全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
作者简介:陈丹，讲师，研究方向:中药制剂工艺与质量制。E － mail:chend0915@ 163. com。
通讯作者:李若存，研究员，硕导。E － mail:ruocun2003@ yahoo. com. cn。
高效液相色谱法测定显脉旋覆花药材中
麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量
陈 丹1 李 柯2，3 胡薏冰2，3 史蕾喆2，3 李若存2，3
1. 湖南湘潭职业技术学院药学教研组，湖南 湘潭 411102;
2. 湖南省中医药研究院;湖南 长沙 410013;
3. 中药新药研究与开发湖南省重点实验室，湖南 长沙 410013
【摘 要】 目的:建立显脉旋覆花药材中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，95%乙醇回流
提取。色谱柱 C18 (Column 200 × 4. 6mm，5μ) ，流动相:乙腈 －水 (65:35) ，检测波长 220nm。结果:麝香草酚在 0. 224 ～ 1. 344μg范围
呈良好的线性关系，r = 0. 9998;异丁酸百里香酯在 0. 132 ～ 0. 792μg范围呈良好的线性关系，r = 0. 9996;平均回收率:麝香草酚 97. 94%，
RSD 为 1. 28%;异丁酸百里香酯 99. 09%，RSD为 1. 34%。重复性试验的 RSD分别为麝香草酚1. 0%、异丁酸百里香酯 1. 0%。结论:该方
法可靠、便捷，可以作为控制显脉旋覆花药材质量的方法。
【关键词】 显脉旋覆花;云威灵;毛秀才;麝香草酚;异丁酸百里香酯;高效液相色谱法;含量测定
【中图分类号】R927. 2 【文献标识码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2012)21 － 0045 － 03
Determination of thymol and thymyl isobutyrate in Inula nervosa Wall by HPLC
CHEN Dan1，LI Ke2，3，HU Yi － bing2，3，SHI Lei － zhe2，3，LI Ruo － cun2，3
1. Xiangtan Vocational and Technical College，Pharmic Research，Hunan Province Xiangtan 411102，China;
2. Hunan Academy of TCM;3. Key Laboratory of Research and Exploiture of Traditional
Chinese Medicine in Hunan Province，Changsha 410013，China
Abstract:Objective:To establish a quantitative method for determining the content of thymol and thymyl isobutyrate in Inula
nervosa Wall． Method:The sample was extracted with 95% ethanol，then analyzed on a C18 column using acetonitrile － water (65:
35)as mobile phase． The detection wavelength was set at 220nm． Results:The linearities of thymol and thymyl isobutyrate were re-
spectively in the range of 0. 224 ～ 1. 344μg (r = 0. 9998)and 0. 132 ～ 0. 792μg (r = 0. 9996) ;the average recoveries were
97. 94% (RSD 1. 28%)and 99. 09% (RSD 1. 34 %) ;the RSD of repeatability were 1. 0% and 1. 0% ． Conclusion:The method
is reliable and rapid for quality control of Inula nervosa wall．
Key words:Inula nervosa Wall;Yunweiling;Maoxiucai;thymol;thymyl isobutyrate;HPLC
显脉旋覆花是菊科植物显脉旋覆花 lnula nervosa Wall．
ex DC． 的干燥根及根茎，具有祛风除湿、通络止痛、健胃
消食的功能，为民间治疗风湿和跌打损伤的常用药物［1］［2］。
麝香草酚与异丁酸百里香酯为显脉旋覆花抗炎、镇痛、抑
制机体免疫反应的主要有效成分［3］。据报道麝香草酚与异
丁酸百里香酯含量测定采用气相色谱法测定，麝香草酚用
高效液相色谱法测定［4 － 6］，未见有高效液相色谱法麝香草
酚与异丁酸百里香酯的报道，为有效地控制显脉旋覆花药
材的质量，本文建立了用高效液相色谱法测定显脉旋覆花
