全 文 ：收稿日期:2006-07-16
作者简介:刘佳(1964-)女 ,副主任技师 ,学士 ,主要从事保健食
品毒理学研究。
野生牛肝菌营养成分分析及对小鼠免疫功能的影响
刘　佳1 ,高　敏1 ,殷　忠1 ,俞　红1 ,梁　洁2 ,黄俊学2
(1.贵州省疾病预防控制中心;2.贵州师范大学分析测试中心:贵阳　550004)
摘要:目的:对野生牛肝菌进行营养成分分析并观察其对环磷酰胺(CP)损伤免疫系统小鼠的免疫调节作用。
方法:①成分分析:用凯氏法测定野生牛肝菌中蛋白质(总氮)含量 , 用氨基酸分析仪测定野生牛肝菌中的氨
基酸含量 ,用原子吸收光谱法测定野生牛肝菌中各矿物元素含量。 ② 动物试验:实验设野生牛肝菌组 9.0
mg/(kg·bw)+CP、CP 组 、正常对照组 。灌胃小鼠牛肝菌提取液 35 d , CP腹腔注射造成小鼠免疫损伤。观察
小鼠胸腺脏器系数 、血清溶血素 、小鼠足趾 DTH 、碳粒廓清指数α等指标。 结果:野生牛肝菌蛋白质含量为
219 g/ kg(干品);含 17 种氨基酸 , 其中人体 8种必需氨基酸的含量 5415 mg/ 100g 占总氨基酸含量 16863 mg/
100g 的 32%;含有人体必需的矿物元素(P 、Cu 、Fe、Zn 、Ca、Mn)。动物免疫试验中血清溶血素(HC50)、小鼠足
趾 DTH 、碳粒廓清指数α明显高于 CP组(P <0.01),其中小鼠足趾 DTH 恢复至正常对照组水平。结论:野
生牛肝菌是一种具有较高营养价值的野生食用菌。在本实验条件下 ,野生牛肝菌对 CP所致的免疫损伤小鼠
的细胞免疫 、体液免疫 、非特异性免疫功能有明显的改善作用。
关键词:野生牛肝菌;营养成分;小鼠;免疫功能
中图分类号:S58　文献标识码:A　文章编号:1005-5320(2007)01-0005-03
Analysis of the nutrient ingredient of natural Boletus and effect of its on mouse immune function
LIU Jia1 , GAOMin1 , YINZhong1 , et al
(1.Guizhou provincial Center for Disease Control and Prevention;2.Center for analyst test in Guizhou Normal U-
niversity :Guiyang 550004 , China)
Abstract:Objective:To analyse the nutrient ingredients of natural Boletus and observe its regulation on mouse immune injury caused by
cyclophosphamide (CP).Methods:①Analysis of nutrient ingredients:the content of total pro tein , amino acid and variousmineral ele-
ments in natural Boletus w as determined by Kjeldahl method , anino acid analyzer and atomic absorption spectrometry respectively.②ani-
mal experimentation:Mice were randomly assigned to three groups:9g/(kg·bw )Boletus+50mg/(kg·bw)CP , CP , the normal con-
trol.Mice were administered with ex tract of Boletus , by oral gavage , for 35 days.The immune injury in mice was induced by CP.Some
indeies including clinic symptom , organic index , hemolysin(HC50), footpad delayed type hypersensitivity(DTH), and carbon granule
clearance index were observed.Results:The protein content was 219g/kg dry natural Boletus.The natural Bole tus contained 17 amino
acids including 8 essential amino acids , the content of essential amino acid in to tal amino acid w as 32%(5415 mg/100g dry Boletus vs
16863 mg/100g dry Boletus).The necessary mineral elements w ere very aboundant , for instance P Cu Fe Zn Ca Mn etc.In immuno-
logical experiments , hemolysin(HC50), footpad DTH andα-index of carbon clear test were significantly higher than that of CP group
(P<0.01), in par ticular , footpad DTH returned to normal control level.Conclusion:The natural Boletus is a edible w ildlife mushroom
with high nutrient value , and has obviously improving on the humoral , cellular and innate immune injury induced by CP in mice.
