全 文 ：攻击第一道防线的小胶质细胞在脑内炎症过程中发挥着主要
作用 , 因此在病理条件下小胶质细胞也是参与炎症介导的神经
变性过程的主要胶质细胞。
　　总之 , 本研究利用侧脑室注射 LPS成功引起了大鼠全脑内
的炎症反应 , 同时观察了 LPS注射后 24h内小胶质细胞随时间
的变化规律 、星形胶质细胞和黑质 DA能神经元的变化情况 ,
为下一步深入研究脑内炎症与黑质 DA能神经元特异性损伤
之间的关系及相应分子机制奠定了基础。
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〔2008-05-22收稿　 2008-10-10修回〕
(编辑　张　铭)
欧亚旋覆花总黄酮对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响
耿红梅　王　燕　曹利慧　李爱英 1　(衡水学院应用化学系 ,河北　衡水　053000)
　　〔摘　要〕　目的　探讨欧亚旋覆花总黄酮(TFIB)对培养血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移的影响。方法　采用大鼠胸腹主动脉的动脉中膜
平滑肌细胞 ,用贴块法培养 ,实验用 4～ 7代细胞 ,加入不同浓度的 TFIB共同孵育 24h。采用噻唑蓝(MTT)法观察该药对细胞增殖的影响 ,倒置显微
镜下观察该药对细胞迁移的影响。结果　与对照组相比 , TFIB对 VSMC增殖具有抑制作用 , 该作用呈剂量依赖性;随着 TFIB浓度增加体外培养的
VSMC迁移距离缩短。结论　适宜浓度的 TFIB可明显抑制体外培养的大鼠 VSMC的增殖 、迁移。
〔关键词〕　欧亚旋覆花总黄酮;血管平滑肌细胞;增殖;迁移
〔中图分类号〕　R977.9　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2009)01-0004-02
EffectsoftotalflavonoidsfromInulaBritannicaL.ontheproliferationandmigrationofculturedratvascularsmoothmusclecels
GENGHong-Mei, WANGYan, CAOLi-Hui, etal.
ChemistryDepartmentofHengshuiUniversity, Hengshui053000, Hebei, China
【Abstract】　Objective　TostudytheeffectsoftotalflavonoidsfromInulabritannicaL.ontheproliferationandmigrationofcultured
ratvascularsmoothmusclecells(VSMCs)ofthoracicaorta.Methods　VSMCsofratwereculturedinvitroand4～ 7generationsofcultured
VSMCswereusedintheexperimentandweredividedintocontrolgroupandtotalflavonoidsgroup(TFIBgroup)accordingtodifferentcon-
centrationsoftotalflavonoidsfromInulabritannicaL., MTTassayandmicroscopewereusedrespectivelytoobservetheratioofcellprolifera-
tionandmigration.Results　Comparedwithcontrolgroup, TFIBgrouphadtheinhibitedratioofcellproliferationinadose-dependentman-
ner.ThedistancesofVSMCsmigrationweredecreasedcomparedwiththoseofcontrolgroup.Conclusions　ThetotalflavonoidsfromInula
britannicaL.cansignificantlyinhibitVSMCsproliferationandmigrationinvitro.
【Keywords】　TotalflavonoidsfromInulabritannicaL.;Vascularsmoothmusclecels;Proliferation;Migration
基金项目:河北省科技厅指导项目(07276485)及衡水学院院级课题资
助项目(2008039)
1　河北医科大学西校区基础课教学部生化教研室
第一作者:耿红梅(1968-),女 ,博士 , 副主任药师 ,主要从事新药开发研
究。
　　高血压 、动脉粥样硬化 、经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)
及支架植入术后血管再狭窄等心血管疾病是由多种因素对血
管内皮刺激所触发的慢性炎性反应 ,血管平滑肌的异常增殖是
其发生的病理基础 , 而血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移
是引起内膜增生肥厚的主要原因之一。观察表明 ,患者在行支
架植入术后 3 ～ 6个月的再狭窄发生率可达 30% ～ 50%〔1 , 2〕 ,然
而迄今尚无有效的药物治疗。黄酮类化合物具有多种生理和
药理活性 , 具有抗动脉粥样硬化作用。欧亚旋覆花中的黄酮类
