全 文 ：　[收稿日期 ] 　2010-01-29;2010-09-11修回
　[作者简介 ] 　王英臣(1967 -),男 ,副教授 ,从事食品科学和天然产物的教学与科研工作。 E-mail:JL wangyingche@sohu.com
[文章编号 ] 1001-3601(2010)10-0692-0175-02
木绣球花中绿原酸的提取及含量测定
王英臣1 , 常 序 2 , 谢贤仙1
(1.吉林农业科技学院 , 吉林 吉林 132101;2.吉林省吉林市卫生监督所 , 吉林 吉林 132100)
　　[摘　要 ] 为了解木绣球花中绿原酸的含量 ,采用索氏提取法提取木绣球花中绿原酸并用 HPLC法测定
其含量 。结果表明:干木绣球花中绿原酸含量为 1.50%,平均回收率为 98.95%, RSD=2.60%。木绣球花中含有绿原酸 ,且含量较高 。[关键词 ] 木绣球花;绿原酸;高效液相色谱;含量测定[中图分类号 ] S688.9 [文献标识码 ] A
ExtractionandDeterminationofChlorogenicAcidinV.MacrocephalumFlowers
WANGYing-chen1 , CHANGXu2 , XIEXian-xian1
(1.JilinCollegeofAgricultureScienceandTechnology, Jilin, Jilin132101;2.JilinHealthInspectionInstitute, Ji-lin, Jilin132100, China)
　　Abstract:ThechlorogenicacidinV.MacrocephalumflowerswasextractedanddeterminedbySoxhletextractorandHPLCtoknowchlorogenicacidcontentinV.Macrocephalumflowers.TheresultsshowedthatthechlorogenicacidcontentinV.Macrocephalumflowerswas1.50%anditsaveragerecoveryratewas98.95% (RSD=2.60%).Keywords:V.Macrocephalumflower;chlorogenicacid;HPLC;determination
　　木绣球(V.macrocephalum)是忍冬科荚蒾属 ,又
名绣球荚蒾 。原产于我国华中和西南 ,现在我国分
布较广 ,主要用于城市和庭院的绿化树种 ,其伞形花
序如雪球累累 ,簇拥在椭圆形的绿叶中 [ 1-3] ,耸立于
城市街道两侧和庭院内 ,构成一道美丽风景 。大多
数忍冬科植物都有一定的药用价值[ 4] ,其药用价值
的检测指标大多以绿原酸含量多少来评价其质量 ,
绿原酸具有很高的生物活性和生理活性 ,现代药理
研究表明 ,除具有抗菌抗病毒作用外 ,还有抗艾滋病
毒 、抗过敏 、抗肿瘤等功能 ,具有保肝利胆 、止血 、抗
氧化 、抗生育等作用 ,因此有植物 “黄金 ”之美誉 [ 5] ,
因而倍受人们关注 。目前 ,对木绣球的相关文献报
道较少 ,对其药用价值的研究也鲜有报道 。对此 ,笔
者对木绣球花中是否含有绿原酸进行了检测 ,并对
其含量情况作了初步研究 ,为木绣球的药用开发提
供数据基础和理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 木绣球花 木绣球花 ,采于吉林农业科技
学院校园内 ,经专家鉴定为木绣球花 ,经阴干 、低温
烘干处理为干品 。
1.1.2 仪器 岛津 LC-20A型高效液相色谱仪
(配有真空脱气机 、进样器 、柱温箱 、紫外检测器)、
SHIMADZU工作站和岛津 色谱柱 (4.6mm ×
150mm×5μm, C18),均为日本岛津生产;索氏提取
器 ,上海洪纪仪器设备有限公司;ESJ205-4型电子
天平 ,沈阳龙腾电子有限公司 。
1.1.3 试剂 乙腈 ,色谱纯 ,天津市福晨化学试剂
厂生产;超纯水;磷酸 ,分析纯 ,为沈阳市新化试剂厂
生产;绿原酸对照品(批号 110753-200212),购自中
国制药生物制品检定所 。
1.2 方法
1.2.1 检测波长 、提取剂及提取温度的选择
1)检测波长。将绿原酸用乙腈-0.5%磷酸水
溶液(1∶9)配成待测溶液 ,用紫外分光光度计在
200 ～ 400nm进行光谱扫描 ,确定检测波长 。
2)提取剂 。分别试用 30%、50%和 70%浓度
梯度的甲醇 、乙醇 、乙酸乙酯为提取剂进行提取 ,确
定回收率较好的提取剂 。
3)提取温度 。分别在 65℃、70℃、75℃、80℃、
85℃和 90℃下进行样品的提取 ,确定不同温度对提
取结果的影响 。
1.2.2 绿原酸的提取 将干燥的木绣球花用研钵
研碎 ,称取 10.000g,用滤纸包好 ,置于索氏提取器
