全 文 ：高效液相色谱法测定旋复花中槲皮素的含量
杨玲娟 焦成瑾 葛 勐 雍宝霞
(天水师范学院生命科学与化学学院 ,天水 741001)
摘要 建立了高效液相色谱法测定旋复花中槲皮素含量的方法。该方法采用 ZORBAXeclipseXDBC8色谱柱
(150 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为甲醇 -磷酸(0.2%),体积比为 65∶35, 检测波长为 370nm。实验结果表明 ,槲
皮素在 5.0 ～ 100.0 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999), 测定结果的相对标准偏差为 1.2%(n=6),
平均加标回收率为 97.1%。该法可用于测定旋复花中槲皮素的含量。
关键词 高效液相色谱法 槲皮素 旋复花
旋复花为菊科旋复花属的一种多年生草本植
物 ,其性苦 、辛 、咸 、微温 ,具有降肺胃之气 、消痰止
咳 、清热解毒 、止血等作用。据文献报道 [ 1] ,旋复花
中含有旋复花素 、旋复花内酯 ,同时含有槲皮素 、异
槲皮素 、咖啡酸 、绿原酸 、菊糖及蒲公英甾醇等多种
甾醇类物质 。研究表明 ,槲皮素具有抗癌 、防癌 、抗
血小板凝聚 、镇痛 、抗菌 、抗病毒 、抗衰老 、抗炎 、抗过
敏等多种生物活性 ,且对人体无毒 [ 2] ;同时槲皮素
具有潜在的抗抑郁作用和增强记忆的功能 [ 3] ,因此
槲皮素具有很高的药用价值。随着中药现代化的发
展 ,含有槲皮素的旋复花在中医方面的应用也会越
来越广泛 ,具有很高的药用价值 。
据文献报道 ,已有人测定旋复花中旋复花内酯
的含量 [ 4] ,但对于旋复花中槲皮素含量的测定仍未
见报道 。笔者采用高效液相色谱法对旋复花药材中
槲皮素含量进行测定研究 ,为综合利用与开发旋复
花的药用价值及质量监控提供重要的理论依据和实
验参考 。
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪:Aglient1100 LC型 ,配 VWD
紫外检测器 ,美国安捷伦公司;
数控超声波清洗器:KQ-500DE型 ,昆山市超
声仪器有限公司;
槲皮素对照品:中国药品生物制品鉴定所;
旋复花:市售;
磷酸(0.2%)、盐酸(2.3%):分析纯;
甲醇:色谱纯;
实验用水为重蒸去离子水。
1.2 色谱条件
色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C8色谱柱(150
mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.2%磷酸 ,体
积比为 65∶35, 流速为 1.0 mL/min;检测波长:370
nm;柱温:40℃;进样量:20μL。
1.3 对照品溶液的配制
准确称取经五氧化二磷干燥至恒重的槲皮素对
照品 25.0 mg,置于 50mL容量瓶中 ,用甲醇溶解并
定容至刻度 ,制成 0.5mg/mL的槲皮素储备液。准
确移取 3.00mL该溶液置于 50 mL容量瓶中 ,定容
至刻度配制成 30 μg/mL的对照品溶液。取 20 μL
进样 ,槲皮素对照品色谱图见图 1。
图 1 槲皮素对照品色谱图
1.4 样品溶液的制备
准确称取经 60℃干燥 2 h后研磨并过 80 μm
(180目)标准筛的旋复花样品 0.500 0 g,置于 50
mL容量瓶中 ,准确加入甲醇 20.00 mL、盐酸 20.00
mL,于温度 70℃、功率 500 W、频率 40 kHz条件下
超声萃取 60 min,取出冷却至室温 ,用甲醇定容至刻
度 ,摇匀 ,用 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取滤液 ,在 1.2
色谱条件下进样 ,样品色谱图见图 2。
2 结果与讨论
2.1 测定波长的选择
将槲皮素对照品溶液在 200 ～ 500 nm范围内进
行波长扫描 ,光谱显示在 370 nm处有最大吸收峰 ,
故测定波长选择 370 nm。
2.2 流动相的选择
考察了不同比例的甲醇 -磷酸(0.2%)流动
收稿日期:2009-11-02
65杨玲娟 ,等:高效液相色谱法测定旋复花中槲皮素的含量
图 2 样品色谱图
相对分离效果的影响 ,当甲醇与磷酸(0.2%)的体
积比为 65∶35、流速为 1.0 mL/min时 ,样品中槲皮
素分离良好 ,且峰形对称。
2.3 柱温的选择
柱温对样品保留时间影响很大 ,同时对于分离
效果也有影响 。柱温过低 ,保留时间过长;柱温过
高 ,对色谱柱影响很大 ,出峰过于密集 ,不能达到良
好的分离。实验结果表明 ,柱温选择 40℃时 ,样品
中槲皮素的峰形较好 ,且与其它共存组分的分离效
果好。