药材中麝香草酚与异丁酸百里香酯的含量，同时，测定了
不同批号的显脉旋覆花药材。
1 仪器、试剂与药材
Perkin Elmer高效液相色谱仪 (美国 PE 公司) ;C18
(Column 200 × 4. 6mm，5μ)色谱柱 (大连依利特分析仪器
有限公司) ;EC2006 色谱数据处理系统 (大连依利特分析
仪器有限公司)。UV － 2450 型紫外可见分光光度计 (日本
岛津)。麝香草酚购于中国药品生物制品检定研究院，批
号:100508 － 200902，异丁酸百里香酯自制，GC 含量测定
纯度达到 98%以上。甲醇、乙腈 (色谱纯试剂，天津科密
欧化学试剂有限公司) ，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析
纯 (均为湖南汇虹试剂有限公司提供)。药材购自云南鸿翔
药业有限公司，经湖南省中医药研究院中药研究所生药研
究室鉴定为菊科植物显脉旋覆花 Inula nervosa Wall 的干燥
根及根茎。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅
胶为填充剂;以乙腈 －水 (65∶ 35)为流动相;检测波长
为 220nm。理论板数按麝香草酚峰计不低于 10000。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取麝香草酚对照品
11. 2mg、异丁酸百里香酯对照品 6. 6mg，置 100ml 量瓶中，
加 95%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (过三号筛)约
1. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 95% 乙醇
25ml，密塞，称定重量，加热回流 30 分钟，放冷，再称定
重量，用 95%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
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2. 4 线性关系考察 精密吸取对照品混合溶液 (麝香草酚
C = 0. 112mg /ml、异丁酸百里香酯 C = 0. 066mg /ml)2、4、
6、8、10、12μl 进样，测定其峰面积。以浓度为横坐标，
峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程:麝香草酚
Y = 2335. 9x + 17. 575，r = 0. 9998;异丁酸百里香酯 Y =
1480. 3x + 6. 5107，r = 0. 9996。结果表明麝香草酚在 0. 224
～ 1. 344μg，异丁酸百里香酯在 0. 132 ～ 0. 792μg 范围内具
有良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 取显脉旋覆花药材按供试品溶液的制备
方法制成供试品溶液。精密吸取 10μl，连续进样 6 次，测
定其峰面积，计算麝香草酚和异丁酸百里香酯峰面积 RSD
分别为 0. 7%和 2. 2%。
2. 6 稳定性试验 取 2. 5 项下的供试品溶液，精密吸取
10μl，于 0、4、8、12、24 小时进样，测定其峰面积。计
算，麝香草酚与异丁酸百里香酯 RSD 分别为 1. 4% 和
1. 6%，说明 24h内供试液稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取同一批药材制成供试品溶液 6 份，测
定含量。结果麝香草酚与异丁酸百里香酯 RSD 分别为
1. 0% 和 1. 0%，说明方法重复性好。
2. 8 回收率试验 精密称取 6 份已知含量的本品 0. 3g，每
份加入麝香草酚约 1mg 和异丁酸百里香酯 0. 3mg，按供试
品测定项下测定。麝香草酚平均回收率为 97. 94%，RSD为
1. 28%;异丁酸百里香酯平均回收率为 99. 09%，RSD 为
1. 34%。结果见表 1、表 2。
2. 9 样品含量测定 取 5 个不同批号显脉旋覆花药材，按
供试品溶液的制备方法制备成供试液，分别精密吸取对照
品溶液与供试品溶液各 10μl，注入高效液相色谱仪，测定，
即得。结果见表 3、图 1、图 2。
表 1 麝香草酚回收率测定结果表
编号 取样量 (g)
样品中含麝香
草酚 (mg)
添加麝香草
酚量 (mg)
实测麝香草
酚总量 (mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD (%)
1 0. 3132 1. 0461 0. 96 1. 98 97. 28
2 0. 3151 1. 0524 0. 96 1. 98 96. 63
3 0. 3102 1. 0361 0. 96 1. 98 98. 32
4 0. 3178 1. 0615 0. 96 1. 99 96. 72
5 0. 3066 1. 0240 0. 96 1. 98 99. 58
6 0. 3109 1. 0384 0. 96 1. 99 99. 13
97. 94 1. 28
表 2 异丁酸百里香酯回收率测定结果表
编号 取样量 (g)
样品中含异丁酸百里
