全 文 ：HPLC法测定愈伤灵胶囊中岩白菜素的含量
罗定强 ,杨瑞瑞 ,吕　桌
(陕西省食品药品检验所 ,陕西 西安　710061)
摘要:目的　建立愈伤灵胶囊中岩白菜素的含量测定方法。方法　以岩白菜素为测定指标 , HPLC测定愈伤灵胶囊中岩白菜素
含量的色谱条件:色谱柱为 KromasilC
18
(250 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为甲醇-水(25∶75), 流速为 1 ml· min-1。结果　岩
白菜素对照品线性范围在 0.0848 ～ 2.12 μg,样品平均回收率为 97.10%, RSD为 2.20%。结论　定量方法简便 、准确 、重复性
好 , 可作为控制愈伤灵胶囊质量的标准的方法使用。
关键词:愈伤灵胶囊;高效液相色谱法;岩白菜素
DeterminationofbergenininyushanglingcapsulabyHPLC
LUODing-qiang, YANGRui-rui, LVZhuo
(ShanxiInstituteforFoodandDrugControl, Xian710061)
Abstract:Aim　ToestablishamethodofdeterminationofbergenininYushanglingCapsulabyHPLC.Methods　Withbergeninasthe
marker, HPLCwasusedtodeterminethecontentsofbergenininyushanglingcapsula.ThechromatographiccolumnwasKromasilC18 col-
umn(250 mm×4.6 mm, 5 μm), withamobilephaseofmethanol-water(25 ∶75).Theflowratewas1.0 ml· min-1.Results　The
standardofcurvesofbergeninshowedagoodlinearityfrom0.0848 to2.12 μgandaveragerecoverywas97.10%, RSDwas2.20%.
Conclusion　Themethodissimple, accurateandrepeitibleforthedeterminationofbergenininYushanglingCapsulabyHPLC.Itcanbe
usedasqualitycontrolinmedicinalpreparation.
Keywords:yushanglingcapsula;HPLC;bergenin
　　愈伤灵胶囊为中药部颁第八册收载的品种 , 主要有土鳖
虫 、红花 、自然铜 、三七 、落新妇提取物等组成 ,具有活血散淤 ,
消肿止痛的功效 [ 1] 。其质量标准无含量测定项 , 有文献报道
利用高效液相色谱法测定三七中三七皂苷 R1, 人参皂苷
Rg1,人参皂苷 Rb1的含量 [ 2, 3] 。本实验采用 HPLC法测定处
方中落新妇提取物所含岩白菜素的量 ,结果表明样品中岩白
菜素的含量高 、前处理简便 ,便于产品多指标成分质量控制 ,
现报道如下。
1　仪器与试药
1.1　仪器　岛津 LC-2010CHT型高效液相色谱仪 , LCSolution
工作站。
1.2　试药　岩白菜素对照品购自中国药品生物制品检定所
(批号:111532-200202);愈伤灵胶囊(批号 070927、 070928、
070929)由陕西海天制药有限公司生产。
2　方法与结果　
2.1　色谱条件　KromasilC18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);
流动相:甲醇-水(25∶75);体积流量:1.0 ml· min-1;检测波
长 275nm;柱温:30℃;理论板数以岩白菜素计算应不低于 4
000。样品中岩白菜素分离情况见附图 1 ～ 3。
图 1　岩白菜素对照品　　　　　　　　　图 2　愈伤灵胶囊的 HPLC图谱　　　　　　　　图 3　阴性对照溶液
2.2　阴性对照溶液的制备　按供试品处方工艺制备不含落
新妇的阴性制剂 , 结果显示阴性对照无干扰。
2.3　对照品溶液的制备　精密称取岩白素对照品 10.60 mg
置 50 ml量瓶中 , 加 70%甲醇至刻度 , 制成每 1 ml含 212 μg
的溶液 , 作为储备液;分别精密吸取贮备液 1, 2, 2, 10 ml置
25, 20, 10, 25 ml量瓶中 ,加 70%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 得到
相应的 8.48、21.2、42.4、84.8mg· L-1对照品溶液。
2.4　供试品溶液的制备　取本品 10粒内容物 , 研细 , 取约
0.25 g,精密称定 ,置 50 ml容量瓶中 ,加 70%甲醇至刻度 , 超
声处理 30 min(功率 220 W 50kHz),放冷 , 滤过 ,弃去初滤液 ,
取续滤液 , 即得。
2.5　线性关系考察 　精密吸取对照品溶液 8.48, 21.2,
42.4, 84.8和贮备液 212 mg· L-1各 10 μl, 在上述条件下测
定峰面积 , 以进样量(X)对峰面积(Y)作标准曲线 , 计算回归
方程为 Y=1442476.018X-1412.4888, r=0.999 8,在 0.084 8
～ 2.12 μg范围内线性关系良好。
2.6　精密度试验　精密吸取岩白菜素对照品溶液(42.4 mg
· L-1)10 μl, 重复进样 5次 ,求得 RSD为 0.38%。
2.7　重复性试验　取同一批样品 6份(批号:070928),分别
测定含量 , 6份样品平均含量为 12.875 0 mg· g-1 , RSD为
1.11%。
2.8　稳定性试验　取同一供试品溶液分别在 0, 2, 4, 8, 12, 24
·37·安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2009 Jan;13(1)
◎临床医学◎
骨形态发生蛋白在大肠杆菌中表达的研究
黄军荣
(湖北阳新县人民医院 , 湖北 阳新　435200)
摘要:目的　骨形态发生蛋白(bonemorphogeneticprotein, BMP)是一种具有诱导活性的酸性糖蛋白 , 在组织工程研究和临床应
