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泡沫分离法优化美味牛肝菌多糖分离工艺



全 文 :基金项目:陕西省教育厅科研资助项目(编号:11JK0596)
作者简介:李志洲(1969-),男,陕西理工学院副教授,硕士。
E-mail:lizhizhou136@sina.com
收稿日期:2012-02-20
第28卷第3期
2 0 1 2年5月
OOD&MACHINERY
食 品 与 机 械
Vol.28,No.3
May.2 0 1 2
10.3969/j.issn.1003-5788.2012.03.036
泡沫分离法优化美味牛肝菌多糖分离工艺
Study on optimization separation conditions of polysaccharide
in boletus edulis bul by foam fractionation
李志洲
LI Zhi-zhou
(陕西理工学院化学与环境科学学院,陕西 汉中 723001)
(School of Chemistry and Environmental Science of Shaanxi University of
Technology,Hanzhong,Shaanxi 723001,China)
摘要:采用间歇式泡沫分离法研究美味牛肝菌水提物中的多
糖分离工艺条件。结果表明:常温下,每批投料量为200mL
时,间歇式泡沫分离美味牛肝菌多糖的最佳工艺条件为pH
6、原料液浓度0.640mg/mL、气体流速300mL/min、表面活
性剂用量(0.02mg/mL)25mL、浮选时间55min,回收率可
达83.1%。结果显示间歇式泡沫分离美味牛肝菌多糖是一
种可行、有效的分离方法。
关键词:牛肝菌;多糖;泡沫分离;气浮法;浮选时间;模拟;动
力学
Abstract:The optimal separation conditions of polysaccharide in bole-
tus edulis were studied by intermittent foam fractionation.The re-
sults showed that the optimal separation conditions under normal
temperature and per inventory 200mL were:pH 6,concentration of
Raw material to liquid 0.640mg/mL,air flow 300mL/min,con-
sumption of surfactant(0.02mg/mL)25mL,time of foam separation
55min,and recovery rate 83.1%.The intermittent foam fractiona-
tion was feasible and efficient method to polysaccharide in boletus
edulis.
Keywords:boletus edulis;polysaccharide;foam fractionation;air
floatation;the foam separation time;Simulation;dynamics
美味牛肝菌(boletus eduis)又称大脚菇,属于担子菌纲
伞菌目牛肝菌科牛肝菌属。它含有多种氨基酸、维生素、矿
物质和多糖等,是一种食药兼用经济价值较高的优质真菌之
一。其菌肉厚而细软,味道鲜美,可药用;该菌子实体的水提
取物对小白鼠肉瘤180的抑制率为100%,对艾氏腹水癌的
抑制率为90%。该菌还是“疏筋丸”的主要成分之一[1]。
多糖是生物体内除蛋白质和核酸以外的一类重要生物
分子,具有抗感染、免疫促进、肿瘤防治、病毒性肝炎、类风湿
症、艾滋病等免疫损伤或免疫缺损症和抗氧化等功能,被称
为“生物应答效应物”(biologicalresponsemodifier,BRM)或活
性多糖。目前已有报道的天然多糖化合物约有300多种[2],
如真菌多糖、植物多糖、藻类多糖等[3],其广泛存在于植物、
动物和微生物组织中。目前香菇多糖、云芝多糖等已广泛应
用于临床,使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃,成
为天然药物、生物化学、生命科学的研究热点。传统的食用
菌多糖大多采用水提醇析法,为提高多糖提取率,试验中所
采用的提取剂量一般为固体原料的20~40倍,提取液中多
