全 文 ：China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 19 中国药房 2010年第21卷第19期
紫草为紫草科植物新疆紫草 Arnebia euchroma.(Royle)
Johnst.或内蒙紫草Arnebia guttata Bunge的干燥根[1，2]。前者习
称“软紫草”，后者习称“硬紫草”。其中新疆紫草更为常用，其
味甘、咸，性寒，归心、肝经，具有凉血、活血、解毒透疹等功
效。临床常用于治疗血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疱痒、阴
道炎、婴儿皮疹、水火烫伤等，具有很强的抗细菌、抗真菌、抗
肿瘤、保肝和调节免疫等作用[3]。紫草根部含有萘醌类色素，
包括紫草素、乙酰紫草素、丙烯酰紫草素、异丁酰紫草素、β，β´-
二甲基丙烯酰紫草素等多种色素成分，多以左旋紫草素的含
量作为紫草提取物的检测标准。文献报道左旋紫草素的测定
方法有薄层扫描法[4]、高效液相色谱法[5～7]等。以毛细管电泳法
进行测定，相关报道[8]为采用高频电导检测器，而电化学检测
普遍存在的弱点为重现性较差，以此作为药材的质量控制方
法较为不利。本试验采用紫外检测器，通过改善一系列电泳
条件，建立了对新疆紫草中左旋紫草素分离、测定的高效毛细
管电泳（HPCE）法。
1 材料
1.1 仪器
CL1030型 HPCE仪（北京彩陆科学仪器有限公司）；
K- 2501型紫外-可见检测器（德国诺尔公司）；HW- 2000型色
谱工作站（2.17版，南京千谱软件有限公司）；pHS- 3C型精密
酸度计（上海虹益仪器仪表有限公司）；DL- 360型超声波清洗
器（宁波市石浦海天电子仪器厂）。
1.2 试药
左旋紫草素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：
0769- 9903）；新疆紫草药材购自北京同仁堂，经广东药学院中
药学院孟江副教授鉴定为真品；所用试剂为优级纯或分析纯，
水为二次蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品贮备液 精密称取左旋紫草素对照品9.0 mg，加
适量甲醇溶解后定容至 25 mL，即得（360.0 μg·mL- 1），4℃贮
藏。临用时稀释成各浓度的对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液 精密称取适量干燥的紫草粉末，置于 50
mL锥形瓶中，加甲醇 25 mL，准确称量，超声 30 min，放冷，补
充甲醇至初始质量，摇匀，过滤，弃去初滤液，续滤液用0.45 μm
滤膜过滤，即得。
2.2 电泳操作条件
采用未涂层弹性融硅石英毛细管（53 cm×50 μm ID，有效
长度46 cm），运行电压14 kV，重力虹吸方式进样，高度25 cm，
进样时间15 s，紫外检测波长516 nm。试验在恒温（25℃）、恒
湿（60％）条件下进行。
毛细管在使用前，依次用二次蒸馏水冲洗 10 min、0.1
mol·L- 1NaOH溶液冲洗 5 min、二次蒸馏水冲洗 5 min、运行缓
冲溶液冲洗 10 min，所需电泳缓冲液均经过超声脱气 20 min。
在2次运行之间，用运行缓冲溶液冲洗2 min。
2.3 电泳条件的优化
2.3.1 缓冲溶液的选择 试验考察了 Tris- 盐酸（pH 7.0～
9.0）、Tris- H3BO3（pH 7.5～9.0）、Na2HPO4- NaH2PO4（pH 6.6～
7.8）、硼砂- HAc（pH 7.0～8.5）、H3BO3-三乙胺（pH 7.5～9.2）、
H3BO3-二乙胺（pH 7.5～9.2）缓冲体系。此外，还检测了Tris-
高效毛细管电泳法测定新疆紫草中左旋紫草素的含量
白 研＊，毋福海，罗碧莲，曾春丽（广东药学院公共卫生学院，广州市 510310）
中图分类号 R284.1；R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）19- 1790- 03
摘 要 目的：建立以高效毛细管电泳-紫外检测法测定新疆紫草中左旋紫草素含量的方法。方法：分离柱为未涂层弹性融硅石
英毛细管（53 cm×50 μm ID，有效长度46 cm），电泳介质为2.0 mmol·L- 1H3BO3+6.0 mmol·L- 1三乙胺缓冲液+5.0 mmol·L- 1 β-环糊
精，分离电压为14 kV，重力进样时间15 s（高度25 cm），检测波长为516 nm。结果：左旋紫草素的检测浓度在7.2～36.0 μg·mL- 1范
围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.999 0）；平均回收率为100.15％，RSD＝1.68％（n＝6）。结论：本法简便、快速、准确、可
靠，可用于新疆紫草中左旋紫草素的含量测定。
关键词 高效毛细管电泳法；新疆紫草；左旋紫草素；含量测定
Content Determination of Shikonin in Arnebia euchroma by HPCE
BAI Yan，WU Fu-hai，LUO Bi-lian，ZENG Chun-li(School of Public Health，Guangdong Pharmaceutical Uni-
