全 文 ：冬虫夏草 、亚香棒虫草中多糖的含量测定
白云娥1 ,王毅1 ,刘许媛2 ,漆小梅1 (1.山西医科大学药学系 , 山西 太原 030001;2.山西医科大学药学系 99 届毕业生)
[ 摘要] 目的:测定青岛产冬虫夏草与山西产亚香棒虫草中多糖的含量。方法:硫酸-蒽酮比色法于波长(624±1)nm 处测定
吸收度。结果:冬虫夏草多糖含量为3.5%(n=5), 平均加样回收率为99.2%, RSD =2.3%;亚香棒虫草多糖含量为0.7%(n
=5),平均加样回收率为101.3%, RSD =1.7%。结论:硫酸-蒽酮法测定虫草中多糖 , 方法操作简便 , 准确 ,稳定性好;亚香棒
虫草中多糖含量低于冬虫夏草中多糖含量 ,从此方面讲亚香棒虫草不能代替冬虫夏草。
[ 关键词] 冬虫夏草;亚香棒虫草;多糖;硫酸-蒽酮比色法
[中图分类号] R927.2 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1001-5213(2001)01-0019(02)
Determination of polysaccharide in Cordyceps and Cordyceps hawkesii Gary
BAI Yun-E , WANG Yi , LIU Xu-Yuan , et al(Depar tment of Pharmacy , Shanxi Medical University , Shanxi Taiyuan 030001)
[ ABSTRACT] OBJECTIVE:To determine the contents of polysaccharide in Cordyceps and Cordyceps hawkesii Gary.METHODS:
The contents w ere determined by sulfuric acid-anthrone colo rimetric method at(624±1)nm.RESULTS:The contents of polysaccha-
ride w ere 3.5% and 0.7% in Cordyceps and Cordyceps hawkesii Gary;the average recoveries and RSD w ere 99.2%, 2.3% and
101.3%, 1.7%.CONCLUSIONS:The method was simple , steady , accurate , and reproducible.The content o f polysaccharide in
Cordyceps w as higher than in Cordyceps hawkesii Gary.The Cordyceps hawkesii Gary cann t replace the Cordyceps from this as-
pect.
[ KEY WORDS] Cordyceps;Cordyceps hawkesii Gary;polysaccharide;sulfuric acid-anthrone colorimetric method
冬虫夏草(Cordyceps sinensis (Burk).Sace)又
名虫草 ,是滋补强壮的名贵中药 ,近年来大量文献报
道 ,虫草多糖能提高机体免疫功能 , 具有抑瘤作
用[ 1] 。但关于虫草中的多糖的含量尚未见报道 。
为此我们对虫草中的多糖进行了测定 。同时 ,由于
冬虫夏草货源紧缺 ,民间常用山西产亚香棒虫草
(Cordyceps hawkesii Gary)取代使用 ,于是我们从多
糖含量方面对二者进行了比较 ,以便为冬虫夏草的
质量评价及新药源的开发提供科学依据 。
1 仪器与药品
UV-260(日本岛津分光光度计),D-无水葡萄
糖(中国药品生物制品检定所),冬虫夏草 、亚香棒虫
草(本教研室提供 ,刘怀德教授鉴定),其他试剂均为
分析纯。
2 多糖的提取 ,精制和检查
2.1 提取和精制 称取冬虫夏草及亚香棒虫草粉
末各5 g ,分别置索氏提取器中 ,加乙醚 100 ml于圆
底烧瓶中 ,回流提取至无色。药渣挥干乙醚 ,用 8倍
量沸水回流提取两次 ,每次 30 min ,趁热过滤 。合
并滤液 ,浓缩至 15 ml , 加乙醇至含醇量 80%(两
次),冰箱过夜 ,滤过 ,并用0.2%活性炭脱色 。沉淀
分别用无水乙醇 、丙醇依次洗涤 3次 ,每次 5 ml ,置
60 ℃烘干 ,得灰白色粗多糖 。粗多糖得率为虫草
8.3%(n =5),亚香棒虫草6.9%(n=5)。
2.2 多糖的定性检查 用 Fehling 反应鉴别 ,结果
只有加酸水解后的试管中有砖红色沉淀生成。同
时 ,采用纸层析法将样品 、葡萄糖 、鼠李糖 、乳糖分别
点于同一层析纸上 ,以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5),二
次展开 ,草酸苯胺试液喷雾 , 105 ℃烘 5 min ,显色。
结果样品中无单糖及双糖的对应斑点 。
3 试液的制备
3.1 对照品溶液 精密称取经105 ℃干燥至恒重
的无水葡萄糖5.0 mg ,于 25 ml容量瓶中加蒸馏水
溶解并稀释至刻度 ,摇匀即得。
3.2 供试液1 精密称取冬虫夏草粗多糖 15 mg 用
蒸馏水溶解 ,定容于 50 ml容量瓶中 ,摇匀 ,即得 。
3.3 供试液2 精密称取亚香棒虫草粗多糖20.0
mg ,用蒸馏水溶解 ,定容于 50 ml容量瓶中 ,摇匀 ,
即得。
3.4 蒽酮试剂 称取蒽酮0.5 g 溶于 25 ml乙酸乙
酯中 ,振摇溶解 ,置棕色瓶中密塞备用 。
3.5 草酸苯胺试液 称取草酸3.2 g ,溶于 500 ml
