全 文 ： 2011, Vol. 32, No. 18 食品科学 ※分析检测312
离子色谱法测定大白口蘑、绒柄牛肝菌和
皱盖疣柄牛肝菌中阴离子含量
刘鸿高 1，王元忠 2，赵艳丽 2，张 霁 2
(1.云南农业大学农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；
2.云南省农业科学院药用植物研究所，云南 昆明 650201)
摘 要：采用超声波辅助提取 -离子色谱法测定大白口蘑、绒柄牛肝菌和皱盖疣柄牛肝菌 3种食用菌中 F －、Cl－、
NO 2、NO 3、PO 4五种阴离子含量。结果表明：3种样品中，离子含量均表现为 NO 3＞ PO 4＞ F －＞ Cl －，且NO 2
均未检测出；同一种离子在不同样品中的含量各有差异。本研究为食用菌中阴离子含量的监测提供参考，同时对
其他物种的安全监督具有指导意义。
关键词：食用菌；离子色谱法；阴离子；含量
Determination of Anions in Tricholoma giganteum, Boletus tomentipes and Leccinum rugosiceps
by Ion Chromatography
LIU Hong-gao1，WANG Yuan-zhong2，ZHAO Yan-li2，ZHANG Ji2
(1. College of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China；
2. Institute of Medicinal Plants, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Kunming 650201, China)
Abstract ：The contents of 5 anions including F－, Cl－, NO2, NO3 and PO4 in edible mushrooms such as Tricholoma giganteum,
Boletus tomentipes and Leccinum rugosiceps were determined by ultrasonic-assisted extraction (UAE)-ion chromatography (IC)
method. The results showed that the contents of other anions in each mushroom were ranked in the order of NO3 ＞ PO4 ＞ F－＞
Cl－, except that no NO2 was detected. The contents of each anion in different mushroom samples were different. This investigation
can provide a reference for the determination of anions in edible mushrooms and guidance for the safety supervision of other
species.
Key words：edible mushroom；ion chromatography；anions；content
中图分类号：TS201.2 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)18-0312-04
收稿日期：2011-02-15
基金项目：国家自然科学基金地区基金项目(31160409)；教育部科学技术研究重点项目(209118)；
云南省自然科学基金项目(2008CD128)
作者简介：刘鸿高(1974—)，男，副教授，硕士，研究方向为资源真菌开发与利用。E-mail：honggaoliu@126.com
离子色谱法(ion chromatography，IC)是 20世纪 70
年代发展起来的一种新型液相色谱分析技术。在食品分
析中，它能分离测定无机阴、阳离子，还能测定糖类、
氨基酸、有机酸、食品添加剂等，同时它还具有操作
简单、选择性好、高灵敏度、无污染并能同时测定多
种离子等优点，而得到广泛的应用[ 1 - 6 ]。
食品中阴离子含量的测定对于营养指标的评价及产
品质量的控制非常重要。氟是人体内重要的微量元素之
一，饮用水、食品等中的氟含量高低直接影响到人的
