全 文 ：食用菌学报２０１６．２３（２）：４４～４８
收稿日期：２０１６－０３－１７原稿；２０１６－０３－２５修改稿
基金项目：云南省应用基础研究计划项目（２０１３ＦＺ１６８）、云南省科研院所技术开发专项（Ｎｏ．２０１５ＤＣ０１４）、中国科
学院“西部之光”人才培养项目（Ｎｏ．３２６）、国家自然科学基金项目（３１５６０００８）和云南省热带作物科技创
新体系建设专项（ＲＦ２０１５－５）资助
作者简介：高　锋 （１９８６－），男，硕士，助理研究员，主要研究方向为食用菌生理学和食用菌栽培学。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｃｈｕｎｘｉａ７０８４＠１６３．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．１６４８８／ｊ．ｃｎｋｉ．１００５－９８７３．２０１６．０２．００９
继代次数对暗褐网柄牛肝菌菌种活性的影响
高　锋１，许欣景１，何明霞１，曹　旸１，刘　静１，王文兵１，方艺伟１，王　云１，２，张春霞１＊
（１云南省热带作物科学研究所，云南景洪６６６１００；２新西兰皇家植物和食品研究所，新西兰）
摘　要：为了研究继代次数对暗褐网柄牛肝菌（Ｐｈｌｅｂｏｐｕｓ　ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ）菌种活性的影响，选取生产上优良性
状发生退化的栽培菌株１１０２３为研究对象，监测其及继代２次，５次，８次后菌种的各项生理生化特征以及
出菇性状。结果显示，随着继代次数增加，菌丝长势减弱，菌落生长速率降低，菌落颜色变浅，菌落边缘整齐
度降低；淀粉酶分泌能力减弱；出菇率和单菇重均减小，抗杂能力减弱。推断菌株１１０２３继代次数不宜超过
２代。
关键词：暗褐网柄牛肝菌；继代次数；菌丝生长；子实体生长；淀粉酶
暗褐网柄牛肝菌（Ｐｈｌｅｂｏｐｕｓ　ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ）属于牛肝菌目（Ｂｏｌｅｔａｌｅｓ）小牛肝菌科 （Ｂｏｌｅｔａｃｅａｅ）网
柄牛肝菌属 （Ｐｈｌｅｂｏｐｕｓ），是云南省西双版纳地区每年雨季市场上常见的食用菌［１－２］。暗褐网柄牛肝菌
是目前唯一能实现菇房周年栽培的牛肝菌目食用菌。目前主要利用组织分离法从野生或栽培子实体
上获得母种，逐一栽培测产来筛选优良菌株［１］。当前栽培模式下，优良菌株在继代一定次数后就会发
生衰退。为了防止误用衰退菌株造成不可挽回的经济损失，在投入生产使用前有效辨别菌种活力显得
极其重要。
有研究表明菌丝生长速率、胞外酶活性、酯酶同工酶、可溶性蛋白和菌落形态等生理生化特征与食
用菌的抗杂能力和产量性状有相关性［３－１０］。淀粉酶是人工栽培条件下暗褐网柄牛肝菌降解大分子碳源
基质最主要的胞外酶（数据另文发表），因此淀粉酶活性能较好地表征菌种活力。在生产中发现菌株
１１０２３第一次继代菌种表现出较优良的农艺性状：单菇重１００ｇ以上，出菇率高，出菇整齐，污染率低；
但随继代次数增加，出菇率下降，出菇不整齐等退化现象明显。因此笔者以菌株１１０２３为主要研究对
象，以目前主要栽培的优良菌株１３０１３为对照菌株，分析不同继代次数下菌丝生长速率和长势、淀粉酶
活性、可溶性蛋白和酯酶同工酶以及出菇性状的变化规律，以期找出能表征菌种随继代次数增加活性
发生衰退的生理生化特征，为后续的菌种保藏方法创新以及菌种活力鉴定等菌种管理工作提供参考。
１　材料与方法
１．１供试菌株
　　暗褐网柄牛肝菌（Ｐ．ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ）继代菌株１１０２３－２、１１０２３－５和１１０２３－８分别为１１０２３菌株的２
次、５次和８次继代菌株；１１０２３菌株、继代菌株及１３０１３菌株均保藏于云南省热带作物科学研究所植
物保护与微生物利用研究中心菌种保藏室。
１．２主要试剂与仪器设备
　　葡萄糖、酵母膏、刚果红、碘（Ｉ２）、碘化钾（ＫＩ）、乙酸－１－萘酯、乙酸－２－萘酯、固蓝 ＲＲ盐、ＫＨ２ＰＯ４和
ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ均为分析纯，均购自生工生物工程（上海）股份有限公司。
第２期 高　锋，等：继代次数对暗褐网柄牛肝菌菌种活性的影响
