全 文 ：收稿日期:2007-11-28;　修订日期:2008-09-27
作者简介:耿红梅 (1968-),女(汉族),河北景县人 ,现任衡水学院应用化
学系副主任药师 ,博士学位 ,主要从事新药研究与开发工作.
高效液相色谱法测定欧亚旋覆花中绿原酸的含量
耿红梅
(衡水学院 , 河北 衡水　053000)
摘要:目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定欧亚旋覆花中绿原酸的含量 。方法 采用色谱柱为 InertsilODS-3(4.6
mm×250 mm, 5.0 μm);流动相为乙腈 -0.4%磷酸溶液(10∶90);流速为 1.0ml/min;检测波长为 326nm。结果 绿原酸
在 0.20 ～ 8.0μg范围内线性关系良好(r=0.999 6),回归方程为 Y=5 342.2X+1 960.5。平均回收率为 100.42%, RSD
为 1.9%。结论 该法简便 、准确 ,重现性好 , 可用于测定欧亚旋覆花中绿原酸的含量。
关键词:绿原酸;　欧亚旋覆花;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)01-0201-01
　　欧亚旋覆花为菊科植物欧亚旋覆花 InulabritannicaL.的干
燥头状花序 , 性味苦 、辛 、咸 、微温 , 归肺 、脾 、胃 、大肠经 , 具有降
气 、消痰 、行水 、止呕的功效 , 常用于风寒咳嗽 , 痰饮蓄结 , 胸膈痞
满 , 喘咳痰多 , 呕吐噫气 , 心下痞硬 [ 1]。 文献报道欧亚旋覆花所
含主要化学成分有黄酮类化合物 [ 2 ～ 4] 、萜类 [ 5, 6] 、挥发油 [ 7] 、多
糖 [ 8]以及酸类化合物等 , 具有抗炎镇痛 、抗肿瘤和抗氧化等 [ 9]活
性。绿原酸具有抗菌消炎作用 , 是欧亚旋覆花的有效成分之一。
在 2005版《中国药典 》中无含量测定项。为了有效控制药材质
量 , 我们用 HPLC法测定了 7个不同产地欧亚旋覆花中绿原酸的
含量。现报道如下。
1　仪器与材料
Agilent1100 series高效液相色谱仪 (G1310A四元泵 ,
G1313A自动进样器 , G1316A柱温箱 , G1314A紫外检测器);GR
-202型电子分析天平(A＆DCompany);KQ-400KDB型高功率
数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
乙腈为一级色谱纯(美国), 水为重蒸水并经 0.45μm滤膜
过滤 , 其它试剂均为分析纯。绿原酸对照品购自中国药品生物制
品检定所 , 批号为 110753-200212;实验药材分别采购于山西 、甘
肃 、江苏 、河南 、安国等地 , 经河北医科大学生药教研室聂风禔教
授鉴定为菊科植物欧亚旋覆花。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 InertsilODS-3色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5.0
μm);流动相为乙腈 -0.4%磷酸溶液(10∶90);柱温 30℃;检测
波长 326nm;流速 1.0ml/min;进样量 20μl;在该色谱条件下 ,样
品中绿原酸峰与其它非被测成分峰能够达到基线分离 ,对照品与
样品的色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取干燥的绿原酸对照品约 10
mg,置 100ml棕色容量瓶中 ,加 50%甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 , 即得(每毫升含绿原酸 0.1 mg, 10℃以下保存)。
2.3　供试品溶液的制备 将 60℃减压干燥 5 h的花粉碎 , 取粉
末约 0.5 g,精密称定 ,置锥形瓶中 ,精密加入 50%甲醇 20 ml,密
塞 , 称定重量 ,超声处理 30 min,放冷 , 再称定重量 , 用 50%甲醇
补足减失的重量 , 摇匀 ,滤过 , 续滤液用 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,
取续滤液作为供试品溶液。
2.4　线性关系考察 配制绿原酸对照品溶液浓度为 0.40 mg/
ml, 稀释 ,使绿原酸的浓度分别为 0.20, 0.10, 0.05, 0.02, 0.01
