全 文 ：HPLC测定不同药用部位、产地及采收期显脉
旋覆花中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量
〔摘要〕 目的 测定不同药用部位、不同产地及不同采收期显脉旋覆花药材中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量，
为该药材的质量控制与开发利用提供依据。 方法 采用高效液相色谱法测定， 以 95%乙醇回流提取。 色谱柱 C18（Col-
umn 200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相∶乙腈-水（65∶35），检测波长：220 nm。 结果 麝香草酚和异丁酸百里香酯主要存
在于显脉旋覆花的根中；麝香草酚和异丁酸百里香酯含量以湖南省通道侗族自治县较高；显脉旋覆花的采收期以 9、10
月份为宜。 结论 本研究可为显脉旋覆花药材的质量控制与开发利用提供参考。
〔关键词〕 显脉旋覆花；云威灵；麝香草酚；异丁酸百里香酯；高效液相色谱法
〔中图分类号〕R284.1 〔文献标识码〕B 〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2013.07.010.041.04
Content determination of thymol and thymyl isobutyrate
in Inula nervosa Wall from different parts, different
habitats and different harvest periods by HPLC
LI Ke1，2, SHI Lei-zhe2, CHEN Dan3, HU Yi-bing2, LU Mao-fang1, LI Ruo-cun2,
LI Shun-xiang1
（1． Hunan University of CM, Changsha, Hunan 410208, China;
2. Academy of CM Hunan, Changsha, Hunan 410013, China;
3. Vocational and Technical College of Xiangtan, Xiangtan, Hunan 411102, China）
〔Abstract〕 Objective To provide a basis for quality control and development and utilization,
the content determination of thymol and thymyl isobutyrate of Inula nervosa Wall from different
parts, different habitats and different harvest periods were carried. Methods Inula nervosa Wall was
extracted with 95% ethanol and tested by HPLC. Column C18 (Column 200 mm×4.6 mm, 5 μm) was
used with the mobile phase of mixture of acetonitrile and water (65:35), the flow rate was
1.0 mL/min, the detection wavelength was 220 nm, the column temperature was 25 ℃ . Results
Thymol and thymyl isobutyrate mainly existed in the underground part of the root in Inula nervosa
Wall. The content of Thymol and thymyl isobutyrate of Inula nervosa Wall from Tongdao Dong Au-
tonomous County of Hunan Province was the highest. The optimal harvest time of Inula nervosa
Wall was in September and October. Conclusion The research can provide a reference of the qual-
ity control, development and utilization of Inula nervosa Wall medicine.
〔Key words〕 Inula nervosa Wall； Yunweiling； thymol； thymyl isobutyrate； HPLC
李 柯 1，2，史蕾喆 1，2，陈 丹 3，胡薏冰 1，2，卢茂芳 1，李若存 2，李顺祥 1*
(1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410013；
3.湘潭职业技术学院，湖南 湘潭 411102）
〔收稿日期〕2012－12－27
〔基金项目〕湖南省卫生厅中医药科研计划（24306）；湖南省中医药研究院科研计划（201210）。
〔作者简介〕李 柯（1980－），男，湖南湘潭人，硕士，工程师,主要研究方向为中药与复方质量控制研究。
〔通讯作者〕* 李顺祥，男，博士，教授，研究员,博士生导师，E-mail:lishunxg@yahoo.com.cn。
2013 年 7 月第 33 卷第 7 期
Jul． 2013 Vol． 33 No． 7
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Hunan Univ． of CM 41
a.麝香草酚；b.异丁酸百里香酯
图 2 云威灵药材 HPLC 图
显脉旋覆花为菊科羊耳菊属植物 Duhald-
fg nervosa (wsllich ex Candolle) A.amderberg.，其干