2.4 标准曲线的绘制
分别准确移取槲皮素标准储备液 0.50、1.00、
2.00、3.00、4.00、5.00、10.00 mL置于 7个 50 mL
容量瓶中 ,然后加入甲醇稀释定容至刻度 ,摇匀 ,配
制成系列槲皮素标准工作溶液 ,经 0.45 μm微孔膜
过滤 ,移取 20 μL溶液在 1.2色谱条件下进样测定 ,
记录色谱图 。以槲皮素色谱峰面积 Y对进样浓度 X
进行线性回归 , 得回归方程为 Y=64.152X+
79.332,线性相关系数 r=0.999 9,线性范围为 5.0
～ 100.0 μg/mL。
2.5 精密度试验
准确移取槲皮素对照品溶液 20 μL,在相同色
谱条件下重复进样 6次 ,峰面积分别为 1 996、1 935、
1 968、1 950、1 948、 1 986,经计算峰面积平均值为
1 964 ,相对标准偏差为 1.2%。由此可见 ,方法的精
密度良好。
2.6 重复性试验
准确称取 0.500 0g旋复花样品 5份 ,按样品制
备方法制成样品溶液 ,各取 20 μL进样 , 5次进样的
峰面积分别为 809、 808、 803、 804、 798, 平均值为
804,相对标准偏差为 0.5%(n=5),由此可见该方
法重复性良好 。
2.7 回收试验
采用加标回收法 ,在已知含量的旋复花样品溶
液中加入适量的槲皮素对照品溶液进行测定 ,测定
结果见表 1。由表 1可见 , 方法的平均回收率为
97.1%,说明该方法的准确度较高。
表 1 回收试验结果
本底值 /
mg· mL-1
加标量 /
mg·mL-1
测定值 /
mg· mL-1
回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
0.0355
0.0175
0.0350
0.0700
0.0526
0.0698
0.1025
97.7
98.0
95.7
97.1% 1.8
2.8 样品测定
准确称取 0.500 0g旋复花样品 1份 ,按 1.4方
法制备样品溶液 ,在 1.2色谱条件下进样测定峰面
积 ,根据回归方程计算得槲皮素含量为 3.42mg/g。
3 结语
采用高效液相色谱法测定了旋复花中槲皮素的
含量 ,该方法简便 、准确 、快速 ,为综合利用与开发旋
复花提供了重要的实验依据 ,可作为旋复花质量控
制的有效手段 。
参 考 文 献
[ 1] 钱名坤 ,陈泽乃 ,秦国伟 ,等.线叶旋复花化学成分的研究 [ J].
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[ 2] 赵维中 ,戴俐明 ,方明 ,等.槲皮素在兔体内的药代动力学 [ J].
中国药理学通报 , 1992.8(6):452-455.
[ 3] 陈箐筠 ,干信.槐米中槲皮素的提取及其对中枢神经系统作用
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[ 4] 许俊博 ,吴怡 ,徐赞美 ,等.用RP-HPLC测定旋复花中旋复花
内酯的含量 [ M] .中国药学杂志 , 2003, 38(1):57-59.
DETERMINATIONOFQUERCETINININULABYHPLC
YangLingjuan, JiaoChengjin, GeMeng, YongBaoxia
(CologeofLifeScienceandChemistry, TianshuiNormalUniversity, Tianshui 741001, China)
ABSTRACT AmethodfordeterminingquercetinininulabyHPLCwasestablished.TheanalysiswasperformedonZORBAX
eclipseXDBC8 column(150mm×4.6 mm, 5μm)atthedetectionwavelengthof370nm.Themobilephasewasconsistedofmetha-
nol-0.2% phosphoricacid(volumeratiowas65∶35)withaflowrateof1.0 mL/min.Thecalibrationcurvewaslinearintherange
of5.0-100.0 μg/mLofquercetin(r=0.9999).TheRSDofdeterminationresultswas1.2% (n=6), andtheaveragerecovery
was97.1%.Themethodissuitablefordeterminationofquercetinininula.
KEYWORDS HPLC, quercetin, inula
66 化学分析计量 2010年 ,第 19卷 ,第 1期