全 文 ：作者简介:王炜(1972-),男,主治医师,博士,研究方向:普通外科,器
官移植;刘彤(1964-),男,教授,博士,研究方向:普通外科,器官移植。
[摘要]目的:探讨青藤碱在小鼠心脏移植中的抗排斥作用及其可能机制。 方法:在小鼠心脏移植模型中,观察异系
移植组、CsA治疗组、青藤碱治疗组移植心脏存活时间、术后 7d移植物排斥反应病理分级以及 IL-2mRNA表达水
平。 结果:青藤碱治疗组移植心脏存活时间为(17.67±0.82)d,与异系对照组(11.00±2.10)d相比明显延长(P<0.01);
病理结果显示,排斥反应减轻,呈轻-中度变化;移植心脏中IL-2mRNA表达水平明显减低(P<0.01)。结论:青藤碱在
小鼠心脏移植中具有抗排斥作用,作用机制可能为抑制IL-2等促排斥细胞因子表达。
[关键词]青藤碱;排斥;移植；小鼠
[中图分类号]R654.2 [文献标识码]A [文章编号]1006-8147(2006)03-0401-03
Theanti-rejectionefectofsinomenineinmicehearttransplantation
WANGWei,LIUTong,ZHULi-wei,WANGPeng-zhi
(DepartmentofGeneralSurgery,GeneralHospital,TianjinMedicalUniversity,Tianjin300052,China)
ABSTRACTObjective:Toinvestigatetheanti-rejectionefectofsinomenineinmicehearttransplanta-
tionandelucidatetheanti-rejectionmechanismofsinomenine.Methods:Themicewithhearttransplan-
tationweredividedinto3groups:alografttransplantationgroup,CsAtreatmentgroupandsinomenine
treatmentgroup.Thegraftsurvival,pathologicalgradingofgraftrejectionandIL-2mRNAexpressionlevels
on7thdaypost-operativelywereinvestigatedinthreegroups.Results:Thegraftssurvivalwasprolongedin
sinomeninetreatmentgroupcomparingwiththatinsubgroupalografttransplantation (17.67±0.82vs
11.00±2.10,P<0.01).Therejectionpathologicalywasrelievedandmildtomoderatechangesappeared.
TheIL-2mRNAlevelingraftssignificantlydecreasedincontrast(P<0.01).Conclusion:Sinomeninepos-
sessanti-rejectionefectinmicehearttransplantation.Themechanismmightbethatsinomenineinhibits
cytokineIL-2whichmaypromotetherejection.
KEYWORDS Sinomenine;Rejection;Transplantation;Mouse
王 炜,刘 彤,朱理玮,王鹏志
(天津医科大学总医院普通外科,天津 300052)
青藤碱在小鼠心脏移植中的抗排斥作用
随着近年来对青藤碱药理作用的深入研究,发
现其不仅具有镇静、镇痛、镇咳、抗心律失常等作用,
还具有一定的抗排斥作用。我们在小鼠同种异体心
脏移植模型中,通过观察移植心存活时间,移植心脏
排斥反应病理评分以及排斥反应分子标志物 IL-2
mRNA表达水平,研究青藤碱抗排斥作用以及其可
能机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物及主要试剂 C57BL/6及BalbC小鼠
购自北京军事医学科学院;TRIzol试剂(invitrogen
美国);莫洛尼亚鼠逆转录酶(Mo-MLV,promega美
国);寡聚3′端引物OligodT15(promega美国)。青藤
碱(sinomenine,SIN)注射液(25mg/ml)(湖南正清医
药公司)。小鼠 IL-2、β-actincDNA扩增引物由
GeneRunner软件自行设计,奥科生物公司合成。
1.2 实验方法
1.2.1 动物模型制作及分组 供体:C57BL/6小鼠,
受体:BalbC小鼠。小鼠心脏移植手术采用 Cory’s
术式,分别将供体升主动脉、肺动脉吻合于受体腹主
动脉、下腔静脉。术后每天自腹部触摸移植心脏搏动
天 津 医 科 大 学 学 报
JOURNALOFTIANJINMEDICALUNIVERSITY
第 12卷3期
2006年 9月
Vol.12,No.3
Sep.2006 401
表1 引物序列及扩增片段长度
目的基因
IL-2
β-actin
引物序列
上游5′-GGCATGTTCTGGATTTGACTC-3′
下游5′-GGGCTTGTTGAGATGATGCT-3′
上游5′-ATCCGTAAAGACCTCTATGC-3′
下游5′-AACGCAGCTCAGTAACAGTC-3′
扩增片段(bp)
202
287
情况,搏动存在3d判为手术成功。实验动物分组:
(1)异系对照组(n=12):C57BL/6→BalbC。(2)青藤
碱(SIN)治疗组(n=12):C57BL/6→BalbC术后予以
