopoeia． Conclu-
sion:The ethylparabenin concentration in the eye drops is higher than necessary． Boric acid and borax not only can adjust pH，but also
show antimicrobial effect．
KEY WOＲDS Chloramphenicol eye drops;Ethylparaben;Boric acid and borax;Antimicrobial effect
眼用制剂是常见的非处方药物。目前市场中的
眼用制剂基本为多剂量包装，由于在使用和保存过
程中，可能被泪液或空气中的微生物污染，因此，大
部分眼用制剂(包括抗菌药类产品)都添加有抑菌
剂，以防止或抑制微生物的生长与繁殖。目前各国
药典中均收载有抑菌剂效力检查法 /指导原则。长
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