mg/ml, 进样各 20 μl, 按拟定色谱条件测定 ,记录峰面积值。以峰
面积 Y值为纵坐标 ,进样量 X为横坐标进行线性回归 ,得回归方
程为 Y=5 342.2X+1 960.5, r=0.999 6。结果表明绿原酸进样
量在 0.20 ～ 8.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5　稳定性实验 准确称取同一批欧亚旋覆花 , 按 “ 2.3”项下方
法制备成供试品溶液 , 并分别于 0, 4, 8, 12, 18, 24 h测定绿原酸
峰面积 ,结果 RSD为 1.3%, 表明样品在 24 h内具有良好的稳
定性。
图 1　绿原酸对照品色谱图
图 2　欧亚旋覆花供试品色谱图
2.6　精密度实验 精密吸取对照品溶液 20μl,连续进样 5次 , 测
定峰面积 , RSD为 0.2%, 表明仪器精密度良好。
2.7　重复性实验 精密称取同一批欧亚旋覆花药材共 5份 , 约
0.5 g/份 , 照 “ 2.3”项下制备供试品溶液测定 ,测得其平均含量为
1.52 mg/g, RSD为 1.8%,表明方法重复性良好 。
2.8　加样回收率实验 准确称取同一批欧亚旋覆花药材 5份 , 约
0.5 g/份 , 照 “ 2.3”项下制备供试品溶液 ,测定 , 计算回收率。 结
果见表 1。
表 1　欧亚旋覆花中绿原酸加样回收实验结果
样品中含
绿原酸量m/μg
添加绿原酸
量 m/μg
测出绿原酸
总量 m/μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
760.0 608.4 1 384.1 102.58
758.8 608.1 1 361.5 99.12
755.2 760.0 1 506.5 98.85
750.6 759.2 1 522.8 101.72 100.42 1.9
751.1 912.8 1 647.6 98.21
762.3 910.2 1 690.8 102.01
2.9　样品含量测定 取 7个不同产地的欧亚旋覆花 , 按 “ 2.3”项
下方法制备成供试品溶液 , 并按 “ 2.1”项下色谱条件进样测定 ,
计算含量。结果见表 2。
·201·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.1 时珍国医国药 2009年第 20卷第 1期
表 2　欧亚旋覆花中绿原酸的含量测定结果 mg· g-1
编号 产地 样品含量
1 山西 1.52
2 河南 0.74
3 江苏 1.36
4 甘肃 0.46
5 安国 1.30
6 内蒙 1.18
7 新疆 1.25
3　讨论
结果表明 , 不同产地的欧亚旋覆花的绿原酸含量相差较大 ,
最高的为 1.52mg/g,最低的为 0.46 mg/g,说明欧亚旋覆花中绿
原酸的含量受产地 、环境 、气候和采集时间的影响较大。
绿原酸对光较敏感 ,长时间光照易分解 , 因而实验中绿原酸
对照品与样品均应采用棕色量瓶放置 , 保存 10℃以下。稀释液
不易长期保存 , 最好现用现配。
本实验考察了不同提取方法(热回流 、超声波震荡)、不同提
取溶剂(50%甲醇 、80%甲醇 , 甲醇 , 水)、不同提取时间(20, 30,
40 min),结果表明 , 50%甲醇超声处理 30 mim提取效率最高。
绿原酸高效液相色谱法测定波长有 327, 330, 325 nm等报
道 [ 10] 。将绿原酸对照品溶液 、供试品溶液分别注入液相色谱仪
中 , 以二极管阵列检测器进行测定 , 得到它们的色谱扫描图及光
谱吸收曲线。绿原酸对照品 、欧亚旋覆花供试品所含绿原酸的光
谱吸收曲线相一致 , 均在 326nm左右有最大吸收 , 故确定 326nm
为检测波长 , 供试品与绿原酸对照品在相应位置上有相似的吸收
峰且分离度良好。
本实验方法简便准确 ,为药材欧亚旋覆花的质量评价提供了
依据 , 同时为其制剂方面的研究提供了借鉴。
参考文献:
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收稿日期:2007-11-22;　修订日期:2008-01-28
作者简介:江　巍(1984-),女(汉族),江西上饶人 ,现为江西中医学院在
读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事新药研制与开发工作.
