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雪梨膏中绿原酸类多酚化合物的含量测定



全 文 :2015 年 8 月第 17 卷第 4 期
August 2015,Vol. 17,No. 4
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
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(稿件修回日期:2015-06-25 编辑:熊斌)
基金项目:2009 湖北省教育厅科学技术研究重点项目(2009 - 091)。
作者简介:付静(1991 -) ,女 ,湖北中医药大学 2014 级硕士研究生,研究方向:药物新制剂、新剂型及新技术研究。
通讯作者:聂诗明(1962 -) ,男,湖北中医药大学教授,研究方向:中药新制剂、新剂型研究,E - mail:163nsm@ 163. com。
雪梨膏中绿原酸类多酚化合物的含量测定
付静,朱月月,聂诗明
(湖北中医药大学药学院,湖北 武汉 430065)
摘要:目的 建立雪梨膏的含量测定方法。方法 采用紫外分光光度法测定雪梨膏中绿原酸类多酚化合物的含
量。结果 检测波长为 329nm,绿原酸在 3. 5 - 28. 2μg /mL线性关系良好(r = 0. 9998) ;平均回收率 95. 59%;有较好的
精密度、重复性及稳定性。结论 本方法简便、准确,重现性好,可用于雪梨膏的含量测定
关键词:雪梨膏;紫外分光光度法;绿原酸;含量测定
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1008 - 987x. 2015. 04. 12
Determination of Polyphenol Compounds of
Chlorogenic Acids in Xueli Extract
FU Jing,ZHU Yueyue,NIE Shiming
(School of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065)
Abstracts:Objective To establish the determination method of Xueli extract. Method Determine the polyphenol compounds of chlo-
rogenic acids in Xueli extract by UV spectrophotometry. Result The wavelength was 329nm,Chlorogenic acids was linear in the range of 3.
5 - 28. 2μg /mL(r = 0. 9998) ,the average recovery was 95. 59%,precision,repetition and stability was well . Conclusion The method is
simple and accurate,it also has good reproducibility. This method can be applied to determine the Xueli extract.
Key words:Xueli extract;UV spectrophotometry;chlorogenic acids;determination
雪梨膏是《卫生部药品标准·中药成方制剂》收载的中药
制剂(WS3 - B - 2029 - 95) ,具有清肺热、润燥止渴之功能。临
床常用于干咳、久咳,有较好的疗效。如用于慢性咽炎的研究,
有效率达到 90%以上[1 - 2]。雪梨膏为梨制成的煎膏剂,对于梨
的生物活性成分很少有研究报道,以致药品标准中雪梨膏一直
无含量检测项。近期有液 -质联用方法检测梨中酚类物质的
研究,检出数 10 种酚类物质,主要有绿原酸、熊果苷、没食子酸、
咖啡酸、咖啡奎宁酸、表儿茶素、儿茶素、柚(皮)苷、芦丁、槲皮
素 -葡萄糖苷、槲皮素 -半乳糖苷、槲皮素 -鼠李糖苷、香豆酸
-葡萄糖苷、槲皮素 - 戊糖苷、鼠李糖素 - 葡萄糖苷、槲皮素
等[3 - 5]。
绿原酸类多酚化合物具有抗氧化、抗自由基、抗炎症等重要
的生物活性,如绿原酸广泛的药用价值[6]。据此,测定雪梨膏
中多酚化合物的含量具有重要意义。鉴于绿原酸类多酚化合物
多具有较强的紫外吸收特征,本研究通过紫外分光光度法建立
雪梨膏中绿原酸类多酚化合物的测定含量方法,现报道如下。
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2015 年 8 月第 17 卷第 4 期
August 2015,Vol. 17,No. 4
1 仪器与试药
UV -2501PC紫外可见分光光度计(购自日本岛津公司) ,
电子天平(购自北京赛多利斯天平有限公司) ,雪梨膏(湖北端
正药业有限公司生产,批号 130101、130102、130103) ;绿原酸对
照品(中国食品药品检定研究院提供,批号 110753 - 200413,供
含量测定用) ;乙醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司提
