免费文献传递   相关文献

旋覆花苦豆子合剂防治肝纤维化的实验研究



全 文 :新疆中医药 2009年 第 27卷 第 1期(总第 119期)
或为胸胁与胃部胀满喘息。如《灵枢·卫气失常篇》:
“卫气之留于腹中,搐积不行,苑蕴不得常所,使人
支胁胃中满,喘呼逆息”;或邪气留结,卫气停留不
运致津液不能输布则可形成肠瘤,《灵枢·刺节真邪
篇》:“有所结,气归之,卫气留之,不得反,津液久
留,合而为肠溜……”;或为“目不暝”,如《灵枢·大
惑论篇》:“……卫气不得入于阴,常留于阳。留于阳
则阳气满,阳气满则阳跷盛,不得入于阴则阴气虚,
故目不暝矣”。或为胀病,如《灵枢·胀论篇》:“营气
循脉,卫气逆为脉胀,卫气并脉循分为肤胀……厥
气在下,营卫留止,寒气逆上,真邪相攻,两气相搏,
乃合为胀也”;或为发热少气、痈脓和骨痹,《素问·
气穴论篇》:“荣卫稽留,卫散荣溢,气竭血著,外为
发热,内为少气……邪溢气壅,脉热肉败,营卫不
行,必将为脓,内销骨髓,外破大腘,留于节凑,必将
为败。积寒留舍,营卫不居,卷肉缩筋,肋肘不得伸,
内为骨痹,外为不仁……”。
综上所述可知,营卫功能失调可产生多种病
证,如肌肤麻木不仁、偏枯、痈肿、皮肤溃疡、失眠、
发热汗出、胀病、痈脓、骨痹、发热少气以及皮肤病
等。其中,因于营卫虚损而致的主要为营气虚肌肤
不仁,卫气虚肌肤不用,营卫俱虚或为肌肤不仁不
用,或为昼不精夜不瞑,或为偏枯,或为瘾疹;营气
虚卫气强,为发热、汗出;营卫逆乱,运行障碍或为
痈肿,或为皮肤疡溃,或为肠瘤,或为胀病,或为
骨痹。
(收稿日期:2008-12-30)
旋覆花苦豆子合剂防治肝纤维化的实验研究
李 红 1,导师:王存芬 2
(1.新疆医科大学 29期研究生,新疆 乌鲁木齐 830054;2.新疆医科大学中医学院,新疆 乌鲁木齐 830054)
旋覆花汤出自张仲景《金匮要略》,由旋覆花、
新绛(茜草)、葱茎组成。具有行气活血,通阳散结的
作用,临床运用旋覆花汤加减[1]治疗血瘀型肝病有
一定的疗效,药理研究其能有效的阻断大鼠肝纤维
化和肝窦毛细血管化的形成。苦豆子是新疆地产药
材,资源丰富。中药苦参素[2]是从苦豆子中提取的生
物碱,近年研究发现,苦参素具有抗纤维化的作用。
其机制[3]为抑制 HSC的增生及 III型胶原 mRNA的
表达,抑制炎症细胞因子的分泌,阻断小鼠肝细胞
凋亡。本课题从经方旋覆花汤及苦豆子基本药理及
应用研究出发,结合导师王存芬教授[4]20多年临床
经验总结张仲景先生《金匮要略》治疗肝病从气、
血、痰、湿、毒论治的体会,以 CCL4皮下注射小鼠造
成肝纤维化模型,研究经方旋覆花汤加维吾尔药苦
豆子——旋覆花苦豆子合剂对小鼠肝纤维化的防
治作用。
1 材料
1.1 动物
选用健康成年昆明小鼠雌雄各半,体重(20±
2)g,动物及饲料均由新疆医科大学实验动物中
心提供。
1.2 主要试剂与实验仪器
主要试剂:透明质酸(HA)免疫试剂盒,由北京
北方生物技术研究所提供;ALT试剂盒,由上海科
华东菱诊断用品有限公司提供;四氯化碳(分析
纯),购于天津市福晨化学试剂厂;花生油:市售。实
验仪器:全自动生化仪:雅培 C8000;高速冷冻离心
机 Auegra64R美国贝克曼公司生产。
1.3 药物
药物剂量:旋覆花、茜草、青葱管、苦豆子各
10g,根据动物药理实验学方法,按人和动物间等效
计量换算方法折算小鼠服用量。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
摘 要 目的:研究经方旋覆花汤加维吾尔药苦豆子——旋覆花苦豆子合剂对小鼠肝纤维化的防治作用。方法:
40%CCL4花生油皮下注射 5周致小鼠肝纤维化,旋覆花汤、苦豆子煎剂和旋覆花苦豆子合剂用药 6周后观察其对
小鼠肝组织病理变化、ALT和透明质酸的影响。结果:三者均能减轻 CCL4引起的肝坏死病变,降低 ALT和透明质
酸。结论:三者都具有防治肝纤维化的作用,旋覆花汤与苦豆子具有协同作用,能增强防治肝纤维化的作用。
关键词 合剂;旋覆花汤;苦豆子;煎剂;肝纤维化
21
新疆中医药 2009年 第 27卷 第 1期(总第 119期)
2 方法
2.1 造模及给药方法
小鼠随机分成 5组,每组 10只,雌雄各半。第
一组空白对照组:皮下注射 NS10mL·kg-1,首剂量加
倍,5 天 1 次,连续 5 周,同时给 NS0.4mL/只灌胃,
连续 6周;第二组四氯化碳组[5](模型组):皮下注射
