全 文 ：［收稿日期］ 20110227(005)
［基金项目］ 国家民委和教育部重点实验室开发基金
［通讯作者］ * 王青虎，副教授，博士，从事蒙药有效成分的提
取分离鉴定及质量标准研究，E-mail:wqh693 @
163． com
高效毛细管电泳法同时测定小白蒿
5 种黄酮类化合物的含量
王青虎 * ，奥乌力吉，包建华
(内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000)
［摘要］ 目的:建立小白蒿中 5 种黄酮类化合物的同时测定方法，为综合评价小白蒿最佳采集时间提供参考依据。方法:
采用高效毛细管电泳法测定小白蒿中 5 种黄酮类化合物的含量，并对不同采集时间小白蒿和不同部位中 5 种黄酮类化合物的含
量进行比较。结果:在所用的实验操作条件下，5 种对照品溶液分别在 1. 00 ～ 40. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 8) ，2. 00 ～ 80. 00 mg·L － 1
(r = 0. 999 9) ，0. 50 ～ 80. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 6) ，1. 00 ～ 40. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 3)和 1. 00 ～ 40. 00 mg·L － 1(r =
0. 999 4)具有良好的线性关系，平均回收率分别为 99. 31% (RSD 1. 60%) ，98. 14% (RSD 1. 03%) ，98. 37% (RSD 1. 57%) ，
97. 92% (RSD 0. 94%) ，98. 16% (RSD 1. 20%)。结论:实验结果表明，小白蒿花中黄酮类化合物的相对含量较高，最佳采集
时间为 6 月中旬到 7 月末。
［关键词］ 小白蒿;高效毛细管电泳法;黄酮类;同时测定
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)16-0063-04
Simultaneous Determination of Five Flavonoids in
Artemisia frigida by HPCE
WANG Qing-hu* ，AO Wu-li-ji，BAO Jian-hua
(College of Traditional Mongolian Medicine，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for determining five flavonoids in Artemisia frigida in order to
review the collection time． Method:The content of five flavonoids in different collection time and parts of A．
frigida was determined by HPCE and the content was compared to predicate the collection time． Result:The linear
ranges of five flavonoids were 1. 00-40. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 8) ，2. 00-80. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 9) ，0. 50-80. 00
mg·L － 1(r = 0. 999 6) ，1. 00-40. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 3)and 1. 00-40. 00 mg·L － 1(r = 0. 999 4)respectively．
The average recoveries of five flavonoids were 99. 31% (RSD 1. 60%) ，98. 14% (RSD 1. 03%) ，98. 37% (RSD
1. 57%) ，97. 92% (RSD 0. 94%) ，98. 16% (RSD 1. 20%)． Conclusion:The content of five flavonoids in the
flower is more than that in other parts． The optimal collection time is from the middle of June to the end of July．
［Key words］ Artemisia frigida;HPCE;flavonoids;simultaneous determination
小白蒿别名冷蒿蒙名阿各，系菊科蒿属植物冷