Ｍ１液体培养基：２００．０ｇ去皮马铃薯（煮汁），２０．０ｇ葡萄糖，２．０ｇ酵母膏，１．０ｇ　ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ，
１．０ｇ　ＫＨ２ＰＯ４，１０００ｍＬ水。
Ｍ１固体培养基：Ｍ１液体培养基另加１５ｇ琼脂粉［１１－１３］。
Ｍ１淀粉固体培养基：Ｍ１固体培养基中葡萄糖减半，添加２ｇ可溶性淀粉。
Ｍ１淀粉刚果红固体培养基：Ｍ１淀粉固体培养基，添加刚果红终浓度为０．２％（ｗ／ｖ）。
培养料：１０ｋｇ橡胶树木屑，５ｋｇ稻粒 ，１５．０ｇ　ＭｇＳＯ４，５．０ｇ　ＫＨ２ＰＯ４，含水量６０．０％，ｐＨ
４－６［１］。
ＢＩＣ－２５０型人工气候箱，上海博迅实业有限公司；ＤＹＣＺ－２５Ｅ型Ｐ４垂直电泳仪，北京市六一仪器
厂；ＳＫ－１００Ｂ恒温摇床，上海苏坤实业有限公司。
１．３菌丝生长实验
　　供试菌株在Ｍ１固体培养基上，３０℃避光活化培养２０ｄ。取生长旺盛的菌落前缘菌丝（直径１ｃｍ，
简称活化菌饼）１块接种于 Ｍ１固体培养基平板中央（直径９ｃｍ平皿，３５ｍＬ培养基），３０℃避光培养。
分别于第３，６，９，１２，１５和１８天利用十字交叉法测量菌落直径。利用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ　Ｅｘｃｅｌ中的ＳＬＯＰＥ
函数求出菌落生长速率。菌株的菌落生长速率以５个平行实验的算数平均值±标准差表示。并于第
１８天观察菌丝长势、菌落边缘整齐度及菌丝颜色［１１］。
ｖ＝１／２×ＳＬＯＰＥ（｛菌落直径集合｝，｛对应测量时间集合｝）（其中菌落直径、测量时间和生长速率
单位分别为ｍｍ、ｄ和ｍｍ／ｄ）
１．４淀粉变色圈实验
１．４．１刚果红法
　　供试菌株的活化菌饼接种于Ｍ１淀粉刚果红固体培养基平板（直径９ｃｍ，培养基３５ｍＬ）中央，１个
菌饼接１个培养皿，３０℃避光培养，第１５天用十字交叉法测量菌落直径和变色圈直径。数据以５个重
复试验的平均值±标准差表示。
１．４．２卢戈氏碘液法
　　供试菌株活化菌饼１块接种于Ｍ１淀粉固体培养基平板（直径９ｃｍ，培养基３５ｍＬ）中央，１个菌饼
接１个培养皿，３０℃避光培养。第１５天用十字交叉法测量菌落直径，然后用喷壶将卢戈氏碘液染色
（配制方法：取１０ｇ碘化钾溶于８５ｍＬ蒸馏水中，再加５ｇ碘并用磁力搅拌器搅拌溶解，过滤去除少量
未溶解的碘颗粒，碘的总浓度为１５０ｍｇ／ｍＬ）均匀地喷洒于培养基表面，测量未被染成蓝色区域的直
径。数据以５个重复的平均值±标准差表示。
１．５可溶性蛋白及酯酶同工酶电泳实验
１．５．１电泳样品制备
　　４个活化菌饼接种于装有２００ｍＬ　Ｍ１液体培养基的５００ｍＬ三角瓶，１５０ｒ／ｍｉｎ，３０℃避光培养
７ｄ，无菌纱布过滤，蒸馏水清洗３遍，用纱布挤去水分，液氮研磨至粉碎，分别称取１００ｍｇ用１ｍＬ预
冷的ｐＨ　７．２ＰＢＳ缓冲液（用于可溶性蛋白电泳）或１ｍＬ　ｐＨ　５．６磷酸盐缓冲液（用于酯酶同工酶分析）
振荡混匀，１３８００　ｇ离心１０ｍｉｎ，上清液即为蛋白样品。用改良型Ｂｒａｄｆｏｒｄ法蛋白浓度测定试剂盒对
蛋白样品进行定量，通过稀释使不同样品的蛋白浓度一致。
１．５．２电泳
　　使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）进行可溶性蛋白分析［１４］。使用非变性聚丙烯酰胺凝
胶电泳（Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥ）进行酯酶同工酶分析，分离胶浓度为１０％，具体方法参照郭晓霞硕士论文［１５］。
根据蛋白 Ｍａｒｋｅｒ绘制相对迁移率和蛋白质相对分子质量标准曲线，结合所得电泳图谱，计算差异蛋白
条带的相对迁移率（Ｒｆ）以及相对分子质量。
１．６栽培试验
　　４个活化菌种的菌饼接种于３００ｍＬ　Ｍ１液体培养基，１５０ｒ／ｍｉｎ，３０℃避光振荡培养７ｄ，得液体菌
种。按照常规方法接种、发菌培养和出菇管理［１］。每个菌株培养９０袋。统计污染情况、出菇率和单菇
重。３个重复。
５４
食　用　菌　学　报 第２３卷
１．７数据分析
　　使用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ　Ｅｘｃｅｌ　２０１３和ＳＰＳＳ　２０．０对试验数据进行统计分析。
２　结果与分析
２．１菌丝生长和淀粉变色圈实验结果
　　菌丝生长实验结果如表１所示，随着继代次数增加，菌丝生长速率下降，长势减弱，颜色变浅，菌落