水中再加入0.9 ml苯胺摇匀 ,即得。
4 含量测定方法
4.1 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.5 ,
1.0 ,1.5 ,2.0 ,2.5 ,3.0 ml ,分别置 10 ml容量瓶中 ,
用蒸馏水定容 ,摇匀。再分别从中精密吸取1.0 ml
置干燥具塞试管中 ,各加蒽酮试剂0.5 ml和浓硫酸
·19·中国医院药学杂志 2001年第 21卷第 1期 Chin Hosp Pharm J , 2001 Jan , Vol 21 , No.1
3.0 ml ,立刻摇匀 ,冷却至室温 ,同时以1.0 ml蒸馏
水加蒽酮试剂0.5 ml 和浓硫酸3.0 ml作空白 , 在
(624±1)nm 波长处测定吸收度。以吸收度 A 为横
坐标 ,葡萄糖浓度为纵坐标 ,进行回归 ,得回归方程:
C=0.0564 A +0.0019 , r=0.9988。
4.2 加样回收率试验 精密吸取供试液1 , 2各 1
ml ,用蒸馏水分别定容于 10 ml容量瓶中 ,摇匀。再
从中分别精密吸取1.0 ml ,置容量瓶中 ,分别加入对
照品溶液2.0 ml ,用蒸馏水定容于 10 ml容量瓶中 ,
从中分别吸取1.0 m l ,依法加蒽酮试剂0.5 m l ,浓硫
酸3.0 ml进行测定 ,结果见表 1 。
表 1 加样回收率结果(n=5)
样 品 投入量μg
测得量
μg
回收率
%
x
%
RSD
%
1 41.260 40.478 98.10
1 41.260 40.026 97.01
1 41.260 40.308 97.69 99.2% 2.3%
1 41.260 41.662 100.97
1 41.260 42.170 102.20
2 40.40 41.02 101.53
2 40.40 40.21 99.53
2 40.40 40.42 100.05 101.3% 1.7%
2 40.40 40.04 101.59
2 40.40 40.02 104.01
4.3 精密度试验 分别取同一供试液5份 ,分别按
含量测定项(4.5.1)、(4.5.2)下操作 ,结果 RSD 分
别为冬虫夏草2.6%,亚香棒虫草2.1%。
4.4 稳定性试验 分别精密吸取供试液各1 m l ,按
含量测定项下操作 ,在不同时间内测定其吸收度。结
果样品1 RSD =1.7%,样品2 RSD =1.1%,见表2。
表2 稳定性试验结果
时间/min 样 1A 样 2A 时间/min 样 1A 样 2A
0 0.623 0.673 75 0.642 0.688
15 0.626 0.678 90 0.646 0.670
30 0.630 0.680 105 0.650 0.668
45 0.634 0.684 120 0.655 0.669
60 0.639 0.671
4.5 样品的含量测定
4.5.1 精密吸取供试液1 3.0 ml ,用蒸馏水定容于
10 ml容量瓶中 ,摇匀。再精密吸取1.0 m l置干燥
具塞试管中 ,各加蒽酮试剂0.5 ml和浓硫酸3.0 ml ,
立刻摇匀 ,冷却至室温 ,于(624±1)nm 处测得吸收
度。结果见表 3。粗多糖中多糖含量按下式计算:
供试液 1粗多糖中多糖含量=
(0.0564 A+0.0019)×500
3 W ×100%
A:吸收度 , W :粗多糖 mg 量
表 3 样品多糖含量测定结果(n =5)
供试液 A A RSD%
粗多糖中
多糖含量/ %
生药中
多糖含量/ %
0.623
0.637
1 0.646 0.636 2.5 42.0 3.5
0.617
0.656
0.681
0.685
2 0.673 0.678 0.89 10.0 0.7
0.671
0.682
4.5.2 精密吸取供试液2 1.0 ml置干燥具塞试管
中 ,各加蒽酮试剂0.5 ml ,浓硫酸3.0 ml ,立刻摇匀 ,
冷却至室温 ,于(624±1)nm 处测吸收度 。结果见
表 3。粗多糖中多糖含量按下式计算:
供试液 2粗多糖中多糖含量=
(0.0564 A +0.0019)×50
W
×100%
A:吸收度 , W :粗多糖 mg 量
5 讨论
硫酸-蒽酮比色法测定多糖含量 ,其原理[ 2]是:
多糖在浓硫酸作用下 ,水解成单糖分子 ,并迅速脱水
生成糖醛 ,然后糖醛与蒽酮缩合成糖醛衍生物 ,呈蓝
绿色 ,颜色稳定 ,在(624±1)nm 处有特征吸收 ,可
测定多糖含量 ,结果准确。
温度 、湿度 ,硫酸浓度是影响实验结果的重要因
素 。以室温 20 ℃,湿度低于 42%,98%浓硫酸及供
试液与浓硫酸比为 1∶3 ,效果好 。
0.2%的蒽酮试液不必现配 ,但冰箱贮存时 ,有
少许晶体析出 ,必须等室温或微热溶解后再使用 。
实验表明 ,硫酸-蒽酮法测定虫草及亚香棒虫草
中多糖含量切实可行。但亚香棒虫草多糖含量低于
虫草 ,二者是否能替代有待于进一步的研究。
致谢:本实验曾得到山西省分析测试中心秦新富大
力协助 。
参考文献:
[ 1] 章灵华 ,肖培根.药用真菌中生物活性多糖的研究进展[ J] .中
草药 , 1992 ,23(1):98
[ 2] 姚新生主编.天然药物化学[ M ] .第 2版.北京:人民卫生出版
社 , 1995.84
[ 收稿日期] 1999-10-21
信 息
根据《1999年度中国科技期刊引证报告》中国医院药学杂志的影响因子为0.538 ,比 1998年度增长
0.178;影响因子在 1356种科技论文统计源期刊中排序为第 85名 ,比 1998年度前进了 27个顺序号 ,在药学
期刊中排名顺序第三 。
·20· 中国医院药学杂志 2001年第 21卷第 1期 C hin Hosp Pharm J , 2001 Jan , Vol 21 ,No.1