全 文 ：第 27卷第 2期
2006年 4月　　　　　　
暨南大学学报 (医学版)　　
JournalofJinanUniversity(MedicineEdition)　　　　　
Vol.27No.2
　Apr.2006
[收稿日期 ] 　2005-03-31
[作者简介 ] 　蒲含林(1964-),男 ,副研究员 ,生理学博士 ,研究方向:药物活性筛选
岩白菜素清除小鼠脑组织自由基及抗脂质过氧化作用
蒲含林
(暨南大学生物工程研究所 , 广东 广州 510632)
[摘　要 ] 　目的:研究岩白菜素对小鼠脑组织缺血再灌注的保护作用。方法:通过测定小鼠正常脑
组织和缺血再灌注脑组织分别与岩白菜素作用后生成脂质过氧化产物及通过比色法测定岩白菜素
对黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子自由基的清除作用 , 评价岩白菜素对脑的保护作
用。结果:岩白菜素能有效地抑制缺血后脑组织发生的脂质过氧化反应 , 对黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶
体系产生的超氧阴离子自由基也有明显的清除作用。结论:岩白菜素对小鼠脑缺血再灌注损伤有一
定的保护作用。
[关键词 ] 　岩白菜素;　脑;　自由基;　脂质过氧化
[中图分类号 ] 　R972　[文献标识码 ] 　B　　[文章编号 ] 　1000-9965(2006)02-0239-03
EffectsofBergeninonoxygenfreeradicalscavenging
andanti-lipidperoxidation
PUHan-lin
(BioengineeringResearchInstitute, JinanUniversity, Guangzhou510632, China)
[ Abstract] 　 Aim:TostudytheprotectiveefectsofBergeninoncerebralischemicreper-
fusioninmice.Methods:Bergeninwasadministratedbeforeandaftertheoperationof
cerebralischemiaofmice, superoxideanionradicalsproducedbyxanthine/xanthineoxidase
systemweredeterminedbycolorimetricreaction.Results:Bergeninwasfoundtosignifi-
cantlyreducethelipid-peroxidationinthebraintissueofmice, Bergeninwasalsoshowed
significantscavengingefectonsuperoxideanion(O·2 )producedbychemicalreaction.
Conclusion:Bergeninwasapotentialprotectivereagentforcerebralischemiaofmice.
[ Keywords] 　Bergenin;　brain;　freeradicals;　lipidperoxidation
　　白饭树是大戟科白饭树属植物 ,为落叶灌木 ,主要分布在我国的中部和南部 , 文献记载白饭树有清热解
毒 、消肿止痛等功效 ,广东民间多以白饭树果和叶入药治疗肝炎 ,其化学成分和药理研究的报道不多。我们从
该植物中分离出了多个化合物 ,其中的一个内酯类化合物有较强的药理活性 ,经结构鉴定 , 发现它与紫金牛中
的镇咳有效成分岩白菜素的结构相同。我们先前的研究发现岩白菜素有较强的心血管药理活性 [ 1] , 本研究
报道其对小鼠脑组织缺血再灌注的保护作用。
1　材料和方法
1.1　材料
动物:昆明种小白鼠体质量(23 ±2.1)g, 雌雄各半 , 购自南方医科大学 , 合格证号码为粤检证字第
2003A037。
药品及试剂:岩白菜素为本实验室提取 , 硫代巴比妥酸(TBA)为中国医药(集团)上海化学试剂公
司产品 , 黄嘌呤氧化酶为 Sigma公司产品 , 维生素 E为罗氏公司产品 , 其他所有化学试剂都是国产分析
纯 。
1.2　方法
⑴岩白菜素的分离纯化及鉴定:取阴凉处凉干的白饭树茎和叶 , 剪碎后用体积分数 95%乙醇室温浸提 ,
共提取 3次 , 每次48h。合并浸提液 , 减压浓缩得浸膏 ,然后分别用石油醚 、氯仿提取 3次 ,剩余物经甲醇 -水
重结晶得到一无色结晶 ,将其进行性质鉴定和波谱分析。
⑵实验分组及用药剂量:体外试验分生理盐水对照组 、维生素 E阳性对照组和岩白菜素的高低 2个剂量
组 , 药物用量为每管 0.1mL;动物试验按体质量随机分组 , 每组雌雄各半 , 分生理盐水正常对照组 、维生素 E
(5 mg· kg-1)阳性对照组和岩白菜素的高低 2个剂量组(5、10 mg· kg-1)。
⑶脑组织匀浆自发性脂质过氧化作用:小鼠脱颈椎处死 , 于冰浴条件下 ,用预冷到 4℃的生理盐水制备脑
匀浆 , 将不同浓度的岩白菜素与脑匀浆共同孵育 90 min,用 TBA比色法测丙二醛(MDA)的含量 , 反应上清液
在 530 nm处的吸光度(A值)即可反映组织中脂质过氧化程度 [ 2] 。
⑷缺血再灌小鼠脑组织匀浆脂质过氧化的作用:灌胃给予小鼠 5或 10 mg· kg-1岩白菜素 , 于给药后
30 min结扎双侧颈总动脉 , 1 h后 ,解开结扎线 , 再灌相同剂量的岩白菜素 5 min后 , 脱颈椎处死 , 于冰浴条件
下 , 用预冷到 4℃的生理盐水制备脑匀浆 ,同上述方法测定脑匀浆中 MDA的含量。
⑸岩白菜素对超氧阴离子自由基的清除作用:采用黄嘌呤 、黄嘌呤氧化酶系统 , 分别加入 9.0、
