全 文 :!!
朱丽云,张拥军,叶! 璟,龚圣楠
(中国计量学院生命科学学院,浙江杭州 !##$)
摘% 要:为开发替代抗生素使用的植物源饲料添加剂,本实验对浙江地区不同经济品种的杨梅叶提取物进行了抑菌活
性的研究。采用水提和醇提法对东魁、荸荠、丁岙和晚稻等九种经济品种杨梅叶进行了提取和真空浓缩,分别测定了
提取物得率和抑菌效果,结果表明,九种杨梅叶提取物均具有抑菌活性,晚稻品种水提液抑菌效果显著高于其他品种,
醇提液抑菌效果的水晶种、深红种差异不大,高于其他品种。
关键词:经济品种,提取,抑菌活性
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中图分类号:@/A#>A% % % % 文献标识码:B% % % % 文 章 编 号:##A!#C(A##?)A#$$!
收稿日期:A##?A&$% 通讯联系人
作者简介:朱丽云(?DC&),女,讲师,主要从事微生物发酵、食品深加
工及开发研究。
基金项目:浙江省科技攻关计划项目(A##D’AAEA#$###F)。
% % 浙江省是我国杨梅的主产区,全省杨梅面积、产
量分别达到 C 万公顷、A# 多万 9,约占全国杨梅栽培
面积的 A#G、产量的 !#G。经济栽培的主要有临海
早大梅、早荠杨梅等早熟品种;荸荠种、丁岙梅、大叶
细蒂、乌梅、大炭梅、深红种、水晶杨梅等中熟品种;
东魁杨梅、晚稻杨梅、晚荠杨梅等晚熟品种。它们的
栽培面积约为全省杨梅种植面积的 ?HG,产量约占
全省杨梅总产量的 ?$G,经济价值约占 ??G。主栽
品种为东魁、荸荠种、丁岙梅和晚稻杨梅 F 个大宗品
种,原产地分别为台州市黄岩区、余姚市、温州市龙
湾区和舟山市定海区白泉镇。这四大品种,不但现
在全省有广泛种植,而且全国各地都普遍种植。但
是各地新发展的品种都以东魁、荸荠种两个品种为
主[&A]。近年来,由于抗生素及化学合成药物在畜禽
体内及其肉、蛋、奶等食品中残留,以及细菌耐药性
及抗药性的产生,减少和限制使用抗生素饲料添加
剂已成为不可逆转的趋势[!&F]。利用我国丰富的植
物资源,从中发现和提取出低毒性、广谱的抗菌、杀
虫黄酮类化合物药物或添加剂将是当前植物资源利
用和替代抗生素的重要方向之一。据报道杨梅果核
和树皮中有明显的抗氧化活性,杨梅叶有资源优势,
因此正展开抑菌抗氧化等研究[H],基于省内种植优势
和杨梅叶的这些作用,开展对浙江省内主要栽培的
杨梅不同经济品种的叶子提取物进行抑菌活性的研
究,为开发用于饲养业替代饲用抗生素的天然抑菌
添加剂提供有效佐证,对促进有机畜牧业的发展具
有重要的意义。
<=大肠杆菌,金黄色葡萄球菌;培养基 % 营养肉
汤、营养琼脂;杨梅叶品种主栽品种 % 东魁种、荸荠
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2009.12.115
!#
种、丁岙种和晚稻种,分别采自原产地台州市黄岩
区、余姚市、温州市龙湾区和舟山市定海区白泉镇;
其他经济栽培品种 ! 早荠杨梅、大炭梅、深红种、水
晶杨梅和晚荠杨梅等,前两种分别采自杭州萧山和
慈溪横河镇,其他三种采自余姚牟山镇。
#$%&’($)洁净工作台,*+,-$./’.0 冷冻恒
温培养摇床,1# $ 2/3 高压蒸汽灭菌锅,4*5 $
6.&’781数显鼓风干燥箱,9+5型智能生化培养箱,
*+,-$//’ 2’ 往复式水浴恒温培养摇床,超声萃取
仪,电炉,电子天平等。
!#$ 实验方法
/:.:/! 水提法! 以料水比为 / ;/’,温度为 <’=恒温
振荡提取 .> 后,过滤取滤液,滤渣按上述步骤重提
一次,再将两次所得的提取液合并浓缩备用。
/:.:.! 醇提法! 用 %3?的乙醇,以料醇比为 /;/’,温
度为 &’=恒温振荡提取 .> 后,过滤取滤液,滤渣按
上述步骤重提一次,再将两次所得的提取液合并浓
缩备用。
/:.:2! 提取液固形物含量和提取得率的计算! 取充
分干燥的小烧杯称其质量 7/,加入 /’@A 提取液,烘
干至恒重后称其质量 7.。
提取液固形物含量(@B C @A)D(7.$7/)C /’
得率(?)D(7.$7/)E C(/’ E F)E /’’?