身体健康。它是牙齿及骨骼不可缺少的成分，少量氟
可以促进牙齿珐琅质对细菌酸性腐蚀的抵抗力，防止龋
齿。但若长期摄取过量的氟，会引起慢性疾病，轻则
表现为氟斑牙等症，重则导致氟骨症等疾病[ 7 -8 ]。氯是
食物中常见的一种无机阴离子，它对体液的渗透压和浓
度差及机体内的酸碱平衡具有重要的作用；它是胃酸形
成的基本成分和淀粉酶的激活剂。若缺乏氯会导致呼吸
功能不全和痉挛[9-10]。磷与钙结合为磷酸钙，是骨骼和
牙齿的主要构成物质。磷是细胞核蛋白、磷脂和某些
辅酶的主要成分，参与葡萄糖、脂肪和蛋白质的代谢
以及三磷酸腺苷(ATP)的形成，为人体的生命活动提供
3－－ － 3－－
3－－ －
3－－
－
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能量。硝酸盐在动物体内被还原为亚硝酸盐，直接使
动物缺氧中毒，引起高铁血红蛋白症，也可间接与次
级胺结合形成强致癌物质亚硝胺，诱发动物的消化道系
统癌变[1 1-12 ]。人体摄入的硝酸盐有 70%～80%来自蔬
菜，随着蔬菜种植中氮肥的大量使用，导致蔬菜中硝
酸盐含量激增，直接危害到人体的健康[13-14]。大白口蘑
( T r i c h o l o m a g i g a n t e u m )、绒柄牛肝菌( B o l e t u s
tomentipes)和皱盖疣柄牛肝菌(Leccinum rugosiceps)均为
人们熟知的烹饪佳肴，其安全食用备受关注，本实验
对 3种食用菌中的 F －、Cl －、NO2、NO3、PO4五种阴离
子含量进行测定，为该几种食用菌安全食用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
大白口蘑、绒柄牛肝菌和皱盖疣柄牛肝菌 3种供试
样品均采自云南省普洱市安嘎寨。
NaF、NaCl、NaNO2、NaNO3、NaH2PO4、NaOH、
Na2CO3、NaHCO3(均为分析纯) 天津市风船化学科技有
限公司；水为去离子水，电阻率为 18 .25ΩM/cm。
1.2 仪器与设备
WK-Ⅱ型离子色谱仪(配有自动再生抑制电导检测
器、阴离子交换柱、CDMC-21 V3.0色谱工作站) 江苏
江分电分析仪器有限公司；YSB-2型往复平流泵 中科
院上海原子核研究所实验工厂；SY3200-T型超声波清洗
机 上海声源超声仪器设备有限公司；TGL-16B型高速
离心机 上海安亭科学仪器厂；0.45μm过滤膜 天津
Aulomatic Science公司。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件
色谱柱：PACKING NJ-SA-4A(250mm×4.6mm)；柱温
为30℃；洗脱液为3.50mmol/L Na2CO3＋1.00mmol/L NaHCO3；
流速为100μL/min；电导检测器量程为 1.0× 104μS；进
样量为 100μL；柱压＜ 5MPa。按上述条件获得的标准
品(A)和样品(B、C、D )对照色谱图见图 1。
1.3.2 溶液的制备
标准混合溶液配制：精密称取 120℃干燥至质量恒
定的 NaF、NaCl、NaNO2、NaNO3、NaH2PO4标准样
品，配制成 1000mg/L的 F －、Cl －、NO 2、NO 3、PO 4
标准储备液；NaOH配制成 0.30mol/L标准储备液，使
用时配制成所需不同质量浓度的标准混合溶液。
淋洗液配制：精密称取 1 2 0℃干燥至质量恒定的
Na2CO3 25.4400g和 NaHCO3 25.2000g配制成浓度为
0.35mol/L和 0.10mol/L的储备液 1000mL。
1.3.3 样品处理
样品带回实验室后，60℃烘干至质量恒定，粉碎，
过100目筛，准确称取各样品(2份)0.5000g置于盛有50mL
NaOH(3.0mmol/L)溶液的 100mL容量瓶中，超声提取
30min，放至室温，取其主体部分 5mL于 50mL容量瓶
中定容，离心 20min，过 0.45μm微孔滤膜过滤，收集
滤液备用。
1.3.4 线性关系、精密度和检出限的考察
精密量取1.3.2节的标准溶液配制成质量浓度比为F－:
Cl－:NO2 :PO4 :NO3 ＝ 1.5:2.0:20.0:30.0:10.0的系列溶液，
按 1.3.1节色谱条件测定峰面积，以质量浓度Cm为横坐
标(X)、峰面积 S为纵坐标(Y)作标准曲线，得各离子线