中 ,取 70%的甲醇溶液 80mL,先往索氏提取器中加
70%的甲醇至与虹吸管相平 ,剩余液体加入圆底烧
瓶中 ,对样品浸泡 2h,然后在水浴锅上加热回流至
无色 ,控制温度在 70℃左右。把回流液倒于蒸馏瓶
中进行减压蒸馏至 30mL,超声溶解 ,过滤 ,装于棕
色具塞管中 ,得待测液 ,置于 5℃冰箱中备用。
1.2.3 色谱条件 4.6mm×150mm的 SHI-
　贵州农业科学　2010, 38(10):175 ～ 176　GuizhouAgriculturalSciences
MADZU色谱柱 ,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂 ,填料粒度为 5μm;乙腈 -0.5%磷酸溶液 (10∶
90)为流动相;检测波长为 327nm;流速为 1.0mL/
min;柱温为 25℃。理论板数按绿原酸峰计算 ,应不
低于 4000。
1.2.4 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照
品 5.800mg,置 25mL容量瓶中 ,加甲醇超声溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 , 0.2μm滤膜过滤 ,取滤液即得 ,
浓度为 0.232mg/mL。
1.2.5 绿原酸的检测 取 1.2.4的绿原酸对照品
溶液 3μL和 1.2.2提取液 5μL(经 0.2μm滤膜过
滤),按 1.2.3色谱条件分别进样分析 ,平行进样 6
次 。
1.2.6 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液
(0.236mg/mL)1.0μL、 3.0μL、 5.0μL、 7.0μL、
10.0μL、15.0μL进样 ,记录色谱图 ,以绿原酸对照
品的进样量为横坐标 ,积分峰面积值为纵坐标 ,进行
线性回归 ,得回归方程 y=1 925 725x-28103 ,相关
系数 r=0.9998 (n=5)。绿原酸在 0.232 ～ 3.48μg
范围内呈现良好线性关系 。
1.2.7 样品含量的测定 取 1.2.2制备的木绣球
花提取液 10μL(经 0.2μm滤膜过滤),平行进样 5
次 ,得色谱图 ,根据回归方程计算样品中绿原酸的含
量 。
1.2.8 稳定性试验 取对照品溶液分别于配制后
0、1h、2h、4h、8h和 12h,取滤液 5μL注入色谱仪 ,
记录色谱图 ,考察溶液放置后峰面积的变化情况 ,
RSD为 0.18%,表明供试品溶液在 12h内稳定 。
1.2.9 回收率与精密度试验 为了考察方法的可
靠性 ,进行了回收率和精密度的测定。精密称定木
绣球花 5份 ,每份 0.500 0g,按 1.2.2方法提取后精
密加入绿原酸对照品 0.500mg,经 0.2μm滤膜过
滤 ,进样 ,测定峰面积 ,根据结果算出回收率和相对
标准偏差。
2 结果与分析
2.1 检测波长 、提取剂和绿原酸提取温度的选择
用紫外分光光度计在 200 ～ 400nm进行光谱扫
描 ,绿原酸在 327.0nm处有最大吸收。因此 ,选择
327.0nm作为检测波长 。
经采用不同浓度甲醇 、不同浓度乙醇和乙酸乙
酯为提取剂进行提取 ,结果发现 ,当用 70%的甲醇
溶液提取绿原酸的量最多 ,且回收率最好 。因此 ,
70%的甲醇溶液作为提取剂。
在 65 ～ 90℃,分别试用了 6个温度值进行进行
样品提取 ,结果表明 ,当提取温度高于 75℃时 ,提取
液中绿原酸的含量明显降低 。由此可知 ,绿原酸是
一种对热敏感的化合物 ,在提取的过程中应注意温
度的控制 ,提取温度最好不要高于 75℃,否则对提
取结果会有很大的影响 。
2.2 木绣球花中绿原酸的定性结果及含量
从图示可知 , 绿原酸对照品的保留时间是
10.75min,木绣球花提取液的色谱图中有一色谱峰
的保留时间是 10.68min,根据在相同的色谱条件下
保留时间相同的色谱峰是相同组分的原理 ,说明木
绣球花中含有绿原酸。根据 1.2.6测定方法进行测
定 ,干木绣球花中绿原酸的平均含量为 1.50%。
2.3 回收率与精密度
回收率一般要求为 95% ～ 105%,否则 ,说明方
法不适宜;相对标准偏差(RSD)越小 ,说明平行性越
好 ,一般要求小于 5%时 ,说明方法具有较高的精密
度。由表可知 , 绿原酸的平均回收率是 98.92%,
RSD是 2.6%,说明方法具有较好的准确度和精密
度。
图示 绿原酸对照品与木绣球花样品 HPLC图
　　 Fig.　Thechromatogramofchlorogenicacidin
V.MacrocephalumflowersandCK
表 木绣球花绿原酸的回收率
Table　TherecoveryrateofchlorogenicacidinV.Macrocephalumflowers
编号
No.