化合物含量高达 10.9%〔3〕 , 但欧亚旋覆花总黄酮(TFIB)是否
对在动脉粥样硬化斑块形成和 PTCA后再狭窄中起关键作用
·4· 中国老年学杂志 2009年 1月第 29卷
的 VSMC增殖和迁移具有一定作用目前还未见报道。本部分
实验通过观察 TFIB对 VSMC增殖和迁移的影响 , 探讨其抗动
脉粥样硬化的作用和机制 , 进而为 TFIB的临床应用提供理论
和实践依据。
1　材料与方法
1.1　材料　M199培养基(Gibco公司);新生小牛血清(华西
医大生物制品厂);胰蛋白酶 、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝
(MTT)(美国 Sigma公司);SD大鼠(河北医科大学实验动物中
心);欧亚旋覆花总黄酮(TFIB)(自制);其他试剂均为国产分
析纯。
1.2　实验方法 〔4〕　①VSMC培养及分组:选用 5周龄雄性 SD
大鼠 , 用腹腔注射麻醉 ,取胸腹主动脉 ,磷酸盐缓冲液(PBS)洗
净管腔血液 , 剥脱外膜 , 取中膜按贴块法分离 、培养 VSMC。细
胞置含 10%新生小牛血清(NCS)的 M199 培养基 、 5% CO2 、
37℃孵箱中进行培养 。用特异性兔抗鼠 α-actin抗体对 VSMC
进行免疫组化鉴定。 0.25%胰蛋白酶消化传代 ,取 4 ～ 7代细
胞进行实验。 ②细胞增殖试验:将传代细胞接种到 96孔板 ,细
胞长至 70%融合后 , 换成含 2% NCS的培养基培养 24 h, 使细
胞同步于 G0 期后分为 3组。 一组加血小板衍生生长因子
(PDGF)至终浓度为 10-7mol/L,一组不加 PDGF的细胞作为对
照组 , 另一组分别加入 5、 10、20、50 μg/mlTFIB溶液 , 继续培养
48 h后 ,加入 MTT20 μl(浓度 1μg/μl), 37℃培养 4 h, 每孔加
入 DMSO200 μl终止反应 , 在震荡器上震荡 15 min后 , 置酶标
仪在 570 nm处测定各孔 OD值。另一组分别加入 5、 10、 20、
50 μg/mlTFIB溶液孵育 1 h后 , 再加入 PDGF至终浓度为
10-7mol/L, 37℃继续培养 48 h。 同上 , MTT法检测 VSMC增
殖。增殖抑制率(%)=1 -(干预组 OD值 /对照组 OD值)×
100。 ③细胞迁移试验:将传代细胞接种到已放入盖玻片的 96
孔培养板中 , 再加入含 10% NCS的 M199, 放入 37℃和 5%CO2
的孵箱中静置培养 48h。取出盖玻片 , 在超净台上用记号笔在
盖玻片底沿直径划一直线 ,再用细胞刮在无菌条件下仔细刮去
画线一侧的细胞 , 用 PBS清洗 1次 , 重新放入 96孔培养板 , 加
入 10% NCS的 M199培养基。一组加 PDGF, 一组不加 PDGF
的细胞作为对照组 , 另一组分别加入 5、 10、 20、 50、 100 μg/ml
TFIB溶液 ,再加入 PDGF调整终浓度与分组标准一致 ,放入孵
箱中静置培养 , 于 48 h后取出于光学倒置显微镜下观察。
1.3　统计学处理　数据均采用 x±s表示 ,组间资料采用单因
素方差分析(ANOVA), DunnetT两两比较。
2　结　果
2.1　VSMC鉴定结果　培养的 VSMC为梭形 、带形 、三角形或
星形 , 逐渐重叠生长可达多层 , 并呈 VSMC特征性的 “谷峰”状。
α-actin单克隆抗体免疫组织化学染色均为阳性。 证实培养的
细胞均为 VSMC。
2.2　细胞增殖试验　MTT法检测结果显示:TFIB能明显抑制
VSMC增殖 , 且呈剂量依赖关系。如图 1所示 , 不同浓度 TFIB
对 VSMC均有一定的抑制作用 ,随浓度增加其抑制作用增强 ,
浓度为 20μg/ml时达 50%抑制效率 , 各组之间差异显著(P<
0.05)。
图 1　不同浓度 TFIB对 VSMC增殖的影响
2.3　TFIB作用 48 h后细胞迁移试验　TFIB能明显抑制
VSMC迁移。 随 TFIB浓度增加 , VSMC迁移距离逐渐缩短。
TFIB浓度为 5、10、20、50 μg/ml时 , 作用 48 h后 VSMC迁移距
离分别为 (534.62 ±41.58)、(362.91 ±20.30)、(206.43 ±
48.79)、 (108.51 ± 45.10) μm, 与 对 照 组 〔(798.06 ±
30.67)μm〕比较差异显著(均 P<0.05)。浓度为 50 μg/ml时
VSMC开始崩解死亡 , 浓度为 100 μg/ml时细胞大量崩解死亡。
表明 TFIB在浓度较高时对细胞有毒性作用。
3　讨　论
　　VSMC的增殖和迁移是导致支架术后再狭窄的关键因素
之一 , 也是动脉粥样硬化斑块形成的一个主要病理基础 〔5〕 , 因
此抑制 VSMC的增殖和迁移是防治支架术后再狭窄及动脉粥
样硬化斑块形成的一个有效靶点。
　　TFIB能够抑制体外培养的大鼠血管平滑肌细胞的增殖和
迁移 , 作用呈浓度依赖型。理论上可降低支架术后主要由于平
滑肌细胞增殖和迁移引起的支架内再狭窄的发生率 , 从而可能
改善支架植入术的预后 , 可考虑进一步动物实验研究 TFIB在
体内环境中对血管内膜增生的效果。
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〔2007-12-28收稿　 2008-07-15修回〕
(编辑　张　铭)
·5·耿红梅等　欧亚旋覆花总黄酮对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响　第 1期