枳术水煎液对胃排空肠推进作用的影响
江　巍 1 , 王　晶2 , 刘帅英 1
(1.江西中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ,江西 南昌　330006;
2.江西本草天工科技有限公司 ,江西 南昌　330006)
摘要:目的 研究枳术煎液不同剂量对便秘小鼠胃排空肠推进作用的影响 , 探讨该方对便秘的治疗作用及剂量范围。方
法 采用炭末推进测定法 ,观察比较枳术煎液的不同给药剂量对小鼠小肠推进功能的影响 , 并选墨汁推进率作为检测指
标 , SPSS12.0统计软件进行分析。结果 与模型组比较 , 空白组 、枳术Ⅱ组有显著性差异(P<0.05), 枳术Ⅰ组有非常显
著差异(P<0.01), 而且从枳术Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ组的比较研究得知 ,随着用药剂量的增加小肠推进功能明显增强。结论 枳术组
方对胃肠功能起到了调整治疗作用 ,能促进便秘小鼠胃肠平滑肌的蠕动。从实验疗效上看 ,枳术煎液起效的最小剂量不
能低于 0.4 g生药 /kg体重。
关键词:枳术煎液;　胃排空;　肠推进;　剂量
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)01-0202-01
　　张元素继承《内经》“饮食自倍 , 脾胃乃伤 ”的观点 , 提出 “养
正积自除” ,以扶养为主 , 祛邪为辅 , 养正以胃气为主 , “胃气强 ,
积自消矣”的新看法。其曰:“治当先补脾胃之弱 , 而后化其所
伤。”即以补养脾胃为主 , 从而达到化其食积的目的。因胃运动
是胃排空的原动力 [ 1] , 为探讨枳术水煎液对胃肠功能的影响 ,特
将枳实白术按不同剂量灌鼠 , 观察其对胃排空肠推进的影响作
用。现报道如下。
1　材料
1.1　药物 枳实白术为 1∶2[ 2]水煎液分别配制成浓度为 0.08 g
(生药)/ml、 0.04g(生药)/ml、0.02 g(生药)/ml的混悬液。
1.2　动物 昆明种健康小鼠 , (20±2)g, ♂ , 60只 ,由江西医学院
提供。
1.3　试剂 复方地芬诺酯(常州康普药业有限公司 , 批号:
0406031);西沙必利片(浙江京新药业股份有限公司生产 , 批号:
1010846);7.2 mg/ml复方地芬诺酯混悬液 , 0.45 mg/ml西沙必
利混悬液。
2　方法与结果
2.1　正常情况的比较
2.1.1　给药方法 取体重为(20±2)g的小鼠 50只 , 随机分为空
白组 、模型对照组 、枳术 Ⅰ 组 [ 0.08 g(生药)/ml] 、枳术 Ⅱ 组
[ 0.04g(生药)/ml] 、枳术Ⅲ组 [ 0.02 g(生药)/ml] , 共 5组 , 每组
10只。实验前先禁食 24 h, 自由饮水。空白组及模型组按 0.1
ml/10 g(体重)灌服蒸馏水;枳术Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ组分别灌服上述 3种
水煎液 。
2.1.2　造模 给受试样品 3d后 ,各组小鼠禁食不禁水过夜。模
型对照组和枳术 3个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯(0.1 ml/10 g
体重),空白对照组给予蒸馏水。
2.1.3　指标测定的方法 给复方地芬诺酯 0.5h后 , 各组分别给
予相应受试样和 0.1 ml墨汁。 30 min后立即脱颈处死动物 , 打
开腹腔分离肠系膜 ,剪取上端自幽门 、下端自回盲的肠管 ,置于托
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.1