versity，Guangzhou 510310，China)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine the content of shikonin in Arnebia euchroma by HPCE- UV. METHODS：The separa-
tion was performed on uncoated fused silica capillary column (53 cm×50 µm ID，46 cm effective length). 2.0 mmol·L- 1 H3BO3，6.0
mmol·L- 1 triethylamine buffer solution and 5.0 mmol·L- 1β- CD was used as background electrolyte，14 kV separation voltage and
time of gravity injection 15 s (25 cm). The detection wavelength was set at 516 nm. RESULTS：The linear range of shikonin was
7.2～36.0 μg·mL- 1(r＝0.999 0) with an average recovery of 100.15％（RSD＝1.68％，n＝6）.CONCLUSION：The method is conve-
nient，rapid，accurate and reliable for the content determination of shikonin in A. euchroma.
KEY WORDS HPCE；Arnebia euchroma；Shikonin；Content determination
＊副教授，硕士。研究方向：药物分析与卫生检验。电话：020-
34055161。E- mail：angell_bai@163.com
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中国药房 2010年第21卷第19期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 19
柠 檬 酸（pH 7.0～9.0）、H3BO3- 硼 砂（pH 7.4～9.0）、
H3BO3- NaCl- 硼砂（pH 7.0～9.2）、硼砂 - KH2PO4（pH 7.0～
9.2）、硼砂- Na2CO3（pH 9.2～1.0）、硼砂（pH 9.2）对样品中左旋
紫草素分离效果的影响。结果发现，在 H3BO3- 二乙胺和
H3BO3-三乙胺缓冲体系中，左旋紫草素出峰相对较好。又比
较 H3BO3- 二乙胺和 H3BO3- 三乙胺 2种缓冲体系，发现在
H3BO3- 二乙胺缓冲体系中，背景噪声和拖尾因子较大；在
H3BO3-三乙胺缓冲体系中，左旋紫草素与其衍生物的分离效
果较好，基线平稳，故最终选用了H3BO3-三乙胺缓冲体系。
由于考虑到运行缓冲液的浓度及配比影响被测物的分离
度与迁移时间，故试验中利用正交试验法考察了H3BO3与三乙
胺不同浓度及配比对左旋紫草素及其衍生物分离情况的影
响，得出 2.0 mmol·L- 1H3BO3+6.0 mmol·L- 1三乙胺的缓冲体系
分离效果最佳。
2.3.2 有机改性剂的选择 在电泳过程中，缓冲溶液中加入有
机溶剂可以影响介质黏度、介电常数及双电层结构等，进而影
响电渗流及迁移行为，达到调节选择性、改善分离度的目的[9]。
试验中考察了乙醇、甲醇、丙二醇、丙酮、β-环糊精（β- CD）、十
二烷基硫酸钠（SDS）等几种添加剂不同加入量对分离和检测
的影响，发现缓冲溶液中加入β- CD时，可使左旋紫草素峰形
变得尖锐，峰高、峰面积明显增大。比较加入不同浓度的
β- CD对左旋紫草素分离的影响，发现加入5.0 mmol·L- 1β- CD
分离效果最好，其它几种添加剂对分离检测无改善。因此，后
续试验选择添加 5.0 mmol·L- 1β- CD的 2.0 mmol·L- 1H3BO3+
6.0 mmol·L- 1三乙胺缓冲体系（pH 8.9）作为电泳介质。
2.3.3 分离电压和进样时间的选择 试验考察了 8.0～23.0
kV电压范围内样品的分离情况，综合考虑分离度、分离时间、
峰展宽、灵敏度、噪声等因素，优化选择14 kV为分离电压。
进样时间决定了进样量的大小，时间太短会影响检测的
灵敏度，时间太长又会影响分离效率和分离度。本试验以重
力进样，进样高度为 25 cm，在 14 kV分离电压下，考察了进样
时间对分离效果的影响，选择最佳进样时间为15 s。
在上述优化试验条件下的电泳图见图1。
2.4 精密度试验
在优化电泳条件下，分别取10.8、25.2 μg·mL- 12种浓度的
左旋紫草素对照品溶液，各重复进样6次，测定峰面积。结果，
RSD分别为1.60％、1.63％，表明仪器精密度良好。
2.5 线性关系考察
取适量对照品贮备液，分别加甲醇稀释成含左旋紫草素
7.2、10.8、14.4、18.0、21.6、25.2、28.8、36.0 μg·mL- 1的系列标准
溶液，在优化电泳条件下重力进样测定。以对照品峰面积积
分值（Y）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归
方程为 Y＝578.24C－431.18（r＝0.999 0）。结果表明，左旋紫