边缘渐不规则。图１可以看到明显的变色圈，表明暗褐网柄牛肝菌分泌了淀粉酶。与菌株１１０２３相比
变色圈直径与菌落直径之比，继代２次的菌株１１０２３－２相当，而继代５次和８次的菌株１１０２３－５和
１１０２３－８显著下降（表１）。说明继代菌株１１０２３－５和１１０２３－８的菌落分泌淀粉酶能力降低，淀粉酶分泌
能力发生了退化。
表１　菌丝生长和淀粉变色圈实验结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　ａｍｙｌａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐ．ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
生长速率
Ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ
（ｍｍ／ｄ）
菌丝长势
Ｍｙｃｅｌｉａｌ
ｇｒｏｗｔｈ　ｖｉｇｏｒ１）
菌落边缘整齐度
Ｃｏｌｏｎｙ　ｅｄｇｅ
菌落颜色
Ｃｏｌｏｎｙ　ｃｏｌｏｒ
变色圈直径／菌落直径
Ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｆｕｎｇａｌ　ｃｏｌｏｎｙ：
ｃｏｌｏｒｅｄ　ｚｏｎｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒｓ（ｍｍ）
ＣＲ－ＳＴ２） ＬＩ－ＳＴ３）
１１０２３－２　 １．７±０．３ｂ ＋＋
较整齐
Ｇｅｎｅｒａｌｙ　ｒｅｇｕｌａｒ
褐色 Ｂｒｏｗｎ　 ２．１±０．３ａ １．３±０．１ａ
１１０２３－５　 １．６±０．３ｂ ＋ 不规则Ｉｒｒｅｇｕｌａｒ 黄褐色 Ｔａｗｎｙ　 １．９±０．２ｂ １．２±０．２ｂ
１１０２３－８　 １．５±０．４ｃ ＋ 不规则Ｉｒｒｅｇｕｌａｒ 灰白色 Ｇｒｅｙ　 １．５±０．２ｃ １．２±０．２ｂ
１１０２３　 １．８±０．２ａ ＋＋＋ 整齐Ｒｅｇｕｌａｒ 暗褐色 Ｄａｒｋ　ｂｒｏｗｎ　 ２．１±０．２ａ １．３±０．１ａ
１３０１３　 １．８±０．１ａ ＋＋＋ 整齐 Ｒｅｇｕｌａｒ 暗褐色 Ｄａｒｋ　ｂｒｏｗｎ　 １．４±０．２ｃ １．２±０．１ｂ
１）＋ ＋ ＋ 长势旺盛；＋ ＋长势较好；＋长势一般；２）刚果红法；３）卢戈氏碘液法；不同小写字母表示处理间的差异达到显著水平
（Ｐ＜０．０５）
１）＋＋＋ ：ｖｉｇｏｒｏｕｓ　ｇｒｏｗｔｈ；＋＋：ｓｔｒｏｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ；＋：ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　ｇｒｏｗｔｈ；２）Ｃｏｎｇｏ　ｒｅｄ－ｓｔａｒｃｈ　ｔｅｓｔ；３）Ｌｕｇｏｌｓ　ｉｏｄｉｎｅ－ｓｔａｒｃｈ　ｔｅｓｔ；
Ｖａｌｕｅｓ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ｍｅａｎｓ±ＳＤ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｔｒａｉｎｓ
ａｔ　Ｐ＜０．０５
　双箭头示变色圈，短线示菌落
Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ　ｌｉｎｅｓ－ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ｃｏｌｏｒｅｄ　ｚｏｎｅｓ；ｖｅｒｔｉｃａｌ　ｌｉｎｅｓ－ｄｉａｍｅｔｅｒ
ｏｆ　ｆｕｎｇａｌ　ｃｏｌｏｎｙ
图１　菌株１１０２３－８刚果红法变色圈（左）
和卢戈氏碘液法变色圈（右）示例
Ｆｉｇ．１　Ａｍｙｌａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐ．ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　１１０２３－８ｕｓｉｎｇ
Ｃｏｎｇｏ　ｒｅｄ－ｓｔａｒｃｈ（ｌｅｆｔ）ａｎｄ　Ｌｕｇｏｌｓ　ｉｏｄｉｎｅ－ｓｔａｒｃｈ　ｔｅｓｔｓ（ｒｉｇｈｔ）
２．２可溶性蛋白和酯酶同工酶电泳实验
结果
　　获得可溶性蛋白和酯酶同工酶标准曲
线分别为Ｍ＝－４４．５４０ｌｎ（Ｒｆ）＋１４．１２４（Ｒ２
