全 文 ：文章编号:1001-4829(2009)06-1699-03
　　收稿日期:2009-04-22
　　基金项目:云南省应用基础研究项目(2008CD193)
作者简介:张春霞(1981-), 女 ,助理研究员 , 主要从事微生物
研究 , ＊为通讯作者。
暗褐网柄牛肝菌母种培养基的筛选
张春霞 ,何明霞 ,纪开萍＊ ,曹　旸 ,刘　静 ,王文兵
(云南省热带作物科学研究所 ,云南 景洪　666100)
摘　要:对暗褐网柄牛肝菌进行了母种培养基的筛选 ,从菌丝的长势 、长速和均一性 3方面研究了菌丝在 7种培养基上的生长状
况。结果表明 , M1是最适合暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的母种培养基。
关键词:暗褐网柄牛肝菌;母种培养基;筛选
中图分类号:S567.3+1　　　文献标识码:A
StudyonSelectionofMotherCultureMediaofPhlebopusportentosus
ZHANGChun-xia, HEMing-xia, JIKai-ping＊ , CAOYang, LIUJing, WANGWen-bing
(YunnanTropicalCropsResearchInstitute, YunnanJinghong666100, China)
Abstract:StudyontheselectionofmotherculturemediaofPhlebopusportentosuswasconducted.State, speedandevennessofthemycelium
growthwerestudiedonsevenkindsofmedia.TheresultshowedthatM1wasthemostsuitablemediaofmyceliumgrowthofPhlebopusporten-
tosus.
Keywords:Phlebopusportentosus;Motherculturemedia;Selection
　　暗褐网柄牛肝菌(Phlebopusportentosus)属于牛
肝菌目小牛肝菌科脉柄牛肝菌属 [ 1] 。分布于斯里
兰卡 、越南 、印度尼西亚 、泰国 、巴西 、墨西哥 、澳大利
亚 、新西兰等热带地区 ,国内广西 、海南 、云南都有分
布 [ 2 ～ 7] 。暗褐网柄牛肝菌富含蛋白质和钾 、钙 、镁 、
铁 、锌等多种人体所需的矿质元素 [ 8 ～ 9] 。在云南省
西双版纳 ,每年的雨季在农贸市场上常见的肝褐色
食用菌 ,味道鲜美 ,是当地消费者最喜爱的野生食用
菌之一 。本研究从最基本的营养条件着手 ,筛选出
最适合菌丝生长的母种培养基 ,为进一步开发利用
这一珍贵的食用菌资源奠定基础。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　供试菌种 　暗褐网柄牛肝菌菌种由云南省
热带作物科学研究所植物保护与微生物利用研究室
提供 ,菌株编号为 B-01-3-1。
1.1.2　母种培养基的配方　将暗褐网柄牛肝菌菌
种在初步筛选的培养基上扩大培养后 ,选用 7种暗
褐网柄牛肝菌母种培养基进行试验。各母种培养基
的组成见表 1。
1.2　方法
1.2.1　培养基的制备　将配制的培养基分装于三
角瓶中 ,用常规方法灭菌 ,备用。
1.2.2　接种与培养　菌丝生长状况及生长速度用
平板培养法。试验前先将供试菌种活化 ,然后用直
径为 0.65 cm的打孔器取其菌块 ,将菌块分别接入
7种供试母种培养基上 ,置于 30 ℃恒温暗培养 ,每
处理 5皿 。 15 d后用十字交叉法测量菌落直径 ,计
算菌丝生长速度 ,同时观察菌丝生长状况。菌丝萌
发时间及满管时间用 18mm×150 mm试管培养 ,用
打孔器取 0.65cm的菌块接种在待培养的母种培养
基试管斜面上 ,每处理 5次重复 , 30 ℃恒温暗培养。
观察菌丝在不同母种培养基上的萌发时间和满管时
间。
1699
2009年 22卷 6期
Vol.22　　No.6　　　　　　　　　　　　　　
西　南　农　业　学　报
SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences
DOI :10.16213/j.cnki.scjas.2009.06.055
表 1　7种暗褐网柄牛肝菌母种培养基的组成成分
Table1　CompositionofsevenkindsofmotherculturemediaforPhlebopusportentosus
培养基编号
No.