40%四氯化碳花生油,10mL·kg-1,首剂量加倍,5天
1次,连续 5周,同时给 NS0.4mL/只灌胃,连续 6
周;第三组旋覆花汤煎剂组:按模型组造模后,给旋
覆花汤煎剂 0.0504g/10g/只,用蒸馏水稀释至
0.4mL/R 灌胃,1天 1 次,连续 6 周;第四组苦豆子
煎剂组:按模型组造模后,给苦豆子煎剂 0.018g/
10g/只,用蒸馏水稀释至 0.4mL/只灌胃,1天 1次,
连续 6周;第五组旋覆花苦豆子合剂组:按模型组
造模后,给旋覆花苦豆子合剂煎剂 0.072g/10g/只,
用蒸馏水稀释至 0.4mL/只灌胃,1 天 1 次,连续
6周。
2.2 实验室指标及检测方法
第五周全部停用四氯化碳,继续给药治疗 1
周,于末次给药治疗后第 2天摘眼球取血,分离血
清检测血中谷丙转氨酶、透明质酸;剖腹取肝脏做
肝脏病理切片,做 HE染色。胶原纤维增生程度半定
量标准:0期:正常肝脏,无明显胶原纤维增生;1
期:胶原纤维增生,中央静脉和门脉区有少量星状
胶原纤维束放散,但无间隔形式;2期:胶原纤维增
生,中央静脉和门脉区结缔组织变厚,由此向四周
伸出纤维素,形成不完全间隔;3期:胶原纤维大量
增生,有个别菲薄的完全间隔形成,或较厚的不完
全间隔即将形成假小叶;4期:形成的完全间隔较
厚,假小叶大量形成。根据上述标准检测肝组织病
理损害程度。谷丙转氨酶由自治区人民医院检测,
透明质酸由新疆医科大学第一附属医院检测,HE
染色由新疆医科大学病理切片室完成。
2.3 实验数据统计分析方法
参照卫生统计学,采用 PEMS3.1 软件,多个样
本均数的比较和多个样本比较及两两比较的秩和
检验。
3 结果
3.1 对四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠血清中 ALT
的影响
见表 1。与空白对照组比较,CCL4组的 ALT增
高,P<0.01;与 CCL4组比较,旋覆花汤组和旋覆花
苦豆子合剂组 ALT 降低,P<0.01,苦豆子煎剂组
P<0.05。
表 1 对血清中 ALT的影响
注:与空白对照组比较,*P<0.01
3.2 对透明质酸的影响
见表 2。与空白对照组比较,CCL4组的 HA增
高,P<0.01;与 CCL4组比较,旋覆花苦豆子合剂组
HA降低,P<0.05。
表 2 对透明质酸的影响
注:与空白对照组比较,*P<0.01
3.3 对四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠病理切片的
影响
见表 3。HE染色镜下可见:空白对照组肝组织
结构无改变,模型组可见肝细胞变性、坏死,中央静
脉偏位或缺如;肝小叶排列紊乱,纤维组织增生,与
空白组比较 P<0.01;与 CCL4组比较,旋覆花汤组、
旋覆花苦豆子合剂组和苦豆子煎剂组病理切片好
转,P<0.01。
表 3 对四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠病理切片的影响
注:与空白对照组比较,CP<0.01
4 讨论
肝纤维化是指由多种慢性疾病引起的肝脏持
组别 例数
空白对照组 10
模型组 C 10
旋覆花汤组 10
苦豆子煎剂组 10
旋覆花苦豆子合剂组 10
切片数
30
30
30
30
30
Ⅲ Ⅳ
0 0
27 0
3 0
6 0
3 0
病理分级
0
30
0
0
0
0
Ⅰ Ⅱ
0 0
0 3
6 21
0 24
9 18
组别 例数 HA/ng·mL-1
空白对照组 10 486.18±98.60
旋覆花苦豆子合剂组 10 802.19±144.98
模型组 10 1072.95±57.17*
旋覆花汤组 10 995.65±136.25
苦豆子煎剂组 10 889.38±171.15
组别 例数 ALT/U·L-1
空白对照组 10 49.90±10.48
苦豆子煎剂组 10 67.70±29.23
旋覆花苦豆子合剂组 10 58.10±16.75
模型组 10 113.30±15.33*
旋覆花汤组 10 59.10±24.50
22
新疆中医药 2009年 第 27卷 第 1期(总第 119期)
续的创伤修复反应而导致的细胞外基质(ECM)过
度沉积和肝脏功能的受损。肝纤维化根据症状属中
医“积聚”、“胁痛”、“肥气”、“肝着”利“肝癖”等范
畴。现认为肝纤维化尚有逆转至正常肝的可能,而