用上需求量较大 , BMP-2在组织中含量较微 ,利用基因工程方法生产重组 BMP-2显得尤为重要。方法　本研究根据人骨形态
发生蛋白(bonemorphogeneticprotein, BMP)基因序列设计出引物 ,以克隆载体质粒 pBR322-BMP-2为模板 , 得到 BMP-2基因并
重组入原核表达载体 pGEX-4T-1中 , 将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 , 表达产物经
SDS-PAGE鉴定并用 Westernbloting检测。结果　SDS-PAGE显示 ,得到 40KD的目的蛋白 ,表达量可达菌体总蛋白的 15.2%,
Westernbloting检测表明 , 抗 BMP-2单抗可与相对分子量 40 KD大小的电泳条带发生特异性反应 ,从而证明表达产物具有目的
蛋白构型。结论　本研究为进一步研究利用原核表达系统大量生产 BMP-2打下基础。
关键词:骨形态发生蛋白;基因;大肠杆菌
RecombinanthumanBMPexpresedinescherichiacoli
HUANGJun-rong
(YangxinPeoplesHospital, HubeiYangxin435200)
Abstract:Aim　Thebonemopogeneticproteins(BMPs)areafamilyofgrowthfactorsthatregulatethedevelopmentofbone.Alargenum-
berofBMP-2 neededforbothbonetissueengineeringressearch.Thus, theefectivegeneticengineeringwayisnecessaryproducesuffi-
cientBMP-2 protein.Methods　TocloneBMP-2 genefromthepBR322-BMP-2 fortheconstructionofprokaryoticexpressionvector
pGEX-BMP-2.TherecombinantplasmidwastransformedintoDH5αandIPTGwasusedtoinducetheexpressionofBMP-2.Therecom-
binantprotein(BMP-2)wasconfirmedbySDS-PAGEanalysis, westernblotingassay.Result　Theresultindicatedthattherecombinant
proteinshowedexpressionwhichwasover15.2% oftotalproteinaccordingtoSDS-PAGE, andhadconfigurationofnatureBMP-2 with
westernblotingassay.Conclusion　Ourresearchlaidagoodfoundationfornass-producingBMP-2.
Keywords:bonemorphogeneticprotein;gene;colonbacillus
　　骨形态发生蛋白(bonemorphogeneticprotein, BMP)是一
种具有诱导活性的酸性糖蛋白 , 具有多种生物学活性。 BMP
诱导机体内的间充质细胞不可逆地分化成为软骨和骨细胞;
BMP在胚胎发育期 、软骨及骨发生中也有重要的作用;在神
经发育与修复中 , BMP可以促进神经脊细胞的肾上腺素能交
感神经的形成。其中以 BMP-2活性最高 [ 1] , BMP-2在组织中
含量较微 , 每一千克皮质骨仅含有 1 ～ 2 μg[ 2] ,因此利用基因
工程生产重组 BMP-2是必须的。
h测定 , 求得 RSD为 1.96%, 表明稳定性良好。
2.9　加样回收率试验　精密称取重复性项下已知含量的内
容物(批号:070928;平均含量:12.8750 mg· g-1)约 0.1 g, 平
行 6份 , 分别精密加入岩白菜素对照品 70%甲醇溶液(0.212
g· L-1)5 ml,按供试品溶液同法制备。 测定含量 , 平均回收
率为 97.10%, RSD为 2.20%。结果见表 1。
表 1　回收率测定结果
样品取样量 /g样品含量 /mg对照品加入量/mg测得量 /mg回收率 /%
0.1002 1.2901 1.06 2.3313 98.23
0.1006 1.2952 1.06 2.3294 97.57
0.1011 1.3017 1.06 2.3247 96.51
0.1001 1.2888 1.06 2.3395 99.12
0.1022 1.3158 1.06 2.3555 98.08
0.1013 1.3042 1.06 2.2913 93.12
2.10　样品测定　精密吸取供试品溶液 10 μl,注入液相色谱
仪 , 测定 ,结果见表 2。
3　讨论
多花落新妇为虎耳草科多花落新妇(A.myrianthaDiels)
的全草 , 其有效化学成分主要为岩白菜素 [ 4] ,根据处方工艺 ,
表 2　样品测定结果
样品来源 批号 含量 /mg· g-1
陕西海天制药公司 070927 11.9652
070928 12.8750
070929 12.3213
重点考察其极性较大的成分岩白菜素作为测定指标 ,经过方
法学考察 , 样品处理简单 ,节省时间 , 重复性好 ,能用于控制愈
伤灵胶囊质量的标准之一。 70%甲醇作为提取溶剂以及其他
实验参数是经过优化所得。
参考文献:
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剂(第八册)[ S] , 1996:201.
[ 2] 　雷建林 ,李　芳 ,车晓霞.愈伤灵胶囊的质量控制 [ J] .医药导
报 , 2006, 25(10):1071-2.
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[ 4] 　肖培根 主编.新编中药志(第一卷)[ M] .北京:化学工业出版
社 , 2002:594.
(收稿日期:2008-05-06)
·38· 安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2009 Jan;13(1)