其中:为浓缩后提取液总体积;F 为加入的原
料重量。
/:.:&! 杨梅叶提取物抑菌率的测定! 分别准确吸取
/@A提取稀释液注入已灭菌的培养皿中。再取各供
试菌种 3’!A(含菌数为 /’2 G/’& 个,大概液体培养
H>)分别加入各自的提取物中混匀。最后倒入培养
基 /’@A混匀。每个菌种分别做两个重复[H]。以不
加提取物作为空白对照((8)。
抑菌率(?)D(对照实验菌落数$相应浓度菌
落数)C对照实验菌落数 E /’’?
#$ 结果与分析
#!$ 九种杨梅叶不同提取方法的得率比较
根据文献资料中植物源材料普遍采用的提取方
法和本实验前期工作对提取单因素实验等研究的基
础上,选定一定的料水比、温度和提取时间对不同品
种的杨梅叶进行水提和 %3?的醇提研究,通过计算
得到各材料提取物得率如表 / 所示。
表 /! 七种原料不同提取方法的得率
杨梅叶品种 水提得率(?) 醇提得率(?)
东魁 /2:2. %:’/
荸荠 /2:/2 <:%’
丁岙 6:’’ /’:<’
晚稻 //:H. 6:<2
早荠杨梅 &:HH /:<3
大炭梅 H:HH 3:%’
深红种 /&:<. H:62
水晶杨梅 //:<. H:%<
晚荠杨梅 <:&2 3:./
! ! 通过比较可以发现,除丁岙种醇提得率高于水
提得率以外,其他八个品种的杨梅叶水提得率均高
于醇提,其中东魁、荸荠、深红种、水晶杨梅水提得率
显著高于醇提得率,水提得率不同品种差异较大,而
醇提得率除早荠杨梅外,其他各个品种间差异不大。
##$ 杨梅叶提取物对微生物的抑菌效果
对各个不同品种杨梅叶提取液进行固形物百分
含量计算,将水提液固形物含量统一稀释为
’:’/..3@B C @A,醇提液固形物在 ’:’/..3@B C @A 时抑
菌效果大多为 /’’?,为增加可比性统一稀释为
’:’’3.3@B C @A,使用前均稀释 /’ 倍,比较其对金黄
色葡萄球菌(4 I)和大肠杆菌(4 $)的抑菌作用,结果
见图 / 和图 .。
图 /! 不同品种杨梅叶水提液对细菌的抑制作用
图 .! 不同品种杨梅叶醇提液对细菌的抑制作用
由图 /、图 . 可知,不同品种的杨梅叶 %3?乙醇
提取物在总体上对细菌的抑制效果明显高于相应的
水提物,实验中当醇提物采用水提物抑菌实验固形
物浓度时,醇提物基本上能达到 /’’?的抑菌率。水
提物中除舟山晚稻品种对大肠杆菌及金黄色葡萄球
菌的抑菌率均比较高外,其他品种抑菌效果差异较
大,荸荠、丁岙和早荠三个品种提取物在此浓度下的
抑菌率仅 .’?。
从图 .中可知,采自舟山的晚稻品种和余姚牟山
镇的水晶杨梅和深红种三个品种醇提液对大肠杆菌和
金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好,均在 %’?以上,其
他品种中对大肠杆菌的抑菌效果为荸荠 J大炭梅 J晚
荠 J早荠 J丁岙 J东魁,对金黄色葡萄球菌的抑菌效
果为荸荠 J大炭梅 J丁岙 J东魁 J早荠 J晚荠。
%$ 讨论
%!! 根据以上结果分析,在浙江地区主栽品种东魁、
荸荠、丁岙和晚稻四大良种中,晚稻品种杨梅叶的抑
菌性能最好。晚稻杨梅叶水提液相对其他品种而言
得率居中但抑菌作用效果突出,醇提液提取得率仅
次于丁岙种和早荠杨梅且抑菌效果较优。根据醇提
物抑菌效果优于水提物抑菌效果,可以推测杨梅叶
中抑菌活性成分在乙醇中的溶解性高于水中溶解
性。有报道认为杨梅叶中的二氢杨梅树皮素、槲皮
素等黄酮类化合物是主要的抑菌活性所在,亦有报
(下转第 6. 页)
!#
表 ! 淀粉性质与粉皮质量的相关性
相关系数
直链淀粉
含量(#)