蒿 Artemisia frigida Willd． 的地上部分，主治各种出
血，关节肿胀，肾热，月经不调，疮痈，也是蒙医常用
的“人造圣水组成之一”［1］。主要分布于我国的内
蒙古、青海、甘肃、山西和东北地区。作者在小白蒿
化学成分研究的前期工作中，从全草中分离出多种
黄酮类化合物。现代药理研究［2-4］表明，黄酮类化合
物具有扩张血管、抗氧化、抗炎和调血脂作用。其药
理作用与蒙医经典验方［5-6］和现代临床用药比较吻
合。黄酮类化合物是小白蒿的主要活性成分之一。
但经查阅近几十年来的国内外相关药学文献，作者
发现目前国内外对小白蒿的采集时期以及采集后的
·36·
第 17 卷第 16 期
2011 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 16
Aug．，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.16.030
加工工艺还没有一个明确的标准。本实验建立了高
效毛细管电泳法同时测定其中 5，7，3-三羟基-4-甲
氧基黄酮、5，3-二羟基-6，7，4-二甲氧基黄酮、槲皮
素、5，7，3-三羟基-6，4-三甲氧基黄酮和木犀草素的
含量，并对不同采集时间小白蒿和不同部位中 5 种
黄酮类化合物的含量进行比较，以其为综合评价小
白蒿最佳采集时间提供参考依据。
1 仪器与试药
CAPEL-105 型高效毛细管电泳仪;弹性石英毛
细管(郑州英诺高科有限公司) ;UV-3000 型双波长
双光束紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。PB-
20 型数式酸度计 (北京赛多利斯有限公司) ;
AUW220D 型自动电子天平(日本岛津公司)对照
品:5，7，3-三羟基-4-甲氧基黄酮、5，3-二羟基-6，7，
4-二甲氧基黄酮、槲皮素、5，7，3-三羟基-6，4-三甲
氧基黄酮和木犀草素均为自制并用高效毛细管电泳
仪分别测定其含量均 ＞ 99. 5%，内标物为山奈酚。
实验中所用的小白蒿采集地点为内蒙古通辽市扎鲁
特旗罕山，采集时间见表 1。乙腈为色谱纯(天津市
光复精细化工研究所) ，水为超纯水，大孔树脂 D101
(天津市北联精细化学品开发有限公司) ，其他所用
试剂均为分析纯。
表 1 小白蒿的采集时间和不同部位
No． 采集时间和部位 采集人
1 2009-05-19 金泉
2 2009-06-08 金泉
3 2009-06-27 孟和巴根那
4 2009-07-12 孟和巴根那
5 2009-07-25 孟和巴根那
6 2009-08-10 孟和巴根那
7 2009-08-28 孟和巴根那
8 茎 王青虎
9 花 王青虎
10 叶 王青虎
2 方法与结果
2. 1 电泳条件 弹性石英毛细管柱 75 μm × 50
cm，进样方式为电动进样 15 s，分离电压为 18 kV，
毛细管温度 25 ℃，检测波长 283 nm。运行缓冲液
0. 25 mol·L － 1硼砂 30%乙腈溶液。每天开机使用前
均用 0. 5 mol·L － 1盐酸溶液在 25 ℃下冲洗 10 min，
再用 0. 5 mol·L － 1的氢氧化钠溶液在 25 ℃下冲洗 10
min，然后分别用 0. 1 mol·L － 1盐酸溶液、0. 1 mol·L － 1
的氢氧化钠溶液、超纯水和缓冲液冲洗 5 min。平行
测定之间用 0. 1 mol·L － 1氢氧化钠、超纯水和缓冲液
在 25 ℃条件下各冲洗 5 min。进样前 0. 45 μm 微孔
滤膜过滤在操作条件下，所测 5 种黄酮类化合物的
分离度良好，结果见图 1。
A．样品溶液;B．内标物溶液;1. 5，7，3-三羟基-4-甲氧基黄酮;
2. 5，3-二羟基-6，7，4-二甲氧基黄酮;3. 槲皮素;4. 5，7，3-三
羟基-6，4-三甲氧基黄酮;5. 木犀草素(表 2 ～ 4 同)
图 1 样品溶液和对照溶液的 HPCE
2. 2 供试液的制备
2. 2. 1 样品供试液的制备 分别称取样品 0. 4 g，
精密称定，加三氯甲烷 25 mL，超声处理 30 min，滤
过。分别吸取续滤液 10 mL，蒸干，加 10 mL 20%甲
醇溶解，放入已装好 40 g 大孔树脂(D101)的色谱
柱，先用 20%乙醇溶液 50 mL 洗脱，然后用无水乙醇
100 mL 洗脱。把无水乙醇部分减压回收至干，加色谱
乙腈溶解并定容至 5 mL，即得样品供试液 1 ～ 10。
2. 2. 2 对照品和内标溶液的制备 分别精密称取
5 种黄酮对照品和内标物适量，分别加色谱乙腈溶
解并配成浓度为 3 g·L － 1的对照品储备液和内标
溶液。
2. 3 线性关系的考察 精密吸取 5 种黄酮对照品
储备液适量，分别加入相同量内标液，然后用色谱乙
腈配成不同浓度的系列对照品溶液，在选定操作条
件下分析测定，以对照品的质量浓度为横坐标，对照
品和内标物的峰面积比为纵坐标绘制标准曲线，计
算其回归方程式。结果见表 2。
2. 4 精密度试验 在选定的操作条件下，精密吸取