糖浓度一般较小,而醇析浓度一般为75%~85%[1,4,5],如此
需要大量的乙醇,且操作周期长,试剂耗损率高,为此探究经
济实用的分离工艺也就成为多糖的研究热点之一。
泡沫分离法(foam fractionation)又称气浮法(air-strip-
ping),它是以气泡作分离介质来富集表面活性物质的一种
新型分离技术[6]。近年来,它还被广泛用于许多不溶性物质
和可溶性物质的分离,如溶液中的金属阳离子、阴离子蛋白
质、染料、中草药中有效成分等的分离浓缩[6-12],它的最大优
点在于在低浓度下分离特别有效,因此适用于溶液中低组分
的分离回收,但在多糖分离工艺中未见报道。本试验采用间
歇式泡沫分离法,研究美味牛肝菌提取液中多糖分离的最佳
条件,为该法在多糖分离应用奠定一定的理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料和试剂
牛肝菌:产地陕西汉中;
葡萄糖、苯酚、十二烷基磺酸钠、氢氧化钠:分析纯,西安
化学试剂厂;
浓硫酸:98%,西安三浦化学试剂有限公司。
031
1.2 主要仪器
泡沫分离柱:1.3m×0.12m,本实验室自制;
泡沫收集器:2L,本实验室自制;
空气压缩机:RT-0.12/8,福建泉州日田机械有限公司;
紫外分光光度计:721型,上海精密科学仪器有限公司;
气体玻璃转子流量计:LZB-4DKF,常州市成丰流量仪表
有限公司。
1.3 试验方法
1.3.1 试验原理 泡沫分离试验流程见图1。该装置由泡
沫分离柱,供气系统和泡沫收集器组成。泡沫分离柱为内径
0.12m,高度1.3m的有机玻璃柱,底部装有气体分布器。
原料液从塔顶注入泡沫分离柱内,体积为200mL,利用
空气压缩机的气泵向泡沫分离柱内通入空气,转子流量计调
节气体体积流量,由塔底气体分布器产生气泡;随着气泡的
上升在泡沫分离塔的主体液层上面形成泡沫层,泡沫离开泡
沫塔,进入泡沫收集器被收集,并通过其中的消泡装置形成
消泡液。对泡沫分离柱里剩余液体进行取样,取2mL定容
到50mL容量瓶中,分别取稀释液2mL置于各个试管中,
分别向其中加入1mL 5%的苯酚溶液,然后加入5mL浓硫
酸,置于沸水中加热15min,冷却到室温,然后利用紫外分光
光度计测其吸光度,计算其多糖含量。
鼓泡区
气体分布器
气体转子
流量计
泡沫区
空气压缩机
产品储藏罐
泡沫收集
弯管
图1 泡沫分离试验流程示意图
Figure 1 Foam separation test process schematic drawing
1.3.2 多糖的测定 根据文献[1]采用苯酚-硫酸法进行
葡萄糖标准曲线的绘制及测定提取液中多糖的浓度。
(1)葡萄糖标准曲线的绘制:分别配制浓度为0.005,
0.010,0.030,0.050,0.070mg/mL的葡萄糖溶液,分别吸取
2mL置于带塞试管中,加入l mL 5%的苯酚水溶液,加入
5mL浓硫酸,沸水浴15min,冷却至室温在490nm处测定
吸光度A(蒸馏水作空白对照),以吸光度为纵坐标,葡萄糖
含量为横坐标绘制标准曲线,得到吸光度(A)与葡萄糖含量
(mg/mL)关系曲线,其回归方程为y=9.165 7x+0.034 3,
R2 =0.999 2。
(2)美味牛肝菌粗提液的制备:将美味牛肝菌干燥至衡
重,粉碎,过20目筛,备用;取美味牛肝菌粉末250g,加入
4 000mL蒸馏水,充分搅拌,然后经微波快速反应系统反应
(功率:600W,温度:65℃,时间:15min),把反应后的液体
经离心处理,取上清液,抽滤,滤液即为美味牛肝菌粗提取
液,备用。取2mL提取液,稀释至25mL,吸取2mL置于带
塞试管中,按照1.3.2(1)所示方法测定提取液中多糖浓度,
为0.489mg/mL。
1.3.3 浮选分离效果评价 本试验以回收率和富集比两个
参数为指标来评价分离效果。在单因素、正交试验中以回收
率作为评价指标;最后在最佳分离效果的评价中加入富集比
予以评价。回收率和富集比分别按式(1)、(2)计算:
回收率=
原料液多糖浓度-剩余液体多糖浓度
原料液多糖浓度 ×100%
(1)
富集比=
泡沫液中的多糖浓度
原料液中的多糖浓度×100% (2)
2 结果与分析
本试验主要选取浮选时间、表面活性剂加入量、浮选液
的pH、气体流速、原料液浓度作为影响条件,通过单因素试
验及正交试验获取浮选分离美味牛肝菌多糖的最佳条件。
2.1 单因素试验结果
2.1.1 空气流速对浮选效果的影响 取200mL原料液加
入浮选分离柱,调整pH 值为5,加入表面活性剂15mL,浮
选时间设置为55min,改变气体流速,研究气体流速对浮选
分离效果的影响,结果见图2。