燥的根及根茎称为云威灵。主产于云南、湖南。其化
学成分有酚类和挥发油[1]。 2009年版《湖南省中药材
标准》收载该品种但缺乏含量测定的方法 [2]360。 江滨
等用气-质联用分析、 归一化法确定了挥发油中各
成分的相对百分峰面积， 其中麝香草酚与异丁酸百
里香酯占挥发油总峰面积的 80.48%[3]。 林志云用
HPLC 测定了百里香酚(麝香草酚)的含量 [4]。 作者曾
在云威灵软胶囊质量标准研究中用 GC 法测定麝香
草酚与异丁酸百里香酯含量，用于控制制剂的质量。
考虑单用麝香草酚含量指标不能控制药材质量，随
后我们进行了治疗风湿痹病（类风湿性关节炎）有效
成分异丁酸百里香酯的制备研究及报道了用 HPLC
法和 TLC 法测定显脉旋覆花药材中麝香草酚与异
丁酸百里香酯含量 [5-7]，为了给临床用药及产品的开
发提供依据，本文对显脉旋覆花中不同药用部位、产
地及采收期的麝香草酚与异丁酸百里香酯含量进行
了测定，现报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Perkin Elmer 高效液相色谱仪（美国 PE 公司）；
EC2006 色谱数据处理系统（大连依利特分析仪器有
限公司）。 UV-2450型紫外可见分光光度计（日本岛
津）。
1.2 试剂
麝香草酚对照品（中国药品生物制品检定所，批
号：100508-200902）；异丁酸百里香酯（自制，GC 含
量测定纯度＞98%）。 甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸
馏水，其他试剂均为分析纯。
1.3 药材
样品来源于湖南和云南地区， 经湖南中医药
研究院李若存研究员鉴定为菊科植物显脉旋覆
花 Duhaldfg nervosa (wsllich ex Candolle)A.amder-
berg。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相：
乙腈-水（65∶35）；柱温：室温；流速：1.0 mL/min；检
测波长：220 nm。 理论板数按麝香草酚峰计不低于
10 000。 色谱图见图 1、图 2。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取麝香草酚对照品 11.2 mg、 异丁酸百
里香酯对照品 6.6 mg，置 100 mL 量瓶中，加 95%乙
醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末（过三号筛）约 1.0 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入 95%乙醇 25 mL，密塞，称
定质量，水浴回流 30 min，放冷，称定质量，用 95%
乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10、12 μL 进
样，测定其峰面积。 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐
标，绘制标准曲线，其回归方程为：
麝香草酚 Y=2 336X+17.6，r=0.999 8
异丁酸百里香酯 Y=1 480X+6.5，r=0.999 6
结果表明麝香草酚在 0.22～1.34 μg、 异丁酸百
里香酯在 0.13～0.79 μg 范围内具有良好的线性关
系。
2.5 显脉旋覆花不同药用部位的含量测定
取湖南省通道侗族自治县采集的同一株显脉旋
覆花的根、茎、叶三个部分阴干，将干燥后的试样粉
a.麝香草酚；b.异丁酸百里香酯
图 1 麝香草酚与异丁酸百里香酯对照品 HPLC 图
a
b
a
b
湖南中医药大学学报 2013 年第 33 卷42
碎，过三号筛。按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分
别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注
入高效液相色谱仪，测定。 结果见表 1。
2.6 不同产地云威灵药材的含量测定
取湖南通道、湖南靖州、云南地区 10 批云威灵
药材，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密
吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL， 注入高效
液相色谱仪测定。 结果见表 2。
2.7 不同采收期云威灵药材的含量测定
取湖南通道 7、8、9、10、11 月采集的云威灵药
材，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸
取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL， 注入高效液
相色谱仪，测定。 结果见表 3，图 3。
3 讨论
3.1 关于药材的名称
显脉旋覆花的根及根茎称为云威灵， 分别收载
2005 年版云南省中药饮片标准 25 页和 2009 年版
湖南省中药材标准 360 页，其拉丁学名分别为 Inu-
la nervosa Wallich ex Candolle 及 Duhaldea nervosa
(Wallich ex Candolle) A. Anderberg[2]360，[8，9]。 2009 年
版湖南省中药材标准 197页收载的毛秀才则为显脉
旋覆花 Duhaldea nervosa (Wallich ex Candolle) A.
Anderberg 的干燥全草 [2]197。 云南习用云威灵当做威
灵仙 Clematis chinensis Osbeck 应用， 所以称为云
威灵。 毛秀才药名则来源湖南省通道县侗族民间的
习称；2010 年卫生部批准显脉旋覆花（小黑药）Inu-
la nervosa Wallich ex Candolle 为食品新资源，其食
用部位为显脉旋覆花的根茎[10]；因此，我们在临床应
用及开发时应注意其区别。
3.2 不同药用部位有效成分的含量测定