5 种黄酮储备液 10 μL，再加入内标液 10 μL，然后用
·46·
第 17 卷第 16 期
2011 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 16
Aug．，2011
表 2 5 种黄酮对照品溶液的线性关系
对照品 回归方程 r 线性范围 /mg·L － 1
1 Y = 0. 114 3 X + 0. 032 7 0. 999 8 1. 00 ～ 40. 00
2 Y = 0. 100 0 X + 0. 059 5 0. 999 9 2. 00 ～ 80. 00
3 Y = 0. 055 5 X + 0. 026 8 0. 999 6 0. 50 ～ 80. 00
4 Y = 0. 113 2 X － 0. 016 1 0. 999 3 1. 00 ～ 40. 00
5 Y = 0. 097 9 X － 0. 029 5 0. 999 4 1. 00 ～ 40. 00
注:Y 轴为对照品与内标物的峰面积比值，X 轴为对照品溶液的
浓度(mg·L － 1)。
色谱乙腈定容至 3 mL，电动进样 15 s，记录其毛细管
电泳谱图，并根据回归方程计算出其浓度，连续测定
6 次，结果 RSD 分别为 1. 02%，0. 98%，1. 85%，
1. 04%，1. 76%。
2. 5 稳定性试验 精密吸取供试液(4)0. 5 mL，再
加入内标液 10 μL，然后用色谱乙腈定容至 3 mL，在
上述测定条件下 48 h 内每隔一定时间测定 1 次，进
行稳定性考察。在 48 h 内测定 6 次，数据稳定。5
种黄酮对照 品 的 RSD 分 别 为 1. 13%，0. 87%，
1. 46%，1. 22%，1. 80%。
2. 6 回收率试验 取已知含量的样品(4)6 份，每
份为 0. 2 g，精密称定。分别加入对照品适量，依照
上述方法提取并测定，计算回收率。结果见表 3。
2. 7 样品含量测定 分别吸取不同样品供试液
0. 5 mL，再加入内标液 10 μL，然后用色谱乙腈定容
至 3 mL，在选定的操作条件下进行测定，计算含量。
见表 4。
表 3 5 种黄酮成分加样回收率试验(n = 6)
对照品
样品中含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
RSD /%
1 0． 271 3 0． 60 0． 865 8 99． 08 1． 60
0． 269 7 0． 60 0． 885 5 102． 4
0． 261 7 0． 30 0． 559 5 99． 27
0． 272 9 0． 30 0． 568 8 98． 63
0． 267 8 0． 15 0． 414 6 97． 87
0． 271 9 0． 15 0． 419 8 98． 60
2 1． 326 8 1． 20 2． 487 9 96． 76 1． 03
1． 383 8 1． 20 2． 546 5 96． 89
1． 357 7 0． 60 1． 344 4 97． 78
1． 378 3 0． 60 1． 970 8 98． 75
1． 375 5 0． 30 1． 672 3 98． 93
1． 366 7 0． 30 1． 665 9 99． 73
3 0． 647 4 1． 20 1． 779 8 96． 03 1． 57
0． 675 2 1． 20 1． 851 1 97． 99
0． 662 4 0． 60 1． 261 3 99． 82
0． 672 5 0． 60 1． 269 9 99． 57
0． 671 1 0． 30 0． 968 4 99． 10
0． 667 1 0． 30 0． 960 2 97． 70
4 0． 197 7 0． 30 0． 491 2 97． 83 0． 94
0． 206 2 0． 30 0． 498 3 97． 37
0． 202 3 0． 15 0． 349 6 98． 20
0． 205 4 0． 15 0． 350 1 96． 47
0． 205 0 0． 09 0． 293 8 98． 67
0． 203 8 0． 09 0． 292 9 99． 00
5 0． 322 0 0． 60 0． 899 7 96． 28 1． 20
0． 335 9 0． 60 0． 928 3 98． 73
0． 329 5 0． 30 0． 621 2 97． 23
0． 334 5 0． 30 0． 632 2 99． 23
0． 333 9 0． 15 0． 480 7 97． 87
0． 331 9 0． 15 0． 481 3 99． 60
表 4 样品中 5 种黄酮化合物的测定(n = 5) mg·g － 1
No． 对照品 1 对照品 2 对照品 3 对照品 4 对照品 5
1 0. 501 2. 404 2. 156 0. 453 0. 784
2 0. 979 2. 822 2. 247 0. 572 0. 575
3 1. 072 5. 271 3. 176 0. 457 0. 814