草素检测浓度在7.2～36.0 μg·mL- 1范围内与其峰面积积分值
呈良好线性关系。
2.6 稳定性试验
精密称取紫草药材粉末 0.9 g，加甲醇 25 mL，按“2.1.2”项
下方法处理后稀释 2倍，分别在 0、2、4、6、8、10、12 h按优化电
泳条件分析测定。结果，RSD＝0.85％，表明供试品溶液在 12
h内测定结果稳定。
2.7 加样回收率试验
精密称取 0.050 g紫草药材粉末 6份，将左旋紫草素对照
品按 3种水平分别加入紫草样品中，各平行 2份，按“2.1.2”项
下方法处理后在优化电泳条件下进样分析，计算加样回收率，
结果见表1。
表1 加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 1 Results of recovery test（n＝6）
样品含量/mg
0.193
0.193
0.193
0.193
0.193
0.193
加入量/mg
0.108
0.108
0.144
0.144
0.180
0.180
测得量/mg
0.300 5
0.302 3
0.340 7
0.338 2
0.370 5
0.369 7
回收率/％
99.54
101.20
102.60
100.80
98.61
98.17
x/％
100.15
RSD/％
1.68
2.8 样品含量测定
精密称取适量紫草粉末，平行6份，以甲醇为溶剂，液料比
为50 ∶ 1，室温下超声30 min，按照“2.1.2”项下方法分别制备供
试品溶液，在优化电泳条件下分别测定。结果，样品中左旋紫
草素的平均含量为3.85 mg·g- 1，RSD＝2.32％。
3 讨论
本试验以紫外检测器建立了测定左旋紫草素的HPCE
法。通过对缓冲溶液组成、pH值、浓度、添加有机改性剂以及
分离电压和进样时间对左旋紫草素与其衍生物分离情况的影
响研究，确立了实现左旋紫草素与其衍生物有效分离的HPCE
条件。在此条件下，左旋紫草素保留时间约为5 min，与相关文
献[8]比较分离时间缩短。
试验中供试品溶液是以甲醇为溶剂、超声提取紫草样品
而得，经正交试验优化左旋紫草素提取工艺条件，在此条件下
左旋紫草素含量为3.85 mg·g- 1，与相关文献[10]比较测定含量相
符，但本试验以甲醇为溶剂提取左旋紫草素使收率有一定提
高。
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in Boraginaceous herbs by high- performance liquid chr-
4
2
0
- 2 2 4 6 min
A
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2
0
- 2 2 4 6 8 min
B
1
2
1
2
3
图1 毛细管电泳图
A.对照品；B.紫草；1.左旋紫草素；2.甲醇；3.未知物
Fig 1 Capillary electrophoretogram
A. control substance；B. A. euchroma；1. shikonin；2. methanol；3. unk-
nown substances
mV
mV
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China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 19 中国药房 2010年第21卷第19期
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（收稿日期：2010- 01- 04 修回日期：2010- 03- 22）
HPLC法测定眼保Ⅱ号胶囊中大黄酚的含量
张培琴＊（贵阳中医学院第一附属医院，贵阳市 550001）
中图分类号 R283.65；R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）19- 1792- 02
摘 要 目的：建立以高效液相色谱法测定眼保Ⅱ号胶囊中大黄酚含量的方法。方法：色谱柱为Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5
µm），流动相为无水乙醇- 0.1％磷酸水溶液（87 ∶ 13），流速为1.0 mL·min- 1，检测波长为254 nm。结果：大黄酚进样量在0.042 6～
0.340 8 µg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.999 9）；平均回收率为99.39％，RSD＝1.74％（n＝6）。结论：本方法简
便、准确、灵敏、重复性好，可用于眼保Ⅱ号胶囊的质量控制。
关键词 高效液相色谱法；眼保Ⅱ号胶囊；决明子；大黄酚；含量测定
Content Determination of Chrysophanol in YanbaoⅡCapsule by HPLC
ZHANG Pei-qin（The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang
550001，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a HPLC method for the content determination of chrysophanol in Yanbao Ⅱ capsule.