Th
e
re
co
ve
ry
ra
te
/%
气体流速
The air flow/(mL·min-1)

80
75
70
65
60
55
50
0 600400200 800
图2 气体流速对浮选效果的影响
Figure 2 The effect of gas velocity to flotation
由图2可知,气体流速增大,多糖去除率增大,当气体流
速达到400mL/min时,达到最大,此后略有降低。究其原
因,气体流速较小时,产生的泡沫相对较少,而一旦流速大于
400mL/min时,虽然分离效果增大,但泡沫夹带的液滴也增
多,带出液量变大,泡沫收集器经消泡处理后,富集液体积明
显增大,使得后期的醇析工艺所用乙醇量自然增加,因此选
择最佳气体流速为400mL/min。
2.1.2 pH值对浮选效果的影响 取200mL原料液加入浮
选分离柱,调整气体流速为400mL/min,加入表面活性剂15
mL,浮选55min,调整原料液的pH值,测定pH值对浮选分
离效果的影响,结果见图3。
由图3可知,当pH 为6时所得到的回收率较高,随着
pH值继续增大,回收率逐渐降低。究其原因,溶液pH可能
会影响溶液中待浮选物分子的存在形式,从而影响浮选分离
131
提取与活性   2012年第3期



Th
e
re
co
ve
ry
ra
te
/%
pH
80
75
70
65
60
55
50
4 765 10

8 9
图3 pH值对浮选效果的影响
Figure 3 The effect of pH to flotation
的效果,美味牛肝菌多糖在酸性条件下的富集效率好,所以
随着富集液pH值的增大,回收率逐渐降低。因此本试验选
择最佳pH为6。
2.1.3 表面活性剂的用量对浮选效果的影响 取200mL
原料液于浮选分离柱,操作条件:气体流速400mL/min,pH
值为6,浮选时间55min,调整表面活性剂的用量,考察活性
剂用量对浮选分离效果的影响,结果见图4。
浮选分离法就是利用表面活性剂的不同极性,与美味牛
肝菌多糖结合,在气体的作用下,以泡沫的形式得到富集,从
而达到从美味牛肝菌原料液中分离多糖的目的,因此表面活
性剂的用量对浮选效果有着很重要的影响。由图4可知,浮
选效果随着活性剂加入量的增加呈先增加后降低的变化趋
势,活性剂用量在20mL时,浮选效果最佳。究其原因表面
活性剂量太少的时候,泡沫层不明显,收集泡沫比较困难,随
着表面活性剂用量的增加,去除率逐渐升高,浮选效果逐渐
变好;但当活性剂用量超过某个值后,其浮选效果反而下降;
分析认为活性剂用量加大,产生的气泡数量急剧增加,小气
泡之间碰撞合并变成大气泡,表面张力下降,所吸附的物质
丢失,造成分离效果下降。




Th
e
re
co
ve
ry
ra
te
/%
表面活性剂用量
The consumption of surfactant/mL
80
78
76
74
72
70
201510 453025 4035
图4 表面活性剂的用量对浮选效果的影响
Figure 4 The effect of surfactant consumption to flotation
2.1.4 原料液浓度对浮选效果的影响 配制不同浓度的原
料液,取200mL原料液,调整气体流速为400mL/min,pH
值为6,表面活性剂的用量20mL,浮选时间55min,研究不
同原料液浓度对浮选分离效果的影响,结果见图5。