供)、水为二次蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 对照品及供试品溶液的制备
2. 1. 1 对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品 2. 82mg 置
于 100mL容量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀。即得对照品溶液,浓
度为 28. 2μg /mL。
2. 1. 2 供试品溶液的制备:精密称取雪梨膏 0. 20g放至 100mL
容量瓶,加 5mL水溶解,加乙醇适量,超声 20min,补加乙醇至刻
度,摇匀。过滤,取续滤液 ,即得。
2. 1. 3 阴性对照溶液的制备:按雪梨膏处方及制备工艺制成不
含梨的阴性对照,再按“2. 1. 2 供试品溶液的制备”项下的方法
制成阴性对照溶液。
2. 2 检测波长选择
分别取绿原酸对照品溶液、雪梨膏供试品溶液及阴性对照
溶液,以乙醇为空白,于紫外 - 可见分光光度计进行 200 -
400nm光谱扫描。绿原酸在 329nm 有最大吸收,为苯丙烯酸母
核的特征吸收,供试品最大吸收为 280nm,在 329nm 有较强吸
收,阴性对照在 329nm 基本无吸收。因此检测波长确定为
329nm。紫外光谱见图 1 -图 3。
图 1 绿原酸对照品紫外光谱
图 2 供试品紫外光谱
图 3 阴性对照紫外光谱
2. 3 线性关系的考察
取绿原酸对照品溶液,分别用乙醇配制成浓度为 28. 2、
14. 1、9. 87、7. 05、3. 525μg /mL 的系列溶液,以乙醇为空白,
329nm波长测定吸光度。以对照品溶液的浓度为横坐标,吸光
度为纵坐标绘制标准曲线,回归方程为:Y = 0. 0437x - 4. 3431,
线性系数 r = 0. 9998,表明在 3. 5 - 28. 2μg /mL 线性关系良好。
见表 1。
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表 1 线性关系
浓度(μg /mL) 吸光度(ABS)
1 28. 2 1. 231
2 14. 1 0. 618
3 9. 87 0. 440
4 7. 05 0. 305
5 3. 525 0. 150
2. 4 精密度试验
取同一对照品溶液,于 329nm测定吸光度,连续 5 次,结果
分别为 0. 305、0. 306、0. 305、0. 304、0. 305,RSD 为 0. 23%,表明
精密度良好。
2. 5 重复性试验
取同一批样品,按供试品项下制备供试品溶液,平行制备 5
份,测定其吸光度,按回归方程计算含量。测得结果分别为
11. 25、11. 33、11. 24、11. 40、11. 61mg /g,RSD 为 0. 98%,表明方
法的重复性良好。
2. 6 稳定性试验
取同一供试溶液,分别放置 0、1、4、8、12、24h后测定其吸光
度。结果 RSD为 0. 18%。表明供试品溶液较稳定。
2. 7 加样回收率
取已知含量的雪梨膏样品(含量为 6046. 25μg /g)5 份,各
份中分别加入绿原酸 1095μg,按供试品制法制备供试溶液,测
定其吸光度,按回归方程进行计算。结果绿原酸加样平均回收
率为 95. 59%。见表 2。
表 2 加样回收试验结果
样品含量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1209. 25 1095. 00 2279. 83 97. 77
1218. 52 1095. 00 2304. 43 99. 17
1229. 44 1095. 00 2251. 95 93. 38 95. 59
1245. 68 1095. 00 2258. 88 92. 53
1216. 01 1095. 00 2257. 14 95. 08
2. 8 含量测定及限度制订
对 3 批样品制备供试品溶液,按正文条件测定其吸光度,按
回归方程计算含量,结果见表 3。
表 3 雪梨膏样品含量测定结果
批号 绿原酸类多酚的含量(mg /g)
130101 12. 093
130102 11. 550
130103 11. 920
3 批样品的含量以绿原酸(C16 H18 O9)计为 11. 55 - 12. 09
mg /g。根据 3 批样品的含量结合生产实际,暂定本品含绿原酸
类多酚化合物以绿原酸(C16H18O9)计不得少于 10 mg /g。
3 讨论
已有文献报道用 HPLC测定绿原酸的含量[7 - 10],但是笔者
曾通过 HPLC检测雪梨膏中绿原酸类多酚化合物,结果显示其
绿原酸等色谱信号极微,不宜于测定。鉴于绿原酸类多酚化合
物多具有较强的紫外吸收特征,宜采用紫外分光光度法测定类
似成分的总含量。
本实验建立的方法操作简单、方便、灵敏度高、重现性好,适
用于测定雪梨膏中绿原酸类多酚化合物的含量测定。
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(稿件修回日期:2015-06-16 编辑:熊斌)
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