Key Words:Natural Boletus;Nutrient ingredient;Mouse;Immune function
　　野生牛肝菌(Boletus sp)又名大脚菇 ,于每年夏
秋季收成。子实体粘软多汁 ,香滑可口 ,盛产在贵
州 、云南等地 ,在贵州是人们喜食且产量较高的野生
食用菌。蘑菇类物质富含蛋白质 、维生素 、多糖类物
质 、氨基酸和各种矿物元素[ 1～ 3] ,它的提取物具有
增强免疫力 、抗癌 、抗辐射等功能[ 4 ～ 7] 。野生牛肝
菌是贵州山区的一种特产 ,为此 ,本研究对野生牛肝
菌进行了主要化学成分 、矿物元素和氨基酸分析 ,并
研究了野生牛肝菌对免疫系统受损的小鼠免疫功能
的改善作用 ,旨在为野生牛肝菌的开发利用提供科
学依据 。
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1　材料与方法
1　材　料
1.1.1　主要仪器 　紫外分光光度计:型号 PHO-
TOMET RY 2010(Multi -λ), 氨基酸分析仪:
(AAA)美国 DIONEX公司 , 723分光光度计:上海
分析仪器厂 , 原子吸收分光光度仪:日本岛津
AA6800。
1.1.2　试验动物及环境　贵阳医学院实验动物中
心(合格证号 SCXK(黔)2002-0001)提供清洁级雌
性昆明种小鼠(18 ～ 22g)、小鼠饲料 、绵羊红细胞 、制
备补体用的豚鼠 。饲养环境为贵州省疾控中心洁净
动物实验室(合格证号 SYXK(黔)2003-0003)。
1.1.3　样品采集　在超市购买的贵州里海土特产
食品有限公司出品的野生牛肝菌(干品),置于干燥
器内保存备用。
1.2　方　法
1.2.1　理化分析　蛋白质含量:用凯氏法测定总氮
含量;矿物元素含量:用 HNO3 —HClO4 消化 , 原子
吸收光谱法测定磷 、钾 、铜 、铁 、钙 、锰 、锌 、镁等矿物
元素;氨基酸含量:酸水解法 ,氨基酸分析仪测定。
1.2.2　动物试验
1.2.2.1　样品处理　将牛肝菌干品置 50℃烘 2 h ,
粉碎 ,用蒸馏水浸泡 2 h以上 ,加热煮沸 ,控制温度
继续煮沸 30 min ,冷却后用双层纱布挤压过滤 ,同
法提取 3 次 , 合并滤液 , 80℃水浴减压浓缩 、定容
(0.45 g 干品/ml)备用。
1.2.2.2　动物分组与方法　据动物体重随机分组 ,
用雌性小鼠 60只 ,分为 3组 ,每组动物 20只 ,设为
①正常对照组;②野生牛肝菌 9g/(kg·bw)+环磷酰
胺(CP)50 mg/(kg·bw)组;③环磷酰胺(CP)50 mg/
(kg·bw)组。每日灌胃 1 次。 ②组灌胃野生牛肝菌
提取物 , ①、③组灌胃等容积的蒸馏水 ,连续 35 d。
②、③组在开始实验时 ,每天腹腔注射 CP50mg/(kg
·bw),连续 7 d ,实验结束前 5 d , ②、③组小鼠再腹
腔注射CP100mg/(kg·bw)1次。
1.2.2.3　测定指标　依据《保健食品检验与评价技
术规范》(2003年版)进行测定及统计 。
1.2.2.3.1　免疫器官脏体系数　试验结束称体重
后 ,处死小鼠 ,摘取胸腺 ,称重 ,计算脏体系数 。
1.2.2.3.2　碳粒廓清试验 试验结束时 ,小鼠左内
眦静脉丛注射 33%的印度墨水 20 ml/(kg·bw),于
注射后 1 min 、10 min分别从右内眦静脉丛取血 20
μl ,放入 2%Na2CO32ml溶液中 ,测定两次的 OD值 ,
用吞噬指数 α(α代表小鼠碳廓清的能力)表示 。
α=体重/(肝重 +脾重)× 3 K , K =(lg OD— 1 -
lgOD2)/ (t2-t1), t1 、t2 代表注射墨汁后的两次取
血时间 。