4 1. 354 6. 864 3. 349 1. 023 1. 666
5 0. 664 2. 724 1. 987 0. 380 0. 542
6 0. 630 2. 737 0. 897 0. 727 0. 574
7 0. 548 2. 508 1. 942 0. 458 0. 547
8 0. 595 2. 473 0. 895 0. 417 0. 557
9 1. 638 8. 766 3. 583 0. 983 0. 872
10 0. 800 4. 074 1. 761 0. 812 0. 832
3 讨论
在选择提取溶剂时，考察了三氯甲烷、三氯甲
烷-甲醇(1∶ 1)和甲醇等溶剂对 5 种黄酮类化合物的
提取率。实验结果表明，三氯甲烷的提取率不仅与
甲醇和三氯甲烷-甲醇(1 ∶ 1)的接近，而且预处理后
的电泳图清晰，分离度较好。预处理中先用 20%的
·56·
王青虎，等:高效毛细管电泳法同时测定小白蒿 5 种黄酮类化合物的含量
乙醇 50 mL 洗脱，5 种黄酮类化合物均没有洗脱下
来，然后用无水乙醇 100 mL 洗脱，5 种黄酮类化合
物均完全洗脱下来并且与其他杂质分离。
实验所用的对照品 5，7，3-三羟基-4-甲氧基黄
酮、5，3-二羟基-6，7，4-三甲氧基黄酮、槲皮素、5，7，
3-三羟基-6，4-二甲氧基黄酮和木犀草素，经药材
95%乙醇提取，三氯甲烷层采用硅胶、Sephadex LH-
20 等柱色谱法进行分离，NMR 等波谱学方法结构鉴
定，并用高效毛细管电泳仪归一化法分别测定其含
量均 ＞ 99. 5%。
加大毛细管柱两端的电泳电压能够缩短分析时
间，但当电压增加到一定程度时黄酮类化合物的分
离度下降，电泳电压加大后，还会使仪器的噪音明显
增大。综合考虑，实验采用 18 kV 电泳电压较好，既
保持了仪器的低噪音，又能使黄酮类化合物有较好
的分离度。
毛细管柱温度较低时，溶液黏度增大，淌度降
低，峰形展宽，迁移时间延长;温度较高时，溶液黏度
减小，淌度增加，迁移时间缩短，分离度下降。当 25
℃时，5 种对照品和内标物的峰形和分离度较好，分
析完一个样品所需时间(20 min)也较为适中，所以
毛细管电泳的温度确定在 25 ℃。
选用几种缓冲体系进行实验，结果表明硼砂缓
冲体系对 5 种黄酮类化合物分离度较好。分别用
0. 01，0. 02，0. 025，0. 03，0. 035 mol·L － 1 5 种不同浓
度的硼砂溶液考察浓度对黄酮类化合物分离度的影
响，硼砂浓度为 0. 02 mol·L － 1以下时，5 种黄酮类化
合物不能很好地分离;浓度为 0. 03 mol·L － 1时，分离
度增加，迁移时间延长。选用 0. 025 mol·L － 1时，迁
移时间适中，分离度和重复性较好。
在缓冲溶液中加入有机添加剂不仅能使不溶于
水的被测物质溶解度增大，而且还能有效地改善被
测组分的分离度。5 种黄酮类化合物的水溶性差，
易溶于乙腈。所以在 0. 025 mol·L － 1硼砂溶液分别
用 10%，20%，30%，40%，50%的乙腈配制，考察
其分离情况。结果表明，30%乙腈配制的硼砂溶液
对 5 种黄酮类化合物既保证了较好的分离效果，又
保证了较快的分析速度。
采集失时，有“药效难保”之忧。《新修本草》
说:“乖于采摘，乃物是而实非”。叶、全草类药材通
常在花蕾将开或花朵盛开、枝叶茂盛时采收，因此时
植物已完全生长，生命力最旺盛。据文献报道小白
蒿花期为 7 ～ 8 月，故我们采集时间从 5 月到 8 月
末，共采集了 7 个样品。根据表 4 可知，不同采集时
间样品中黄酮化合物的含量有一定的规律性的变
化。5，7，3-三羟基-4-甲氧基黄酮、5，3-二羟基-6，
7，4-二甲氧基黄酮、槲皮素从 5 月中旬开始逐渐增
高，至 7 月中旬达到最高点，然后又呈下降趋势，总
体分析 7 月 12 日采集样品中 5 种黄酮类化合物的
相对含量均高于其他采集点。另外，花中黄酮类化
合物的量高于叶和茎。综合分析小白蒿的采集时间
应为 6 月中旬到 7 月末。
［参考文献］
［1］ 白清云 ．中国医学百科全书［M］． 赤峰:内蒙古科学技
术出版社，1986:322.
［2］ 李荣，李俊 ． 黄酮类化合物药理活性及其构效关系研
究进展［J］． 安徽医药，2005，9 (7) :481.
［3］ 华辉，郭勇 ． 黄酮类化合物药理研究进展［J］． 广东药
学，1999，9 (4) :9.
［4］ 曹纬国，刘志勤，邵云，等 ． 黄酮类化合物药理研究进
展［J］． 西北植物学报，2003，23 (12) :2241.
［5］ 吉格木德丹，金扎木苏 ． 通瓦嘎吉德［M］． 呼和浩特:
内蒙古人民出版社出版，1999:219.
［6］ 金巴 ． 临症医药鉴［M］． 呼和浩特:内蒙古人民出版
社，1977:899.
［责任编辑 蔡仲德］
·66·
第 17 卷第 16 期
2011 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 16
Aug．，2011