＝０．９９８）和 Ｍ＝－６９．１６４ｌｎ（Ｒｆ）＋１３．９８０
（Ｒ２＝０．９９８，Ｍ 相对分子质量，Ｒｆ迁移
率）。菌株１１０２３－２、１１０２３－５及１１０２３－８可
溶性蛋白电泳图谱条带数与菌株１１０２３没
有差异；而酯酶同工酶条带（Ｒｆ＝０．８０，相
对分子量为３７０００）只在菌株 １１０２３－２、
１１０２３－５及１１０２３－８中出现，并且同工酶条
带随继代次数增加颜色变深。
２．３出菇试验结果
　　栽培出菇实验结果如表２所示，与
１１０２３、１３０１３相比，菌株１１０２３－２，１１０２３－５，１１０２３－８单菇重低，标准差偏大，菇型不一致，出菇不整齐，
抗杂能力弱。鉴于继代一次产生的菌种数量有限，笔者认为菌株１１０２３继代次数不宜超过２代。
６４
第２期 高　锋，等：继代次数对暗褐网柄牛肝菌菌种活性的影响
表２　出菇试验结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｄａｔａ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
第一批出菇 （移入出菇房第７、８天采收）
Ｆｉｒｓｔ　ｆｌｕｓｈ（ｈａｒｖｅｓｔｅｄ　７－８ｄａｆｔｅｒ　ｆｕｌ
　　　 　　　ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）　　　 　　　
第二批出菇（移入出菇房第１４天采收）
Ｓｅｃｏｎｄ　ｆｌｕｓｈ（ｈａｒｖｅｓｔｅｄ　１４ｄａｆｔｅｒ　ｆｕｌ
　　　　 　　ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）　　 　　　　
出菇率
Ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
（％）１）
平均单菇重（ｇ）
Ｆｒｅｓｈ　ｗｅｉｇｈｔ　ｐｅｒ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
出菇率
Ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
（％）１）
平均单菇重（ｇ）
Ｆｒｅｓｈ　ｗｅｉｇｈｔ　ｐｅｒ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）２）
１１０２３－２　 ３３．４　 ９６．７±１６．８ｂ ２２．２　 ８３．２±３５．１ａ ２３ｃ
１１０２３－５　 ３３．４　 ７６．５±１７．７ｃ ３３．４　 ４２．２±３１．７ｂ ３３ｂ
１１０２３－８　 ３３．４　 ５８．０±１３．６ｄ ３３．４　 ３９．２±３３．１ｂ ４４ａ
１１０２３　 ７７．８　 １１０．０±５．３ａ 　０　 　　　０　　　 ＜１０ｄ
１３０１３　 ８８．９　 １００．０±６．５ｂ 　０　 　　　０　　　 ＜１０ｄ
１）出菇率＝出菇菌袋／考察菌袋×１００％；２）污染率＝发生污染的菌袋数／考察菌袋数×１００％；不同小写字母表示处理间的差异达到显
著水平（Ｐ＜０．０５）
１）Ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｒａｔｅ＝Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｌｏｇｓ　ｗｉｔｈ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ／Ｔｏｔａｌ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｌｏｇｓ×１００％；２）Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ＝Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ｌｏｇｓ／Ｔｏｔａｌ
ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｏｇｓ×１００％；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ ＜０．０５）
３　讨论
　　本试验发现，暗褐网柄牛肝菌１１０２３菌种继代５次数后，出菇性状发生了显著的退化，同时菌丝长
