全 文 ：牛肝菌是一种在世界各地均广泛分布的野生
食用菌，因其野生子实体内富含多种氨基酸、维生
素、矿质元素、蛋白质、活性多糖等人体所需的营养
成分，且香味浓郁，味道鲜美，深受人们喜爱〔1-2〕。
目前，国内外对于牛肝菌的研究众多，主要集中于
牛肝菌的抗氧化方面，如Kasuga等〔3〕研究了乳牛肝
菌中抗氧化活性成分，国内学者也对此进行了大量
研究〔4〕。但对于牛肝菌增强机体免疫功能方面的研
究较少。已有研究表明：牛肝菌可增强机体免疫功
能〔5〕。因此，本文以云南野生牛肝菌的水提剂和醇
提剂为受试药物，通过连续灌胃小鼠10 d后，检测其
免疫功能。旨在探讨牛肝菌醇提取物对小鼠免疫功
能的影响。
1 材料和方法
1.1 受试药品 由大理学院药学院药物研究所提
供，提取率为21%，使用冷冻法干燥。
1.2 实验动物 昆明种小鼠由昆明医科大学动物
中心提供，共计140只，雌雄各半，4~6周龄，体重18~
22 g。实验动物许可证号：scxk（滇）2005-0008。
1.3 主 要 仪 器 和 试 剂 连 续 波 长 酶 标 仪
（PowerwaveXS，美国），CO2培养箱（SANYO，日本），
二甲基亚砜（DMSO，天津市风船化学试剂科技有限
公司，批号：070707）；注射用环磷酰胺（CTX）（山西
普德药业有限公司，批号：20100307）；小牛血清（北
京奥博星生物技术责任有限公司，批号：
20100303）；RPMI -1640 （Invitrogen公司，批号：
1313945）；植物血凝素PHA（Solarbio Life sciences，
批号：P8090）；四噻唑盐（MTT，Sigma公司）；Mouse
IL-2 ELISA检测试剂盒（Quantikine，批号：281038）；
Mouse TNFα ELISA检测试剂盒（Quantikine，批号：
282254）。
1.4 实验分组 牛肝菌（NGJ）样品溶解时使用超
纯水（ddH2O）和二甲基亚砜两种溶剂；环磷酰胺、二
甲基亚砜和超纯水组为阴性对照组；实验中NGJ含
量为200 mg/kg，CTX含量为40 mg/kg，DMSO含量20
mL/kg，ddH2O含量为20 mL/kg。采用随机区组法，按
性别将140只小鼠分为14个小组，分别用A-N表示，
每组10只。具体分组见表1。
牛肝菌对小鼠免疫功能影响的实验研究
王 涛，李丽娟，申元英*
（大理学院，云南大理 671000）
［摘要］目的：探讨牛肝菌对小鼠免疫功能的影响。方法：将牛肝菌的水溶液和脂溶液分别灌胃小鼠10 d，检测小鼠免疫器官重
量、巨噬细胞吞噬能力、T淋巴细胞增殖情况及细胞因子产生的情况。结果：牛肝菌脂溶组中小鼠的多数指标均高于水溶组；并
且牛肝菌对雌性小鼠的免疫增强作用强于雄性小鼠。结论：牛肝菌有增强免疫功能及抗肿瘤的作用。
［关键词］牛肝菌；免疫活性；小鼠
［中图分类号］R34 ［文献标志码］A ［文章编号］1672-2345（2012）06-0020-03
Effect of Bolete on Mice Immune Function
WANG Tao, LI Lijuan，SHEN Yuanying*
（Dali University, Dali, Yunnan 671000, China）
〔Abstract〕Objective: To observe the effect of bolete on immune function of mice. Methods: Intragastric administration of bolete in
aqueous solution or in lipid solution into the mice for 10 days consecutively. Organ weight of thymus and spleen, phagocytic capacity
of macrophage, proliferation of T lymphocyte and cytokines inducement were investigated. Results: Indexes of lipid solution group
were higher compared with that of aqueous group. Bolete manifested obvious effect on immunologic enhancement of female mice
compared with the male mice. Conclusion: Bolete could enhance immune function and show anti-tumor effect in mice.