母种培养基组成
Compositionofmotherculturemedia
M1 葡萄糖 20.0g, MgSO4 1.0g, KH2PO4 1.0g,酵母膏 2.0g,马铃薯 200.0g,琼脂 20.0 g,水 1 L
M2 马铃薯 250.0g, 20%麦芽汁 0.5L,蔗糖 25.0g, VB1 0.05g,琼脂 20.0g,水 1L
M3 20%麦麸煮汁 ,葡萄糖 20.0g, KH2PO4 3.0g, MgSO4 1.5g,酵母膏 2.0g,琼脂 20.0g,水 1L
M4 葡萄糖 20.0 g,蛋白胨 2.0g, KH2PO4 1.0g, KH2PO4 1.0g, VB1 0.05g, MgSO4 0.5g,琼脂 20g,水 1L
M5 葡萄糖 20.0g, MgSO4 0.5g,酒石酸铵 0.5g, ZnSO4 0.5g, KH2PO4 0.2g,琼脂 20.0g,水 1L
M6 KH2PO4 0.5g,葡萄糖 5g, NH4Cl0.5g, 20%麦芽汁 500mL, MgSO4 0.5g, FeSO4 1.0g,琼脂 20.0g,水 0.5L
M7 20%马铃薯汁 0.5L, 20%麦芽汁 0.5L,葡萄糖 20.0g, VB1 0.05g,琼脂 20.0g。
　　菌丝生长速度 =(菌落直径 -0.65)/15
2　结果与分析
2.1　不同培养基中菌丝的生长状况
将暗褐网柄牛肝菌母种在 7种培养基中培养 ,
其菌丝生长状况不尽相同。从菌丝密度 、菌落边缘
整齐度 、菌丝生长势等方面观察暗褐网柄牛肝菌菌
丝的生长状况 ,其结果见表 2。从表 2可以看出 ,在
M1、M2、M7母种培养基中 ,暗褐网柄牛肝菌菌丝稠
密 、粗壮 、暗褐色 、菌落边缘整齐 。
2.2　不同培养基中菌丝的生长速度
在不同的母种培养基上 ,暗褐网柄牛肝菌菌丝
的生长速度见表 3。从表 3可以看出 ,暗褐网柄牛
肝菌菌丝在 7种母种培养基上的生长速度不同 ,菌
丝平均生长速度从快到慢的顺序依次为 M1※M2※
M6※M7※M4※M3※M5。Duncan多重比较结果表
明 ,除 M3与 M5处理间差异未达到显著水平 ,其它
处理间差异均达到了显著水平;从均值来看 ,菌丝在
培养基 M1中的生长速度高于在其它母种培养基中
的生长速度。因此 ,本组试验中 ,最好的配比为 M1,
表 2　暗褐网柄牛肝菌菌丝在 7种母种培养基中的生长状况
Table2　MyceliumgrowthofPhlebopusportentosusonsevenkindsofmotherculturemedia
培养基编号
No.
菌丝密度
Myceliumdesity
菌落边缘整齐度
Uniformityof
myceliumedge
菌丝生长势
Mycelium
growthvigor
菌丝颜色
Myceliumcolor
M1 稠密 整齐 粗壮 暗褐色
M2 稠密 整齐 粗壮 暗褐色
M3 较稀 整齐 不粗壮 褐色
M4 稠密 整齐 粗壮 黄褐色
M5 较稀 整齐 不粗壮 灰白色
M6 较密 整齐 不粗壮 淡黄色
M7 稠密 整齐 粗壮 暗褐色
表 3　暗褐网柄牛肝菌菌丝在 7种母种培养基中的生长速度
Table3　ThegrowthspeedofPhlebopusportentosusonsevenkindsofmotherculturemedia
培养基编号
No.