云威灵的功能为祛风湿、通络止痛、健胃消食。
我们已将有效部位云威灵挥发油研制成中药 5 类
新药云威灵油软胶囊治疗风湿痹病（类风湿性关节
炎）[5，11]， 其中麝香草酚和异丁酸百里香酯为该制剂
的主要有效成分。 为了解有效成分在全株植物的分
布状况， 我们对湖南省通道自治县产的显脉旋覆花
茎、叶、根及根茎进行了研究，含量测定结果表明，麝
香草酚和异丁酸百里香酯主要存在于显脉旋覆花的
根及根茎中，麝香草酚在茎及叶中的含量很低，茎及
叶中没有检出异丁酸百里香酯， 其研究结果验证了
临床治疗风湿痛常用根及根茎而不用茎及叶的正确
性，为临床用药及产品开发提供了实验依据。
3.3 不同产地云威灵有效成分的含量测定
结果表明， 麝香草酚和异丁酸百里香酯总量以
湖南省通道县含量较高， 异丁酸百里香酯含量湖南
产明显高于云南产。 这二种成分哪种对风湿痹病
（类风湿性关节炎）活性强，需要进一步研究。
3.4 不同采收期云威灵药材中麝香草酚和异西酸
百里香酯含量比较
表 1 显脉旋覆花不同药用部位含量测定结果（n=3，x±s，%）
药用部位
根
茎
叶
麝香草酚
0.110±0.010
0.048 3±0.002
0.010±0.000 1
异丁酸百里香酯
0.493±0.003
—
—
表 2 不同产地云威灵的含量测定结果 （n=3，x±s，%）
样品批号
20100916
20101024
20110927
20111026
20110719
20110827
20110923
20111030
20110914
20111022
产地
云南
云南
云南
云南
通道
通道
通道
通道
靖州
靖州
麝香草酚
0.344±0.002
0.331±0.003
0.360±0.004
0.411±0.002
0.286±0.002
0.384±0.003
0.307±0.003
0.166±0.003
0.398±0.001
0.405±0.003
异丁酸百里香酯
0.044±0.002
0.072±0.003
0.039±0.002
0.068±0.003
0.321±0.003
0.342±0.003
0.794±0.003
0.971±0.002
0.373±0.002
0.483±0.003
表 3 不同采收期云威灵的含量测定结果 （n=3，x±s，%）
图 3 不同采收期云威灵药材中麝香草酚+异丁酸百里香
酯含量柱形图
样品
编号
1
2
3
4
5
批号
20110726
20110826
20110926
20111026
20111126
采收
时间
7 月
8 月
9 月
10 月
11 月
麝香
草酚
0.283±0.003
0.364±0.003
0.295±0.004
0.154±0.003
0.060±0.002
异丁酸百里
香酯
0.317±0.004
0.354±0.003
0.772±0.002
0.981±0.003
0.788±0.002
李 柯，等 HPLC 测定不同药用部位、产地及采收期显脉旋覆花中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量第 7 期 43
表 1 铁皮石斛超微饮片及细粉颗粒多糖
及酚类溶出参数 （x±s，n=5）
注：与细粉颗粒比较 **P＜0.01。
参数
T50
Td
m
多糖
超微饮片 细粉颗粒
33.76±0.030** 41.26±0.010
43.64±0.040** 54.46±0.010
1.428±0.005 1.321±0.013
酚类
超微饮片 细粉颗粒
27.11±0.040** 33.84±0.010
37.76±0.080** 47.02±0.010
1.106±0.009 1.114±0.006
（本文编辑 杨 瑛）
药理与临床研究表明， 麝香草酚和异丁酸百里
香酯为云威灵治疗风湿痹病（类风湿性关节炎）有效
成分[12]，因此我们采用二种成分来评介药材质量。通
过对湖南省通道侗族自治县产显脉旋覆花不同采收
期的含量结果表明， 麝香草酚和异丁酸百里香酯在
药材中的总量以 10月份含量最高，麝香草酚随生长
时间延长呈逐渐下降趋势， 而异丁酸百里香酯先是
逐渐升高，到 11 月份开始下降，依据二种成分的综
合含量，结合显脉旋覆花的生长期、采收量及产地的
气候因素等，显脉旋覆花的采收期以 9、10月为宜。
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异丁酸百里香酯的含量研究[J].湖南中医药导报，2007，13（7）：
98－115.
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（本文编辑 杨 瑛）
的拟合方程为 Y=1.106X-4.017 （r=
0.993 2），铁皮石斛细粉颗粒的多糖拟合方程为 Y=
1.320X-5.279 （r=0.984 5）， 酚类的拟合方程为 Y=
1.114X-4.290（r=0.981 8）。
利用 Excel 电子表格计算溶出度参数 T50(药
物溶出 50%所需时间 )、Td （药物溶出 63.2%所
需时间 ）、m （溶出曲线斜率 ）等溶出参数 。 结果
见表 1。
通过拟合，铁皮石斛超微饮片及细粉颗粒的体
外溶出曲线符合威布尔分布，将处理结果所提取的
有关参数采用 t 检验， 得出铁皮石斛超微饮片与细
粉颗粒中多糖及酚类溶出的溶出度参数的差异具有
统计学意义（P＜0.01），表明铁皮石斛经超微粉碎后，
有效成分溶出的速率加快。
3 讨论
本文研究结果表明， 铁皮石斛超微饮片多糖及
酚类的最大溶出量高于细粉颗粒多糖及酚类的最大
溶出量（P＜0.01）；铁皮石斛超微饮片的 T50、Td 小于
细粉颗粒组，且差异具有统计学意义（P＜0.01），说明
超微粉碎提高了铁皮石斛中多糖及酚类的体外溶出
度，其原因可能与铁皮石斛经超微化，粒径变小，比
表面积增大， 有效成分与溶出介质间的有效接触面
积增大有关，从而使有效成分的溶出速率加快。
参考文献：
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湖南中医药大学学报 2013 年第 33 卷44