METHODS：The separation was performed on Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 µm）column with absolute alcohol- 0.1％ phosphoric
acid（87 ∶ 13）as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min- 1 and the detection wavelength was set at 254 nm. RESULTS：The linear
range of chrysophanol was 0.042 6～0.340 8 µg（r＝0.999 9）with an average recovery of 99.39％（RSD＝1.74％，n＝6）. CON-
CLUSION：The method is simple，accurate，sensitive and reproducible for the quality control of YanbaoⅡ capsule.
KEY WORDS HPLC；YanbaoⅡ capsule；Cassia obtusifolia；Chrysophanol；Content determination
＊副主任药师。研究方向：中药学。电话：0851- 8612501。E-
mail：zhangpeiqin@126.com
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眼保Ⅱ号胶囊是我院老中医经过几十年临床经验，根据
中医药学理论研制而成的纯中药复方制剂，由决明子、丹参、
山药、茯苓等15味中药组成，具有清肝养肝、滋肾明目之功效，
主要用于近视、视疲劳、眼底血管病变、眼底视网膜病变的治
疗。目前，其质量标准仅有常规胶囊剂检查项目和薄层色谱
定性鉴别，未对处方中主要有效成分建立质量控制项目。决
明子为方中君药，性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经，始载于
《神农本草经》，具有清热明目、润肠通便之效，主治目赤涩痛、
羞明多泪、头痛眩晕、目暗不明、大便秘结。多年来，国、内外
学者在决明子的化学成分方面做了大量研究，发现决明子中
含蒽醌类、萘骈吡喃酮类、脂肪酸类、氨基酸和无机元素等，主
要成分为蒽醌类，其中大黄酚为主要有效成分[1]。因此，笔者以
2005年版《中国药典》（一部）决明子的含量测定方法为依据[2]，
对眼保Ⅱ号胶囊中决明子的主要有效成分——大黄酚进行了
含量测定。
1 材料
1.1 仪器
1100型高效液相色谱（HPLC）仪，包括四元泵、自动进样
器、VWD检测器、柱温箱、1100化学工作站（美国Agilent公
司）；AB265- S型电子分析天平（瑞士Metler Toledo公司）；
KQ- 200KDB型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药
大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：
110769- 200514）；眼保Ⅱ号胶囊（本院自制，规格：每粒0.44 g，
批号：080701、080805、080909、080923、081125）；决明子药材
（贵州贵阳济仁堂中药饮片厂，批号：20080402）；甲醇为色谱
纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：无水
甲醇- 0.1％磷酸溶液（87 ∶ 13），用前以0.45 µm微孔滤膜滤过；
流速：1.0 mL·min- 1；检测波长：254 nm；柱温：25℃。理论塔板
数按大黄酚计算应不低于3 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取大黄酚对照品适量，加无水乙
醇- 乙酸乙酯（2 ∶ 1）制成浓度约 20 µg·mL- 1的溶液，摇匀，即
得。
2.2.2 供试品溶液 取样品约 5.0 g，精密称定，置具塞瓶中，
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