速、菌丝长势、菌丝颜色、菌落边缘整齐度、胞外淀粉酶活性及酯酶同工酶各项生理生化特征也发生了
不同程度的变化。李晓等人的研究发现，随着继代培养次数的增加，黑木耳（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａ）菌
丝生长速度、接种点附近菌落的密度及洁白度、菌丝分枝能力以及对木屑培养料分解能力均呈逐渐下
降趋势 ［７］。严培兰等发现黑木耳（Ａ．ａｕｒｉｃｕｌａ）不同的胞外酶活性与抗霉性有一定的相关性，而不同
菌株的抗霉性又与产量呈正比［５］。沈爱喜等发现菌种转管次数超过一定次数蛹虫草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ
ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）的出草性能会发生退化［１６］。对白僵菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）研究发现，随着继代次数增多，菌
种菌丝徒长，产孢率下降、生物防治效果降低［１７］，部分酯酶同工酶的酶活性降低［４］。对糙皮侧耳
（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）的研究发现，菌种退化后可溶性蛋白含量降低［８］。因此，笔者认为上述生理及生
化特征与菌株活力密切相关，可作为参考指标用于初步评估暗褐网柄牛肝菌菌株因继代次数增加引起
的活性退化程度。
在糙皮侧耳和刺芹侧耳（Ｐ．ｅｒｙｎｇｉｉ）的研究中发现不同培养时间和不同培养基条件及不同组织部
位，酯酶同工酶酶谱的酶带呈现多态性［１８］。因此，基于生理生化特征的菌种活性评估方案的准确性一
定程度上取决于培养基、培养条件、取样时间和取样部位的一致性。有人发现凤尾菇（Ｐ．ｓａｊｏｒ－ｃａｊｕ ）
菌种转管次数达３０代时菌丝长势、形成子实体所需天数和产菇量均无明显差异［１９］。笔者发现不同地
域、不同“宿主”植物来源的暗褐网柄牛肝菌菌株之间生理生化特征存在较大的差异（数据另文发表）。
在生产中发现，不同菌株菌种所能继代的次数也不尽相同，如１３０１３菌株目前已继代４次，优良性状未
发生显著变化。因此，为了有效降低误用衰退菌种的风险，菌种保藏机构以及菌种生产企业在暗褐网
柄牛肝菌菌种出厂或者投入使用前，需要逐一评估可继代次数。
孟黎明等发现经常性的交替使用不同培养基有助于减缓菌种退化［６］。因此笔者正在尝试利用不
同培养基交替使用的方法对暗褐网柄牛肝菌进行培养，利用上述方法评估菌株可继代次数，以期找出
可增加菌种可继代次数、延长菌种使用寿命的培养基组合。
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Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｎ
Ｐｈｌｅｂｏｐｕｓ　ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ　Ｓｔｒａｉｎ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ＧＡＯ　Ｆｅｎｇ１，ＸＵ　Ｘｉｎｊｉｎｇ１，ＨＥ　Ｍｉｎｇｘｉａ１，ＣＡＯ　Ｙａｎｇ１，ＬＩＵ　Ｊｉｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｗｅｎｂｉｎｇ１，
ＦＡＮＧ　Ｙｉｗｅｉ　１，ＷＡＮＧ　Ｙｕｎ１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｘｉａ１＊
（１　Ｙｕｎｎａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｃｒｏｐｓ，Ｊｉｎｇｈｏｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６６６１００，Ｃｈｉｎａ；
２　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｐｌａｎｔ　＆Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｙｃｅｌｉａｌ　ａｎｄ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｐｈｌｅｂｏｐｕｓ　ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓ　１１０２３－２，１１０２３－５