〔Key words〕bolete; immunity; mice
大理学院学报
JOURNALOF DALI UNIVERSITY
第11卷 第6期 2012年6月
Vol.11 No.6 Jun. 2012
20
表1 牛肝菌对小鼠免疫功能影响的实验分组
1.5 检测方法 1次/d灌胃小鼠，10 d后通过对小鼠
的脏器/体重比值、吞噬功能和T淋巴细胞增殖及细
胞因子的测定，检测牛肝菌醇提取物对小鼠免疫功
能的影响。
1.5.1 脏器/体重比值测定 小鼠颈椎脱臼处死称
重后，立即取出胸腺和脾脏，用滤纸吸干血液后称
重，胸腺（脾）指数单位：胸腺（脾）质量/小鼠体质量
（mg/10 g）。
1.5.2 吞噬功能 处死动物前3 d，以5%的淀粉肉
汤启动小鼠巨噬细胞，采用半体内法检测腹腔巨噬
细胞吞噬功能，以100个巨噬细胞中吞噬酵母菌的
巨噬细胞数（吞噬率）及每个巨噬细胞吞噬酵母菌
的个数（吞噬指数）作为评价指标。
1.5.3 MTT法测定T淋巴细胞增殖 无菌取出脾
脏，制成脾细胞悬液，用RPMI-1640不完全营养液洗
涤3次，1 000 rpm离心10 min，然后用完全营养液配
成1×107/mL。取100 μL加入96孔细胞培养板内，每孔
1×106个细胞，每个样品做3个复孔。再加入240 mg/L
的PHA 20 μL，使终浓度为40 mg/L，同时设不加
PHA的对照孔，置37 ℃、5% CO2培养箱中培养48 h
后，每孔加入10 μL MTT溶液（5 g/L），再继续培养4
h，离心，弃上清液，然后加入30% DMSO 100 μL，充
分振荡后静置20 min，用酶标仪于波长570 nm处测
A值。
1.5.4 细胞因子的检测 将动物用乙醚麻醉以后，
摘眼球取血，将血液静置离心后，获得血清，用
ELISA法测IL-2及TNFα，具体按试剂盒说明操作步
骤进行。
1.6 统计学分析 应用SPSS 17.0软件对数据进行
分析。显著性检验水准为α=0.05。
2 结果
2.1 不同处理小鼠脏器/体重指数比较
2.1.1 胸腺指数 胸腺指数是衡量机体免疫功能
的指标之一。由表1可知，从总体上看，不同处理组
中小鼠的胸腺指数均高于阴性对照组。其中，脂
溶组的胸腺指数最高，其次为水溶组，最后为牛
肝菌和环磷酰胺组。除水溶组外，其他处理组中
雌性小鼠的胸腺指数均高于雄性，差异有统计学
意义（P＜0.05）。牛肝菌水溶组中：雄性组的胸腺指
数高于对应的溶剂对照组（P＜0.05），而雌性组则
无此变化。
2.1.2 脾指数 不同处理组小鼠的脾指数见表1。
由表1可知，脂溶组小鼠的脾指数高于水溶组；环磷
酰胺脂溶组小鼠的脾指数高于脂溶组和水溶组（P＜
0.05）；不同处理组中雌性小鼠的脾指数均高于雄
性，差异无统计学意义（P＞0.05）。
2.2 不同处理小鼠吞噬功能比较 通过比较不同
处理后小鼠吞噬率和吞噬指数发现，不同处理组之
间小鼠的吞噬率和吞噬指数差异无统计学意义（P＞
0.05）。
2.3 不同处理小鼠T淋巴细胞增殖比较 对不同处
理组小鼠的T淋巴细胞增殖进行比较发现：脂溶组
小鼠的T淋巴细胞增殖强于水溶组；环磷酰胺脂溶
组小鼠的T淋巴细胞增殖强于环磷酰胺水溶组（P＜
0.05）；不同处理对雌性和雄性小鼠的T淋巴细胞增
殖影响不大。
2.4 不同处理小鼠细胞因子比较
2.4.1 细胞因子IL-2 除环磷酰胺雌性组与其余
各组中细胞因子IL-2差异均有统计学意义（P＜
0.05），其余组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。
2.4.2 细胞因子TNFα 对于细胞因子TNFα，不同
处理组之间差异较大，见表1。
3 讨论
目前报道的牛肝菌营养成分中，野生牛肝菌中
硒的含量非常丰富〔6〕，而硒具有抗氧化及增强机体
免疫力的作用；美味牛肝菌的油脂成分具有增强机
体免疫能力、抗肿瘤的作用〔7〕。
本研究通过不同处理后，测定小鼠的脏器/体重
比值、吞噬功能和T淋巴细胞增殖及细胞因子，结果
显示：脂溶组中小鼠的大多数指标均高于水溶组，
提示牛肝菌水溶剂对正常小鼠的免疫增强作用弱
于脂溶剂；并且牛肝菌对雌性小鼠的免疫增强作用
强于雄性小鼠，其机理有待于进一步研究。与刘佳
A=NGJ，水溶，♀ B=NGJ，水溶，♂
C=NGJ,酯溶，♀ D=NGJ，酯溶，♂
E= NGJ+CTX，水溶，♀ F=NGJ+CTX，水溶，♂
G=NGJ+CTX，酯溶，♀ H=NGJ+CTX，酯溶，♂
I=DMSO，♀ J=DMSO，♂
K=ddH2O，♀ L=ddH2O，♂
M=CTX，♀ N=CTX，♂
王 涛，李丽娟，申元英 牛肝菌对小鼠免疫功能影响的实验研究 第 11卷总第 102期
21
表1 牛肝菌对小鼠免疫功能的影响（x±s，n=10）
分组 胸腺指数 脾指数 淋巴细胞增殖 吞噬率 吞噬指数 IL-2 TNFα