青藤碱注射液100mg/kg肌肉注射。(3)CsA治疗组
(n=12):C57BL/6→BalbC术后予以 CsA5mg/kg肌
肉注射。
各组实验动物中6只用于观察生存期,其余 6
只术后7d处死,取部分移植心脏组织福尔马林固
定,石蜡包埋,HE染色。移植心脏排斥反应病理分级
参照国际心脏移植学会(ISHT)排斥反应诊断标准[1]。
1.2.2 半定量 RT-PCR检测 mRNA表达水平 称
取50~100mg心脏组织,提取总RNA,反转录成cD-
NA,半定量RT-PCR检测IL-2mRNA表达水平 (引
物序列及扩增片段见表1)。
1.3 统计学处理 实验数据采用 SPSS10.0软件统
计分析,等级资料采用秩和检验,计量资料采用t检
验及方差分析。统计结果中,P<0.05表示具有统计学
意义。
2 结果
2.1 青藤碱对小鼠移植心脏存活时间的影响 SIN
治疗组小鼠移植心脏存活时间(17.67±0.82)d,与对
照组(11.00±2.10)d相比明显延长(P<0.01,t检验);
但以SIN单药治疗对延长移植心脏存活期效果不及
CsA治疗组(30.00±0.00)d,二者有显著性差异(P<
0.01,t检验)。
2.2 青藤碱对小鼠移植心脏病理改变的影响 SIN
治疗组中,术后7d移植心脏病理检查结果呈轻—中
度排斥反应,与异系对照组相比,排斥反应病理分级
明显降低(P<0.01),与 CsA治疗组相比无显著差异
(P>0.05,见表2)。
2.3 青藤碱对移植心脏中 IL-2mRNA表达水平的
影响 SIN治疗组与异系对照组相比,术后7d移植
心脏中IL-2mRNA表达水平显著降低(P<0.01),与
CsA治疗组相比 IL-2mRNA表达水平无明显差异
(P>0.05,F=17.02)。各组IL-2mRNA表达水平电泳
结果见图1。
3 讨论
为了减轻现有免疫抑制剂的毒副作用,提高患
者生活质量,需不断开发新型免疫抑制剂,但新型的
化学免疫抑制剂昂贵的价格限制了其在临床上的应
用,在一定程度上阻碍着我国器官移植事业的发展。
我国中药资源丰富,历史悠久,是一个伟大的宝库。
近年来,在器官移植领域中,中医药得到了广泛的研
究和应用,并取得了一定的成绩 [2],在临床上已将雷
公藤、百令胶囊(冬虫夏草菌菌丝体干粉制成的成品
药)作为肾移植后三联免疫抑制剂(硫唑嘌呤、环孢
素A、泼尼松)中硫唑嘌呤的替代用药[3]。国外学者自
冬虫夏草中提取FTY720,在大鼠皮肤、心脏、肝脏等
移植模型中证实能显著延长移植物存活时间,与环
孢素A具有协同作用[4]。
青藤碱是从防已科植物青风藤中提取的生物碱
单体,具有镇静、镇痛、镇咳、抗心律失常、抗炎和免
疫抑制等药理作用,临床上主要用于对类风湿性关
节炎等各种风湿病以及心律失常的治疗[5]。近年来对
其抗排斥作用的研究逐步深入,有关青藤碱的抗排
斥作用也有不少报道。在大鼠肾移植模型中发现,可
显著延长受体存活期,并证实其与环孢 A有协同作
用[6,7]。有学者在小鼠心肌移植实验中发现,青藤碱能
明显延长移植心肌的存活时间[8]。
本实验结果表明,在小鼠异位心脏移植中,青藤
碱单药可显著延长移植心脏存活期。与异系对照组
病理结果相比,大淋巴细胞浸润、心肌肿胀坏死、血
管周围炎性浸润等排斥反应表现明显减轻,表明其
具有明显的抗排斥作用。但青藤碱抗排斥作用仍不
及 CsA所达到效果,需与其他免疫抑制剂联合应
用,一方面协同增强免疫抑制作用,另一方面减小传
表2 各组病理结果分级
A异系对照组
BSIN治疗组
CCsA治疗组
总计
n
6
6
6
18
-
0
0
4
4
+
0
4
2
6
++
0
2
0
2
+++
2
0
0
2
++++
4
0
0
4
病理分级
χ2
18.14
P
0.0003
Kruskal-WalisTest
图1 IL-2mRNA表达水平
A.异系对照组;B.SIN治疗组;C.CsA治疗组
天 津 医 科 大 学 学 报 第12卷
marker A B C
402
脲嘧啶+高剂量黄芪治疗组胃癌组织中脯氨酸含量
最高,说明黄芪剂量增加后,可使肿瘤组织中脯氨酸
的含量升高,但其作用机制尚不清楚。
以上结果可以看出,5-氟脲嘧啶与黄芪联合
应用虽然能够改变胃癌组织中的个别非必须氨基酸
的含量,但是并不能改变肿瘤组织中必须氨基酸的
含量,因此结合缺乏或减少必须氨基酸的氨基酸失
衡疗法,才能更加有效的抑制肿瘤的生长,达到提高
生活质量及长期生存的目的[9]。同时,在氨基酸失衡
疗法中,除了缺乏或减少必须氨基酸的含量外,减少
谷氨酸等非必须氨基酸的含量也有一定作用。
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6(2):643
(2006-05-05收稿)
(上接第400页)
统免疫抑制剂量以减轻其毒副作用。
在移植免疫中,IL-2可促进 CD4、CD8、CTL细
胞增殖活化,引发排斥反应,是器官移植后发生排斥
反应的经典分子标志,环孢A及FK506的免疫抑制
机制均为通过抑制 IL-2的合成、分泌,使 CTL、B细
胞、巨噬细胞不能激活。在青藤碱治疗组中,移植心
脏中 IL-2mRNA表达水平较对照组明显降低 (P<
0.01),说明青藤碱可通过抑制移植物中 T淋巴细胞
IL-2的合成、分泌,从而抑制T淋巴细胞增殖、活
化,发挥其免疫抑制作用。
从天然药物中提取免疫抑制剂已成为移植学界
的共识。具有广泛来源的自然药物,其低廉的价位和
低毒性的优点和其确切的免疫抑制作用必将推动我
国器官移植的迅速发展。在传统的单方、复方研究基
础上,深入对某些组分的研究,并进行化学结构修饰、
改造剂型,相信会最终寻找到高效的免疫抑制剂[9]。
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王 炜,等.青藤碱在小鼠心脏移植中抗的排斥作用第3期 403