ａｎｄ　１１０２３－８（ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃｕｌｔｉｖａｒ　１１０２３ａｆｔｅｒ　ｔｗｏ，ｆｉｖｅ　ａｎｄ　ｅｉｇｈｔ　ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｆｏｒ　２８－３０ｄａｙｓ　ａｔ　３０ ℃，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｏｎ　ａ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　２００ｇ　ｐｏｔａｔｏ，２０ｇ　ｇｌｕｃｏｓｅ，２．０ｇ　ｙｅａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ，１．０ｇ　ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ，
１．０ｇ　ＫＨ２ＰＯ４，１５ｇ　ａｇａｒ　ａｎｄ　１０００ｍＬ　ｄｄＨ２Ｏ）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　１１０２３ａｎｄ　１３０１２ａｓ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ．
Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅｓ　ａｎｄ　ｖｉｇｏｒ，ｌｉｇｈｔｅｒ　ｃｏｌｏｒｅｄ
ｍｙｃｅｌｉａ，ｍｏｒｅ　ｉｒｒｅｇｕｌａｒ－ｅｄｇｅｄ　ｆｕｎｇａｌ　ｃｏｌｏｎｉｅｓ，ａｎｄ　ｓｍａｌｅｒ　ｆｕｎｇａｌ　ｃｏｌｏｎｙ：ｃｏｌｏｒｅｄ　ｚｏｎｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｒａｔｉｏｓ　ｉｎ
Ｃｏｎｇｏ　ｒｅｄ　ａｎｄ　Ｌｕｇｏｌｓ　ｉｏｄｉｎｅ　ｓｔａｒｃｈ　ｔｅｓｔｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｉｎ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔｓ　ｕｓｉｎｇ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｌｏｇｓ
ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　１０ｋｇ　ｒｕｂｂｅｒ　ｔｒｅｅ（Ｈｅｖｅａ　ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）ｓａｗｄｕｓｔ，５ｋｇ　ｒｉｃｅ　ｓｅｅｄｓ，１５．０ｇ　ＭｇＳＯ４，５．０ｇ　ＫＨ２ＰＯ４
ａｎｄ　６０％ ｗａｔｅｒ，ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｔｏ　ｐＨ　４－６，ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ｌｏｗｅｒ　ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ａｎｄ
ｓｉｎｇｌｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔｓ，ａｎｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｈｌｅｂｏｐｕｓ　ｐｏｒｔｅｎｔｏｓｕｓ；ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅ；ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ；ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｇｒｏｗｔｈ；ａｍｙｌａｓｅ
［本文编辑］　于荣利
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