1.2.2.3.3　血清抗 SRBC 抗体测定(HC50)　用
2%SRBC腹腔免疫小鼠 , 4 d后 ,眼内眦静脉取血 ,
分离血清 ,测定血清抗体水平 ,以半数溶血值 HC50
表示 ,HC50=样品光密度值/SRBC 半数溶血时的光
密度值×稀释倍数 。
1.2.2.3.4　迟发性变态反应(DTH)　小鼠用 2%
SRBC腹腔免疫小鼠后第 4 d ,在其左后趾部皮内注
射 20%SRBC ,注射后 24 h 测定足趾部厚度 ,以攻击
前后足趾厚度差值(mm)表示 。
1.2.2.3.5　统计分析　采用 SPSS11.0 软件进行
统计学处理数据。
2　结　果
2.1　理化分析结果
表 1　野生牛肝菌蛋白质及矿物元素含量(mg/kg)
测定项目 N P Cu Fe Zn Ca Mn
野生牛肝菌 219000 500 13.2 122.6 19.6 21.6 22.6
表 2　野生牛肝菌氨基酸含量(mg/100g)
氨基酸名称 野生牛肝菌 氨基酸名称 野生牛肝菌
赖氨酸 Lys＊ 1024 丙氨酸 Ala 2028
苏氨酸 Thr＊ 1050 甘氨酸 Gly 1591
颉氨酸 Val＊ 1106 丝氨酸 Ser 1114
异亮氨酸 Ile＊ 860 脯氨酸 Pro 1338
亮氨酸 Leu＊ 1038 组氨酸 His 837
蛋氨酸Met＊ 137 天门冬氨酸 Asp 1086
色氨酸 Trp＊ 200 胱氨酸 Cys 59
苯丙氨酸 Phe＊ 824 谷氨酸 Glu 1830
酪氨酸 Tyr 741
必需氨基酸合计 5415 氨基酸总合计 16863
注:＊人体必需氨基酸
表 3　各实验组小鼠的免疫指标( x ±s , n=10)
组别 HC50 DTH(24h , mm) α 胸腺/体重(mg/g)
正常对照 250.66±34.84 0.51±0.16 6.21±0.65 3.00±0.40
牛肝菌+CP 134.84±34.71＊■ 0.62±0.19■ 4.90±0.21■＊ 1.68±0.33＊
CP 66.53±28.74＊ 0.29±0.11＊ 3.05±0.54＊ 1.78±0.57＊
注:＊表示与正常对照组比较 P <0.01 ,⊿表示与 CP组比较
P<0.01
2.2　小鼠免疫试验结果(见表 3)
2.2.1　对小鼠胸腺重量的影响
胸腺指数(胸腺/体)是衡量机体免疫功能的指
标之一。CP 组的胸腺指数较正常对照组明显降低
(P<0.01),说明用 CP 免疫小鼠 ,使模型组的胸腺
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明显萎缩 ,免疫功能下降 ,在给 CP 的同时给 9g/(kg
·bw)牛肝菌后 ,胸腺指数与 CP组比较 ,未见明显改
变。
2.2.2　对小鼠血清溶血素的影响
利用 SRBC免疫小鼠后 ,产生抗 SRBC 抗体(溶
血体),与 SRBC 一起孵育 ,在补体参与下可发生溶
血反应 ,通过测定Hb含量反映血清溶血素的含量 。
本实验以血清半数溶血值 HC50表示。小鼠在受 CP
损伤后 ,血清 HC50明显下降(P <0.01)。但在同时
给9g/(kg·bw)的牛肝菌后 , HC50非常显著升高(P
<0.01),但仍低于正常对照组(P<0.01)。说明牛
肝菌能增强免疫损伤小鼠的体液免疫功能 ,但不能
使之恢复至正常水平 。
2.2.3　对小鼠 DTH 反应的影响
CP 模型组的迟发型变态反应足趾厚度差明显
低于正常对照组(P<0.01),而同时给 9g/(kg·bw)
的牛肝菌组非常显著的提高小鼠足趾厚度差值(P
<0.01),且与正常对照组无差别。这提示牛肝菌能
增强免疫损伤小鼠的细胞免疫功能 ,并使之恢复到
正常水平 。
2.2.4　对小鼠吞噬功能碳粒廓清指数的影响