肝硬化则否,认为阻止或延缓肝纤维化发生和发展
就能治愈大部分慢性肝病患者。
湿热中阻 [6]及瘀血阻络是肝纤维化的关键,前
者是肝纤维化的启动因子,后者是肝纤维化的病理
基础。瘀血在肝纤维化发病过程中起决定性作用,
并贯串在其发生发展的整个过程,从痰瘀论治是紧
扣病机关键,从根本上延缓或逆转肝纤维化的治
疗。旋覆花汤具有祛瘀通络的作用,苦豆子具有清
热燥湿的作用。药理研究旋覆花[7-8]的有效成份二咖
啡酰奎宁酸(IBE5)能促进受损肝细胞的 DNA合
成,加速细胞的分裂增生,减轻肝细胞的变性坏死,
抑制炎性反应,具有明显的抗肝细胞损伤。近年研
究发现[9],苦豆子有效成份苦参碱和氧化苦参碱具
有抗乙型肝炎病毒和抗肝纤维化的双重作用,临床
采用苦参碱或氧化苦参碱注射液治疗后疗效满意。
苦参碱和氧化苦参碱不仅可以抑制 HBA病毒的复
制,还对感染后免疫系统具有双向调节作用,还能
抑制胶原活动度和防治肝纤维化,且在治疗慢性肝
炎和肝纤维化等方面得到了广泛应用。本实验证实
了旋覆花汤和苦豆子具有协同作用,抗病毒作用与
抗肝细胞损伤作用的结合,将具有一定的开发前
景。根据中医药多途径、多层次、多靶点的疗效特
点,以中医的整体观念和辨证论治为基础深入开展
中医药复方的研究,加强中医药防治肝纤维化的进
一步发展。
参考文献
[1] 陆雄,顾宏图,卢红,等.旋覆花汤对肝纤维化、肝窦毛细血管化
逆转作用的实验研究[J]. 中国中医药科技,1999,6(6):
366-367.
[2] 杨齐英.苦参素抗纤维化的临床观察[J].抗感学,2005,2(3):22.
[3] 胡庆伟,刘耕陶 .抗肝纤维化药物研究的进展[J].药学学报,
2006,41(1):7-11.
[4] 王存芬.浅论《金匮要略》治疗肝病的特点 .上海中医药杂志,
2003,37(8):21-22.
[5] 冯有辉,何康,邹丽宜,等.人参须对四氯化碳致小鼠肝纤维化的
保护作用.中国临床药理学与治疗学,2004,9(9):1019-1022.
[6] 刘绍能,吕文良.慢性乙型肝炎肝纤维化辨证分型的研究[J].中
医药信息,2002,19(5):15-18.
[7] 孙燕荣,董俊兴,吕秋军,等.二咖啡酰奎宁酸对大鼠肝原代细胞
保护作用的研究[J].解放军药学报,2004,20(2):81-84.
[8] 孙燕荣,董俊兴,吴曙光.二咖啡酰奎宁酸对成纤维细胞增殖与
功能的影响[J].生命科学研究,2001,5(4):355-357.
[9] 蒋合众. 苦参碱及氧化苦参碱药理作用和制备方法研究进展
[J].实用中西医结合临床,2007,7(1):89-90.
(收稿日期:2008- 09- 09)
芳香新塔花挥发油的化学成份分析
石 峰 1,杨伟俊 2*,顾政一 2,何承辉 2,刘君琳 2,张 洁 1
(1.石河子大学药学院,新疆 石河子 832000;2.新疆药物研究所,新疆 乌鲁木齐 830000)
芳香新塔花(Zizphora clinopodioides Lam.),又
名唇香草、小叶薄荷,为唇形科新塔花属植物。我国
分布于新疆,国外前苏联、蒙古亦有分布,生于砾石
坡地及半荒漠草滩上。芳香新塔花全草入药,具有
疏散风热、清利头目、宁心安神、利水清热、壮骨强
身、清胃消食等作用。主治感冒发热,目赤肿痛,头
痛,咽痛,心悸等。芳香新塔花主要含黄酮类成份:
木犀草素、蒙花苷、7-甲基苏打基亭、香叶木苷等。
吉尔吉斯斯坦医学科学院首次报告将其用于治疗
心血管疾病。新疆医科大学胡晓灵等经多年的临床
研究表明,芳香新塔花在临床上具有很好的抗心绞
痛的功能。另有报道,芳香新塔花水提取物具有抑
制 Na+,K+-ATP酶活性的作用[1-3]。本实验采用水蒸
气蒸馏法提取芳香新塔花全草中的挥发油,并用
GC-MS联用技术,结合计算机质谱图库检索,鉴定
出 30种化合物,为该新疆特种植物药资源的综合
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
基金项目:新疆维吾尔自治区科技基础条件平台建设项目(编号:PT0708)
作者简介:石峰(1984—),男,石河子大学药学院在读硕士研究生。Tel:13669993221,E- mail:xihnshi@163.com
*通讯作者:杨伟俊 Te1:0991- 2320292 Fax:0991- 2812311 E- mail:wilfred3106@sohu.com
23