香酯量 (mg)
添加异丁酸
百里香酯量 (mg)
实测异丁酸百里
香酯总量 (mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD (%)
1 0. 3132 0. 1347 0. 29 0. 42 98. 38
2 0. 3151 0. 1355 0. 29 0. 43 101. 55
3 0. 3102 0. 1334 0. 29 0. 42 98. 83
4 0. 3178 0. 1367 0. 29 0. 42 97. 69
5 0. 3066 0. 1318 0. 29 0. 42 99. 38
6 0. 3109 0. 1337 0. 29 0. 42 98. 72
99. 09 1. 34
表 3 样品含量测定 (n = 3)
批号
麝香草酚含量
(%)
异丁酸百里
香酯含量 (%)
麝香草酚 +异丁
酸百里香酯含量 (%)
20110714 0. 33 0. 04 0. 37
20110816 0. 35 0. 05 0. 40
20110831 0. 33 0. 04 0. 37
20111118 0. 76 0. 20 0. 96
20111126 0. 42 0. 04 0. 46
图 1 麝香草酚与异丁酸百里香酯 HPLC色谱图
3 －麝香草酚 4 －异丁酸百里香酯
图 2 显脉旋覆花药材 HPLC色谱图
5 －麝香草酚 6 －异丁酸百里香酯
3 讨论
3. 1 含量测定指标成分的选择 显脉旋覆花的功能为祛风
湿、通络止痛、健胃消食。经研究抗炎镇痛主要有效部位
为挥发油，我们将其开发成 5 类中药新药 (云威灵油软胶
囊)治疗类风湿性关节炎患者［7 － 9］。麝香草酚、异丁酸百
里香酯二者之和占挥发油总量的 70%以上，并且为抗炎镇
(下转第 48 页)
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最适温度是 30℃，高于 40℃就会死亡。韩国国立农业学院
的 KNAC3005 菌株，菌丝生长和菌丝浓密度在 30℃，10d
生 长 58. 3mm， 其 次 为 25℃， 20℃， 15℃， 35℃，
10℃，5℃。
2. 3 pH水平对桦褐孔菌生长的影响 培养基的 pH 对桦褐
孔菌的生长有巨大的影响。研究表明，pH 值 2 ～ 8 时桦褐
孔菌都能生长，pH 值 5. 5 ～ 6. 5 最有利于菌丝体生长和胞
外多糖积累。据 Kahlos［16］研究，在低 pH 水平时桦褐孔菌
只含有很少量的三萜，在 pH 值为 7. 29 时，桦褐孔菌中富
含三萜醇和栓菌酸，表明三萜的产生并不依赖酸性条件，
而且栓菌酸的形成并不依赖于培养基中的酸性物质。
2. 4 重金属对桦褐孔菌生长的影响 重金属 Hg、Cd 和 Co
有强的毒性，能强烈抑制菌类的生长。桦褐孔菌对 Cd具有
很强的敏感性，在 Cd ＞ O. 1 mmol /L的情况下不能生长［17］。
Cu、Zn、Mn可以提高桦褐孔菌菌丝体中水解鞣质的积累。
3 结语
近年来，随着人们对桦褐孔菌药理成分研究的不断深
入，大量的活性成分被分离出来，其在疾病治疗方面显示
出广阔的应用空间，市场需求量逐年上升。然而，桦褐孔
菌在野生环境下生长极为缓慢，自然状态二十年才能收成
一次，远远满足不了市场需求。目前国内外很多学者开始
对桦褐孔菌进行人工培育研究，许多研究机构培养的白桦
茸菌丝体活性成分较少，应用价值较低，目前尚不能进行
工业化生产，因此，应进一步加大对对桦褐孔菌的研究力
度，充分挖掘其药用价值，促进人类健康事业的发展。
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(收稿日期:2012. 09. 23
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 46 页)
痛的主要有效成分，所以我们选择了麝香草酚和异丁酸百
里香酯作为显脉旋覆花药材含量控制指标，经方法学考察
和 5 个不同批号样品的测定表明该方法可靠、便捷，可以
作为控制显脉旋覆花药材的质量方法。
3. 2 波长的选择 选择色谱条件时，曾试用 274nm的波长
进行检测，结果异丁酸百酯含量很低，后经紫外检测，发
现 220nm波长下麝香草酚与异丁酸百里香酯都有较大的吸
收，所以选择 220nm做为检测波长。
3. 3 麝香草酚和异丁酸百里香酯在药材中的含量 实验结
果表明不同批号的显脉旋覆花中麝香草酚和异丁酸百里香
酯含量差异较大，可能与生长环境、采收季节有关，所以
本研究采用同时测定 2 个成分的含量作为质量控制方法。
显脉旋覆花中麝香草酚和异丁酸百里香酯含量与产地、采
收季节的相关性正在研究中。
3. 4 药用部位 《云南省中药饮片标准，2005 年版》第一
册收载的云威灵为显脉旋覆花的干燥根及根茎，《湖南省中
药材标准，2009 年版》收载的毛秀才为显脉旋覆花的干燥
全草，而记载的功能都是祛风除湿、通络止痛、健胃消食。
显脉旋覆花的茎与叶与根茎是否有相同的化学成分，需要
进一步研究。
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(收稿日期:2012. 09. 20)
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