碳粒廓清指数表示在一定范围内 ,小鼠清除进
入机体碳粒的速率 ,它是非特异性免疫功能的一个
指标。CP 模型组的碳粒廓清指数明显低于正常对
照组(P <0.01),同时给 9g/(kg·bw)的牛肝菌组非
常显著的提高小鼠的碳粒廓清速率(P <0.01),但
仍明显低于正常对照组。这提示牛肝菌能明显改善
免疫损伤小鼠的非特异免疫功能 ,但不能使之恢复
到正常。
3　讨　论
野生牛肝菌含有多种矿物元素 ,特别是人体必
需的铜 、铁 、磷 、钙 、锰等元素(见表 1),其中铁 、磷 、
铜 、钙 、锰均高于其它常见食用菌[ 1 ,2] 。这些必需的
矿物元素参与人体代谢 ,对维持机体自身的稳态起
着十分重要的作用。氨基酸是构成人体蛋白质的基
本组分 ,是人体维持正常生理活动的重要营养素 ,尤
其人体 8种必需氨基酸机体自身不能合成 ,需要由
食物供给 。野生牛肝菌含有 17种氨基酸 ,其中人体
8种必需氨基酸的含量 5415 mg/100g ,占总氨基酸
含量 16863 mg/100g 的 32%(见表 2)。
机体免疫系统是指体液免疫 、细胞免疫 、非特异
性免疫。本次研究中所进行的实验指标:血清溶血
素代表体液免疫水平;迟发型变态反应代表细胞免
疫水平;脏器系数 、巨噬细胞系统吞噬功能代表非特
异性免疫水平。
CP是一种已知的免疫损伤药物 ,本次实验的小
鼠在开始实验时腹腔注射 CP 50mg/(kg·bw)1周 ,
在实验结束前 5d ,再腹腔注射 1次 CP100mg/(kg·
bw)后 ,小鼠的体液免疫 、细胞免疫 、和非特异性免
疫功能指标均比正常对照组明显降低(P <0.01),
说明免疫受损模型是成功的 。在机体免疫系统受损
的同时给野生牛肝菌提取液 9 mg/(kg·bw)35d后 ,
血清溶血素 、DTH 、碳粒廓清指数较 CP 组都有明显
提高 ,其中 DTH 恢复至正常水平。这提示牛肝菌
能增强小鼠的免疫功能 ,尤其对小鼠的细胞免疫功
能有较强的保护作用。血清溶血素水平牛肝菌+
CP组明显高于 CP 组 ,但没有恢复至正常水平 ,这
可能是因为体液免疫功能对免疫损伤较敏感 ,它的
恢复需要 B 淋巴细胞及具有分泌抗体能力的恢复
才能体现 ,这就导致小鼠体液免疫系统的免疫损伤
的恢复时间较长。
综上表明 ,贵州野生牛肝菌是一种具有较高营
养价值的野生食用菌 ,对免疫功能受损的小鼠有一
定的保护作用。但其具体的功效成分 、作用强度 、以
及剂量效应关系还待进一步的研究。
参考文献:
[1] 周庆珍 ,苏维词.贵州野生多汁乳菇营养成分分析[ J] .
营养学报 ,2003 ,25(2):130-132.
[2] 阮海星 ,张卫国 ,付家华 ,等.香菇多糖及营养成分分析
[ J] .微量元素与健康研究 ,2005 , 22(3):35-36.
[3] 殷建忠 ,周玲仙.云南野生菌维生素 B1 、B2 含量分析[ J] .
营养学报 ,2003 ,25(2):163-166.
[4] 刘　佳 ,高 　敏 ,向　红 ,等.野生多汁乳菇的抗辐射作
用[ J] .中国公共卫生 ,2006 , 22(4):453-454.
[5] 宋旭红 ,丁 　红 ,张月明 ,等.新疆阿魏蘑菇提取物抗肿
瘤实验研究[ J] .营养学报 ,2002 , 24(2):154-157.
[6] 陈冠敏 ,林升清 ,黄宗绣 ,等.香菇多糖胶囊抗突变作用
的实验研究[ J] .癌变.畸变.突变 , 2000 , 12(2):105 -
108.
[7] 拾景达 ,陈志民 ,李可基 ,等.芦笋香菇汁对高脂血症的
影响[ J] .营养学报 ,1998 , 20(1):63-66.
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