性回归方程；将混合标准溶液同时测定 n＝ 7次，对其
峰高和峰面积进行精密度(RSD%)计算。将标准混合溶液
逐渐稀释至 RSN＝ 3时，将仪器灵敏度调至较高档，以
所测得的各离子峰高与噪音峰高计算检出限(DL＝ 3RSN)。
1.3.5 准确性实验
将精密量取1.3.2节的标准溶液配制成质量浓度比为
F－:Cl－:NO2 :PO4 :NO3 ＝1.5:2.0:20.0:30.0:10.0的系列浓度，
按上述色谱条件进行测定，平行测定 1 3 次。
1.3.6 回收率实验
将精密称取的 1份大白口蘑样品加入浓度比为F－:Cl－:
NO2 :PO4 :NO3 ＝1.5:2.0:20.0:30.0:10.0的标准混合系列溶
液，按样品处理方法 1.3.3节处理，同时做空白样品处
理，进样 1 0 0μL，按上述色谱条件平行测定 6 次。
1.3.7 供试样品测定
3种供试样品按 1.3.3节处理，在上述色谱条件下检
测，平行测定 6 次，求其峰面积的平均值，以各离子
峰面积对样品质量浓度进行回归测定。
2 结果与分析
2.1 线性关系、精密度和检出限
如表 1 所示，F －、C l －、N O 2、P O 4、N O 3 五种
阴离子的相关系数 R2分别为 0.9916、0.9950、0.9961、
0 .9952、0 .99 50；线性范围分别为 2～25、2～20、
3－－ －
1.F －；2.Cl －；3.NO2－；4.PO43－；5.NO3－；A.标准品；
B .大白口蘑；C .绒柄牛肝菌；D .皱盖疣柄牛肝菌。
图 1 F －、C l －、N O 2 －、 P O 4 3 －、N O 3 －色谱图
Fig.1 Chromatograms of F －、Cl －、NO2、PO4 and NO3－ in
different edible mushrooms
57
41
25
9
－7
－23
1
m
V
时间 /min
0 3 6 9 12 15
2
3 4
5
D
C
B
A
3－－
3－－ －
3－－ －
3－－ －
3－－ －
3－－ －
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2～100、10～55、10～100mg/L；峰面积(RSD)分别
为 0.85%、1.27%、0.73%、0.92%、2 . 33%；检出限
分别为 F －(0 .0976mg/L)、Cl －(0 .13646mg/L)、NO 2
(1.09836mg/L)、PO4 (0.14150mg/L)、NO3 (0.50756mg/L)。
表 1数据表明，该方法测定 5种阴离子准确性较高，线
性范围较宽，易于操作。
如图 2 所示，在上述条件下测定样品，各离子分
离效果较好，各离子峰面积 RSD ＜ 2.50%，准确性较
高，重现性较好。
2.3 加标回收率实验
由表 2 可知，F －、C l －、N O 3、PO 4 四种离子加
标回收率分别为 1 0 8 . 3 0 %、1 0 6 . 3 0 %、9 6 . 4 7 %、
101.48%，NO2未检出，(RSD)分别为 2.57%、1.88%、
2 . 54 %、1 . 9 6 %，R S D 变化较小，精密度较高，测
定结果准确度较高。
2.4 供试样品测定
表 3 表明，同一样品中，不同的离子含量不同。
大白口蘑、绒柄牛肝菌和皱盖疣柄牛肝菌 3 种样品中，
离子含量均表现为NO3＞ PO4＞ F －＞Cl －，且NO2含均
未检测出。
同一种离子的含量，在不同的样品中各有差异。F －
含量高低为皱盖疣柄牛肝菌＞绒柄牛肝菌＞大白口蘑，
但差别不大。Cl －含量高低为大白口蘑＞皱盖疣柄牛肝
菌＞绒柄牛肝菌。PO4的含量高低则为皱盖疣柄牛肝菌＞
大白口蘑＞绒柄牛肝菌。NO3的含量在 3个样品中差别较
大，表现为大白口蘑＞绒柄牛肝菌＞皱盖疣柄牛肝菌。
3 讨 论
采用 3.0mmol/L NaOH溶液为浸提液、超声波辅助
提取，具有提取率高、操作简单等特点。离子色谱法
同时检测大白口蘑、绒柄牛肝菌和皱盖疣柄牛肝菌 3种
食用菌中 F －、C l －、N O 2、PO 4、N O 3 五种离子含量，
结果表明，除 N O 2 未检出外，F －、C l －、N O 3、P O 4
四种离子加标回收率分别为 108.30%、106.30%、96.47%、
101.48%，检测结果令人满意。所测 3种食用菌中 F －、