菌丝生长速度(cm/d)Myceliumgrowthspeed Duncan 多重比较 Duncanmulty-comparison
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 均值 5% 1%
M1 0.253 0.285 0.260 0.232 0.223 0.251 a A
M2 0.207 0.234 0.225 0.218 0.204 0.218 b B
M3 0.041 0.034 0.033 0.067 0.049 0.045 f E
M4 0.104 0.100 0.130 0.129 0.111 0.115 e D
M5 0.021 0.037 0.004 0.035 0.035 0.026 f E
M6 0.191 0.193 0.192 0.186 0.207 0.194 c B
M7 0.145 0.156 0.190 0.127 0.157 0.155 d C
1700 西　南　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　22卷
表 4　暗褐网柄牛肝菌菌丝在 7种母种培养基中的萌发时
间及满管时间
Table4　ThetimeofgerminationandfulgrowthofPhlebopuspor-
tentosusonsevenkindsofmotherculturemedia
培养基编号
No.
菌丝萌发时间(d)
Mycelium
germinationtime
菌丝满管时间(d)
Myceliumful
growthtime
M1 2 19
M2 2 19
M3 2 30
M4 3 30
M5 2 29
M6 2 23
M7 2 18
其次为 M2。从结果可以看出 ,暗褐网柄牛肝菌对基
质有着特殊的营养要求 ,基质中添加马铃薯 、麦芽汁
能促进暗褐网柄牛肝菌菌丝生长;添加麦麸的培养
基菌丝长得较慢;基质中添加 ZnSO4 不仅长速最
慢 ,而且菌丝稀疏 、纤弱。
2.3　不同培养基中暗褐网柄牛肝菌菌丝的萌发时
间及满管时间
暗褐网柄牛肝菌菌丝在 7种母种培养基中的萌
发时间和满管时间各不相同 ,结果见表 4。从表 4
可以看出 ,菌丝在 M4上萌发时间为 3 d,在其余 6
种母种培养基上的萌发时间均为 2 d。但菌丝在不
同培养基上的满管时间差别较大。满管时间从快到
慢依次为:M7※M1※M2※M6※M5※M3※M4。在
培养基 M7中 ,菌丝满管所用的时间最短 ,其次为
M1、M2,满管时间最长的为 M4和 M3。
2.4　不同培养基中菌丝生长的均一性
适宜于暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的母种培养基
不仅要求菌丝稠密 、长势好 、生长速度快 ,而且需要
菌丝长速和生长势均一。为此 ,对暗褐网柄牛肝菌
菌丝的生长速度和满管时间进行方差分析 ,统计结
果见表 5。通过方差分析表明了 7种培养基的变异
性 。变异性小的说明均一性好 ,变异性大的说明均
一性差。从表 5可以看出 ,不同母种培养基中的菌丝
生长速度和菌丝满管时间变异性小 ,说明其均一性好。
3　讨　论
　　(1)任何一个优良菌种 ,只有在适宜的生长条
件下 ,生理代谢活动才能正常进行 ,优良性状才能得
以表现 。环境条件中最基本的是培养基质 。因此 ,
对引进的菌种有必要首先进行母种培养基的筛选试
验 ,以保证母种的质量 。在母种培养基的筛选试验
中 ,菌丝生长发育是鉴定环境是否合适的一个重要
指标[ 10] 。为此 ,从菌丝的生长状况 、生长速度及均
表 5　暗褐网柄牛肝菌菌丝生长速度及满管时间的方差分析
Table5　Analysisofvarianceformyceliumgrowthspeedandful
growthtimeofPhlebopusportentosus
培养基编号
No.
菌丝生长速度的方差
Variancefor
myceliumgrowth
菌丝满管时间的方差
Variancefor
mycelium
fulgrowthtime
M1 0.0006 0
M2 0.0002 0
M3 0.0002 0
M4 0.0002 0
M5 0.0002 0
M6 0.0001 0
M7 0.0005 0
一性等方面研究了暗褐网柄牛肝菌菌丝在 7种母种
培养基上的生长情况。综合各项指标结果表明 , M1
是最适合暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的母种培养基 。
(2)暗褐网柄牛肝菌菌种在母种培养基 M1上
表现出较强的生长优势 ,对于由此母种制成的栽培
种在栽培过程中能否表现出较强的产量优势 ,还有
待进一步研究 。
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(责任编辑　王家银)
17016期 　　　　　　张春霞等:暗褐网柄牛肝菌母种培养基的筛选