A 25.40±3.88 32.05±4.56 0.74±0.28 0.015±0.02 1.17±0.00 7.65±11.15 23.19±5.32j
B 25.63±4.86 28.45±3.95 0.65±0.22 0.39±0.11 2.08±0.83 6.51±4.66 153.31±156.67k
C 38.90±16.34a 35.41±11.00 0.83±0.11 0.23±0.18 1.81±0.29 4.09±1.26 168.88±102.97l
D 20.77±14.18c 29.72±4.71 0.92±0.43b 0.28±0.00 1.39±0.00 5.43±4.66 136.86±274.87m
E 25.72±8.81 27.16±5.45 0.74±0.17 0.27±0.16 1.65±0.48 5.67±0.76 28.31±3.48n
F 19.98±18.68 16.39±5.90 0.49±0.26e 0.23±0.03 1.70±0.34 5.90±0.78 42.42±35.11
G 29.72±12.08 53.84±18.85c,e 1.15±0.57e 0.26±0.06 1.77±0.62 5.42±0.99 26.11±4.28
H 20.55±5.93 47.85±18.93d,f,g 1.15±0.53f 0.32±0.20 1.93±0.45 6.48±1.01 21.47±1.44
I 38.59±13.94 37.30±13.22 0.74±0.19 0.37±0.28 2.37±0.86 4.34±1.46 21.47±1.44
J 18.52±8.36 28.72±6.17 0.82±0.16 0.36±0.17 2.06±0.73 5.09±4.38 28.97±20.24
K 25.31±3.77 27.69±7.56 0.61±0.13 0.26±0.06 1.70±0.24 5.04±2.87 17.09±4.81
L 9.71±2.69b 26.07±4.51 0.66±0.25 0.27±0.81 1.71±0.31 3.82±1.44 18.93±7.18
M 32.82±10.37 44.87±24.48e 0.57±0.21g 0.28±0.15 1.95±0.60 6.15±1.19i 30.24±9.37
N 12.96±6.09 38.75±15.50f 0.59±0.16h 0.25±0.19 2.29±0.83 12.34±6.96 26.82±6.83
注：A：P＜0.05，vs NGJ水溶 雌性；B：P＜0.05，vs NGJ水溶 雄性；C：P＜0.05，vs NGJ酯溶 雌性；D：P＜0.05，vs NGJ酯溶 雄性；E：
P＜0.05，vs NGJ+CTX水溶 雌性；F：P＜0.05，vs NGJ+CTX水溶 雄性；G：P＜0.05，vs NGJ+CTX酯溶 雌性；H：P＜0.05，vs NGJ+
CTX酯溶 雄性；I：P＜0.05 vs其余各组；J：P＜0.05 vs NGJ水溶 雄性，NGJ酯溶 雌性，NGJ酯溶 雄性，NGJ+CTX水溶 雌性；
K：P＜0.05 vs NGJ+CTX酯溶 雌性，DMSO，ddH2O，CTX；L：P＜0.05 vs NGJ+CTX酯溶雌性，DMSO，ddH2O，CTX；M：P＜0.05 vs
ddH2O；N：P＜0.05 vs ddH2O，CTX雄性。
等人研究结果相比较〔6〕，本研究实验组NGJ+CTX水
溶组，NGJ+CTX脂溶组的胸腺指数均较其牛肝菌9
g/（kg·bw）+CTX50 mg/（kg·bw）组胸腺指数高，提示
本实验方案的剂量组合效率较高。
TNF各组之间存在不同程度的差异，主要集中
于NGJ水溶组及酯溶组与其余各组之间；提示牛肝
菌的水溶提取物及酯溶提取物均有较高的抗肿瘤
作用。
综上所述，根据免疫功能检验方法〔8〕的判定标
准（脏器/体重比值测定和淋巴细胞增殖转化试验阳
性），说明牛肝菌有增强免疫功能的作用及抗肿瘤
作用。但牛肝菌水溶液的免疫增强作用弱于脂溶液
和雌性小鼠的免疫增强作用强于雄性小鼠的机理、
牛肝菌具体的功效成分、作用强度、以及剂效关系
等有待于进一步研究。
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［基金项目］云南省中青年学术技术带头人后备人才培养基
金资助项目（2006PY057）
［收稿日期］2012-01-10 ［修回日期］2012-04-14
［作者简介］王涛，实验师，主要从事预防医学研究.
*通信作者：申元英，教授.
（责任编辑 毛本勇）
大理学院学报总第 102期 医学
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