Th
e
re
co
ve
ry
ra
te
/%
原料液浓度
The concentration of raw material liquid/(mg·mL-1)
85
75
70
65
60
0.8

80
0.70.60.50.40.30.2 0.9
图5 原料液浓度对浮选效果的影响
Figure 5 The effect of raw liquid concentration to flotation
由图5可知,总体而言随着料液中多糖质量分数的增
大,去除率增加;但浓度为0.489mg/mL(依据曲线回收率变
化与浓度变化之比获得此数据)似乎为去除率变化的分界
点,浓度小于该值,去除率变化很大;而浓度大于此值,去除
率变化缓慢,究其原因,应该与原料液的界面张力有关,当浓
度小于0.458mg/mL时,溶液界面张力有所变化,但变化不
大,而溶液中多糖含量增加,使得浮选分离的去除率增加;一
旦浓度大于该值,溶液的界面张力发生显著变化,从而导致
浮选分离效率受到制约,增加缓慢,因此试验选择浮选分离
最优原料液浓度为0.489mg/mL。
2.1.5 浮选时间对浮选效果的影响 取200mL原料液(浓
度为0.489mg/mL),调整气体流速为400mL/min,pH值为
6,表面活性剂的用量为20mL,研究不同浮选时间对浮选效
果的影响,结果见图6。



Th
e
re
co
ve
ry
ra
te
/%
浮选时间
The foam separation time/min
85
75
70
65
20
40
80
353025201510 70

60
55
50
45
40
35
25
30
5045 6055 65
图6 浮选时间对浮选效果的影响
Figure 6 The effect of the time to flotation
由图6可知,随着浮选时间的增加,去除率总体呈增加
趋势,当浮选时间大于50min后,去除率变化趋缓,在
55min,去除率达到最大。究其原因,随着浮选时间的增加,
泡沫层厚度、泡沫数量等逐渐增加,在55min左右浮选达到
平衡状态,当浮选时间超过55min后,浮选效果下降,主要
是因为泡沫不能及时被移走,一部分重新返回水相,因此浮
选平衡时间的把握和泡沫的及时移出显得尤为重要。
231
第28卷第3期 李志洲:泡沫分离法优化美味牛肝菌多糖分离工艺  
2.2 正交试验结果与分析
单因素表明浮选法分离美味牛肝菌多糖的最佳工艺条
件为原料液浓度0.489mg/mL,pH值为6,表面活性剂的用
量20mL,空气流速400mL/min,浮选时间55min。通过对
各类影响因素分析可知,在浮选时间为55min时,反应系统
基本达到平衡,因此,确定浮选时间为55min。在其他各因
素最佳值附近分别取3个水平(表1)。依据L9(34)正交试
验表进行设计(表2),做4因素3水平正交试验,得出提取浮
选法分离美味牛肝菌多糖的最佳工艺参数。
表1 正交试验因素水平表
Table 1 Orthogonal test factors the level of table


A空气流速/
(mL·min-1)
B原料液
pH值
C表面活性剂
用量/mL
D原料液多糖浓
度/(mg·mL-1)
1  300  5  15  0.368
2  400  6  20  0.489
3  500  7  25  0.640
表2 正交试验设计及结果
Table 2 The design and results of orthogonal experiment
试验组数 A  B  C  D 回收率/%
1  1  1  1  1  75.5
2  1  2  2  2  81.1
3  1  3  3  3  79.1
4  2  1  2  3  80.7
5  2  2  3  1  78.3
6  2  3  1  2  75.6
7  3  1  3  2  79.7
8  3  2  1  3  80.4
9  3  3  2  1  74.4
k1 78.567  78.633  77.167  76.067
k2 78.200  79.933  78.733  78.800
k3 78.167  76.367  79.033  80.067