45 μmoL/L的岩白菜素 , 反应体系含有:黄嘌呤 375 μmol· L-1 、盐酸羟氨 500 μmol· L-1、磷酸钠缓冲液
100mmol· L-1 (pH7.4), 各浓度的 0.1mL岩白菜素 , 对照组加入 0.1 mL的磷酸缓冲液代替 , 反应体系的
总体积是 2 mL。每只反应管于 37℃保温 5 min, 每只试管中加入 0.012 IU的黄嘌呤氧化酶 , 反应开始 , 37℃
水浴中保温 30 min, 用冰水浴中止反应 , 取上层反应清液 0.5 mL, 加 17.26 mmol· L-1对氨基苯磺酸
0.5mL, 0.7mmol· L-1α-萘氨 0.5 mL和 4 mol· L-1 HCl40 μL, 用分光光度计测定 532 nm处的吸光度 ,
超氧阴离子自由基的浓度可以由吸光度(A)的相对值来表示 [ 3] 。
⑹统计方法及软件:数据用 x±s表示 ,采用组间 t检验 , 用 MicrosoftExcel进行统计分析 。
2　结果
2.1　岩白菜素的结构
岩白菜素为无色结晶 , 熔点 258℃, FAB-MS、1H-NMR和 13CNMR的数据与文献 [ 4]报道的 Bergenin相
符。
2.2　岩白菜素对正常脑组织匀浆自发性脂质过氧化作用
结果发现 , 与不同浓度的岩白菜素共同孵育的脑匀浆内 MDA均有不同程度的降低 , 与生理盐水对照组
相比差异均有显著性 ,表明岩白菜素能明显抑制脑匀浆的自发脂质过氧化作用。见表 1。
2.3　岩白菜素对脑缺血小鼠脑组织匀浆脂质过氧化的作用
结果显示 , 用岩白菜素给小鼠灌胃后 , 脑缺血状态下的小鼠脑匀浆脂质过氧化水平下降 , 与生理盐水组比
较差异有显著性。表明岩白菜素能明显抑制缺血状态下脑匀浆脂质过氧化物的升高。见表 2。
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表 1　岩白菜素和维生素 E对正常脑组织匀浆自发
性脂质过氧化的影响(A值 x±s)
组别　　c/(mol· L-1) n/只 A
生理盐水 4 0.167±0.022
VitaminE　1.5×10-5 4 0.124±0.0182)
岩白菜素　4.5×10-5 4 0.085±0.0131)
　　　　　9.0×10-6 4 0.113±0.0152)
　与对照组相比 , 1)P<0.01, 2)P<0.05
表 2　岩白菜素对脑缺血小鼠脑组织匀浆脂质过氧化
的影响(A值 x±s)
组别　　w(mg· kg-1) n A
生理盐水 4 0.357±0.062
VitaminE　5 4 0.246±0.0332)
岩白菜素　10 4 0.197±0.0261)
　　　　　5 4 0.231±0.0192)
　与对照组相比 , 1)P<0.01, 2)P<0.05
2.4　岩白菜素对超氧阴离子自由基的清除作用
结果表明岩白菜素能够显著抑制超氧阳离子自由基的产生。见表 3
表 3　岩白菜素和维生素 E对超氧阴离子自由基 O·2 (A值 x±s)
组别　c/(mol· L-1) n/只 c(O·2 )/(nmol· L-1) 清除率 /%
生理盐水　　　　　 4 29.31±3.15
VitaminE 1.5×10-5 4 19.02±1.661) 38.61
岩白菜素 4.5×10-5 4 13.54±1.271) 54.72
　　　　 9.0×10-6 4 16.38±1.591) 42.63
　 1)与对照组相比 , P<0.01
3　讨论
组织中脂质过氧化产物的含量变化可间接反映组织中自由基的产生以及细胞膜损伤的程度。本实验结
果表明 , 岩白菜素可降低孵育和缺血再灌注引起的小鼠脑组织中脂质过氧化产物的含量的升高 , 同时能较好
清除超氧阴离子自由基。氧自由基是一种活性基团 ,在机体处于应激等状态时会过量产生 , 与蛋白质 、核酸和
膜脂质等发生反应 , 损伤细胞的膜结构和功能。自由基对脑神经元的损害尤为重要 ,它一方面使脑组织内钙
超负荷 , 以及引起神经细胞的膜结构破坏 , 膜通透性改变而出现脑水肿 , 损害脑神经元;另一方面通过增加微
血管的通透性加重脑水肿。本实验结果提示 ,清除自由基 、抑制脂质过氧化反应 、保护细胞结构和功能的完整
性是岩白菜素抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一。
[参考文献 ]
[ 1] 　PUHAN-lin, HANGXia, ZHAOJin-hua, etal.BergeninistheprincipalischemiccomponentinFluggea
Virosa[ J] .PlantMed, 2002, 68:372-374.
[ 2] 　OHKAWAH, OHISHIN, YAGIK.Assayforlipid-peroxidesinanimaltissuesbythiobarbituricalacidreac-
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[ 3] 　OYANAGUEY.Reevaluationofasssymethodaandestablishmentofkitforsuperoxidedismutaseactivity[ J] .
AnnalBiochem, 1984, 142:290-296.
[ 4] 　MURTHYYLN, JAIRAIMA.CrystalineconstitutentsofFluggeamicrocarpaBlume[ J] .JIndChemSoc,
1988, 65:738-749.
[责任编辑:李　弘 ]
241第 2期 蒲含林:　岩白菜素清除小鼠脑组织自由基及抗脂质过氧化作用