不溶性直链
淀粉含量(#)
煮沸损失
(#)
断条率
(#) 膨胀度
可溶性直链淀粉
损失率(#)
拉伸强度
($ % &’)
煮沸损失(#) ( ( )*+,+, , )*+-./ ( )*+-+’ ( )*+0.1
断条率(#) ( ( )*+-/, )*+-./ , ( )*++++ (
注:(表示相关性不显著(2 3 )*)1)。
性直链淀粉含量最低。葛根淀粉、马蹄淀粉的直链
淀粉含量几乎一样,但不溶性直链淀粉含量差异较
大,分别占各自直链淀粉的 !/*!/#、0!*!1#。据此
对比粉皮的质量,绿豆粉皮 3马蹄粉皮 3葛根粉皮
3玉米粉皮,可推测直链淀粉特别是不溶性直链淀
粉含量是决定粉皮质量的重要因素。
图 ! 四种淀粉直链淀粉、可溶性 %不溶性直链淀粉含量的比较
!#$ 淀粉性质与粉皮质量的关系
用 454软件对淀粉性质与粉皮质量之间的关系
进行相关性分析,结果如表 ! 所示。
由表 ! 可看出,粉皮质量最重要的衡量指标是
煮沸损失、断条率和可溶性直链淀粉损失率。粉皮
的煮沸损失、断条率与淀粉中不溶性直链淀粉含量
显著相关,而与直链淀粉含量的相关性不显著,说明
了不溶性直链淀粉含量是决定粉皮质量的重要因
素,要得到质量好的粉皮,必须提高淀粉中的不溶性
直链淀粉含量。可能是因为不溶性直链淀粉可以为
淀粉大分子提供更多的氢键位点,从而形成更为紧
密的网络结构[0];另外,也有利于防止粉皮在烹煮过
程中成分的溶出。
对直链淀粉含量、不溶性直链淀粉含量、淀粉高
低温时粘度变化、淀粉高温时溶解度差、高温时膨润
度差等影响葛根粉皮质量的因素进行主成分分析,
结果显示,直链淀粉和不溶性直链淀粉含量决定了
葛根粉皮质量的 ./*)+#,再加上葛根淀粉在高低温
时的粘度变化,可以决定其 ,))#的质量。因此,可
以用淀粉的直链淀粉特别是不溶性直链淀粉含量以
及 6789:;<:7粘度曲线来预测粉皮的质量。
%$ 结论
直链淀粉特别是不溶性直链淀粉含量以及淀粉
6789:;<:7粘度曲线中的热糊稳定性与冷糊稳定性是
决定四种粉皮质量的重要因素,可用它来预测其他
淀粉的加工性质。直链淀粉含量高的淀粉易于老
化,能产生较强的凝胶,使粉皮有较大的抗拉度,烹
煮时不易断条;不溶性直链淀粉含量高,可使粉皮煮
沸损失小、耐煮性好、不糊汤;热糊稳定性好的淀粉
制成的粉皮煮沸损失小、口感好;冷糊稳定性好的淀
粉制成的粉皮不易断条。
参考文献
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[0]> ? ?:<<@,4 A 5BC,> ? 6D8EE8FD87@8*GD: HC;: IE7JFEJ7: KH
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(上接第 .+ 页)
道杨梅叶提取物中主要由黄酮类化合物及原花色素
类组成的酚类化合物具有抗氧化活性的研究,以上
抗氧化成分是否同时具有抑菌活性以及二氢杨梅树
皮素、槲皮素等黄酮类化合物是否确为抑菌活性主
要成分有待于进一步研究。
%! 植物在不同的生长季节其内含物差异较大,因
此宜开展对采自不同季节的杨梅叶提取物进行比对
分析,并对抑菌效果好且资源丰富的杨梅叶提取物
进行有效提取和分离纯化研究,以提高得率和明确
抑菌活性组分,用于指导成分差异大且抑菌活性强
的不同天然植物源提取物之间的有效复配,为开发
可用于食品加工所需的天然防腐剂和替代抗生素的
饲料添加剂等提供理论基础。
参考文献
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