0.400  3.566  1.866  4.000
由表2可知,影响美味牛肝菌多糖分离的诸因素的主次
关系依次是原料液多糖浓度、原料液pH 值、表面活性剂用
量和空气流速;其最优的浮选工艺为A1B2C3D3,即空气流速
300mL/min,原料液pH值为6,原料液浓度0.640mg/mL,
表面活性剂的用量25mL,浮选时间55min。在最佳操作条
件下对美味牛肝菌多糖进行浮选分离的验证实验,其多糖的
回收率为83.1%;所收集的泡沫经消泡处理后获得34mL
的消泡液,测定其中多糖的浓度计算回收率值为79.43%,富
集比为6.2;回收率表现的误差主要是浮选柱内还有部分泡
沫未被收集。
3 模拟宏观动力学研究
根据泡沫分离的机理,分离过程主要有2个物理过程,
即表面活性物质吸附过程以及泡沫排水过程。前者决定了
多糖的吸附量,而后者决定了泡沫的持液量。二者与泡沫中
多糖的富集程度密不可分,是多糖泡沫分离模型中必须包含
的2个影响因素。
由于气泡的鼓入产生了新的气-液界面,气泡在浮力的
作用下向上运动,运动过程中在气泡表面与主体溶液间发生
吸附。这一过程在金属铬离子的分离研究中一般呈一级动
力学特征[13]。在美味牛肝菌多糖的浮选分离过程中,虽然
所分离的多糖分子量变化区间较大,可模拟为一级反应动力
学。故可用模拟反应速率方程来描述分离过程的速率,即
υA =-dcAdt =kc

A (3)
在此基础上采用数学模型法进一步深入研究分离效率、
等效反应级数和等效速率常数。
在最佳工艺条件下,即原料液浓度0.640mg/mL,pH
值为6,表面活性剂的用量25mL,空气流速300mL/min,根
据不同浮选时间,采取间歇法进行浮选分离,在不同时刻进
行取样,测定美味牛肝菌多糖的浓度,用ln(C0/C)对浮选时
间t(min)作图,研究泡沫分离法对多糖分离的模拟动力学过
程,结果见图7。

反应时间
The reaction time/min
ln(
C 0
/C

20
15
10
5
0
500 40302010 60
y=0.224 5x+4.899 2
R2=0.954 2
图7 模拟反应动力学曲线
Figure 7 The curve of simmulation reaction kinetics
由图7可知,美味牛肝菌多糖的泡沫分离的过程可等效
为一级化学反应,其等效速率常数k=0.22min-1,等效速
率方程为υA =0.22cA。
4 结论
(1)本试验得出的最佳分离工艺条件为原料液浓度
0.640mg/mL,pH值为6,表面活性剂的用量25mL,空气流
速300mL/min,浮选时间55min。在最佳操作条件下对美
味牛肝菌多糖分离,脱除率为83.1%。试验结果表明泡沫分
离法以其快速分离、设备简单、操作连续、不需高温高压的特
点,对分离低浓度组分有独特的优势,因而是分离美味牛肝
菌多糖的一种有效方法。
(2)美味牛肝菌多糖泡沫分离去可等效为一反应过程。
在最佳操作条件下,美味牛肝菌多糖泡沫分离可模拟为一级
331
提取与活性   2012年第3期
化学反应,等效速率常数k为0.22。试验结论对泡沫分离法
应用于美味牛肝菌多糖的分离奠定一定的理论基础。
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27 411.
(上接第129页)14.47mg/mL,料液pH 值6;最佳洗脱条
件:流速为2.5BV/h,先用2BV水洗脱去杂,再用3BV
70%乙醇水溶液洗脱并收集、浓缩、干燥,即得纯化的苦丁茶
总皂苷提取物,总皂苷含量为68.9%。验证实验结果表明,
所选工艺稳定、操作简便、重现性好及消耗少等优点,必将对
今后的研究和生产应用提供科学依据。
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第28卷第3期 李志洲:泡沫分离法优化美味牛肝菌多糖分离工艺