Cl－、NO2、PO4 、NO3 五种离子含量测定结果与 Isildak
等[10]所测的双孢蘑菇(Agar icus bisporus)、紫丁香蘑
(Lepista nuda)、 硬柄小皮伞(Marasmius oreades)、高
羊肚菌(Morchella elata)、小羊肚菌(M. esculenta)、毛
头鬼伞(Coprinus comatus)、圆锥钟菌(Verpa conica)、
侧耳(Pleurotus ostreatus) 8种菌中含量相比，F－和 PO4
含量较高，C l －含量较低，N O 3 含量大白口蘑中最高，
绒柄牛肝菌介于其间，皱盖疣柄牛肝菌最低。NO2含量
与双孢蘑菇、紫丁香蘑、毛头鬼伞、圆锥钟菌及侧耳
中的一致，均未被测出。
我国对无公害蔬菜中亚硝酸盐和硝酸盐含量提出明
确的限量标准[1 5]为：亚硝酸盐≤ 4.0mg/kg、硝酸盐≤
3000mg/kg(叶菜类)、≤ 1200mg/kg(根茎类)、≤ 600mg/kg
(瓜果类)，但对食用菌中的阴离子含量，尚无明确的限
量标准。3种食用菌样品中 NO2含量低于无公害蔬菜中
的限量标准，N O 3 含量高于限量标准。
本研究为食用菌中阴离子含量的监测提供了依据，
为食用菌中亚硝酸盐、硝酸盐等阴离子含量的限量标准
提供参考，同时对其他物种的安全监督具有指导意义。
3－ －
－
阴 线性
相关系数
线性范围 / 峰面积 检出限 /
离子 方程 (mg/L) RSD/% (mg/L)
F － y＝ 7.2268x－ 7.7318 R2＝ 0.9916 2～25 0.85 0.0976
Cl － y＝ 5.2016x＋ 6.0296 R2＝ 0.9950 2～20 1.27 0.13646
NO2 y＝ 3.3133x－ 4.7857 R2＝ 0.9961 2～100 0.73 1.09836
PO4 y＝ 3.2388x－ 13.245 R2＝ 0.9952 10～55 0.92 0.14150
NO3 y＝ 1.3493x＋ 74.611 R2＝ 0.9950 10～100 2.33 0.50756
表 1 线性范围和精密度
Table 1 Linear equations with linear ranges and correlation coeffi-
cients and detection limits of F － , Cl － , NO2, PO4 and NO3
3－
－
－
3－－ －
2.2 准确性实验
图 2 F －、C l －、NO 2、P O 4、NO 3 五种离子准确性
Fig.2 Chromatographic separation of F － , Cl － , NO2, PO4 and NO3
showing the accurcay of the developed analytical method
20
14
8
2
－4
－10
F－
m
V
时间 /min
0 3 6 9 12 15
C1－
NO2
PO4 NO33－
－
－
3 －－ －
3－－ －
离 加标量 / 实测量 / 加标后测定值 / 回收率 / RSD/
子 (mg/L) (mg/L) (mg/L) % %
F － 1.2 20.245 21.545 108.30 2.57
Cl － 1.4 11.708 13.197 106.30 1.88
PO4 3.5 12.506 15.883 96.47 2.54
NO3 50 243.768 394.510 101.48 1.96
表 2 加标回收率实验结果 (n=6)
Table 2 Recovery rates for F － , Cl － , NO2, PO4 and NO3 in spiked
Tricholoma giganteum
3－－ －
3－
－
样品
离子含量 /(mg/g)
F － Cl － PO4 NO3
大白口蘑 0.705 0.540 2.966 81.240
绒柄牛肝菌 0.901 0.164 1.767 11.315
皱盖疣柄牛肝菌 0.936 0.319 3.451 7.903
表 3 样品测定结果
Table 3 Determination results of three edible mushrooms
3－ －
3－－ －
－ 3－
3－
－
3－ －－
－－ 3－
－ －3－
－
－
3－
－
－
－
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