取样量 /g
Sampling
amount
绿原酸
含量 /mg
Chlorogenic
acid
content
加入绿原酸对照
品数量 /mg
Addedchlorogenic
acidamount
加入对照后
绿原酸含量 /mg
Chlorogenicacid
contentafter
addingCK
回收率 /%
Recovery
平均回
收率 /%
Average
recovery
相对标准
偏差 /%
RSD
1 0.5000 7.50 0.50 7.978 95.6
2 0.5000 7.50 0.50 7.989 97.8
3 0.5000 7.50 0.50 8.004 100.8 98.92 2.60
4 0.5000 7.50 0.50 7.991 98.2
5 0.5000 7.50 0.50 8.011 102.2
(下转第 179页)
·176· 　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学 2010, 38卷
解 ,维持细胞质膜的完整性和花瓣细胞膨压。
3 结论与讨论
有关切花采后生理及保鲜技术的研究表明 ,供
给必要的营养 、防止导管堵塞及抑制乙烯生物合成
是延长切花寿命的 3个必要因子[ 10] 。水分和养分
亏缺是切花衰老和凋谢的主要原因[ 11] 。鲜切花细
胞只有保持一定的膨压 ,才能维持正常的生理代谢 ,
使细胞维持高度的膨压紧张状态 ,增加花枝的鲜重 ,
一旦吸水量小于失水量 ,鲜切花便表现出不同程度
的萎蔫 ,同时 ,会产生由水分胁迫引起的自由基对质
膜的伤害 ,因此 ,维持花枝水分平衡是延缓切花衰老
的关键环节 。而不利的环境因子和微生物的不良影
响及其内部发生的一系列生理生化变化导致切花输
导组织的畅通程度受阻 ,阻碍花枝吸水 ,水分平衡受
到破坏 ,导致自由基积累 ,质膜透性增加 ,最终引起
切花衰老和凋谢;研究表明 , 2种保鲜剂能显著提高
花枝的吸水能力 ,抑制花瓣和叶片的蒸腾失水 ,维持
水分平衡 ,延缓质膜降解和鲜重下降 ,延长瓶插寿
命 ,增大花径 ,提高观赏价值 ,但保鲜剂 2含有重金
属 Ag+盐 ,严重污染环境 ,危害人类健康;处理 1含
有 Al2(SO4)3 ,具有拮抗乙烯的作用 ,并能降低溶液
的 pH,抑制微生物滋生 ,保证花枝疏导组织的畅通 ,
减小蒸腾作用 ,对维持花枝体内水分平衡具有显著
效果[ 4] , Ca2+对维持细胞膜系统稳定和水分平衡也
具有重要作用[ 12] 。青霉素与 8-HQ均具有很强的抑
菌作用 ,青霉素价格低廉 ,水溶性较高 ,无异味 ,无毒
无污染 ,配制过程简便 ,而 8-HQ需要加热才能溶解 ,
室内温度略低就会析出 ,影响杀菌效果 ,且具有难闻
的气味。因此 ,从节省能源和环保方面考虑 ,保鲜剂
1是百合鲜切花较理想的高效 、环保的保鲜剂。
[参 考 文 献 ]
[ 1 ] 叶明琴.不同保鲜剂对麝香百合切花百合的保鲜效
应 [ J] .广西农业科学 , 2001(4):1802-1821.
[ 2 ] 汪跃华 , 董华强 ,林银凤.1-甲基环丙烯对百合切花保
鲜的作用 [ J] .安徽农业科学 , 2003, 31(2):203-204.
[ 3 ] 刘雅莉 ,王 飞.催化保鲜剂对百合(Linlium)绿蕾催
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[ 5 ] 胡须岚.切花保鲜新技术 [ M] .北京:中国农业出版
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(责任编辑:刘　海)
(上接第 176页)
3 小结
1)目前木绣球多数为城市的绿化树种 ,其花
目前大部分都被废弃 ,通过此次研究可知木绣球的
花是一种很有价值的药用资源 。我国木绣球资源极
其丰富 ,因此 ,作者对其进行开发研究 ,使之得到合
理的应用。
2)采用索氏提取法对木绣球花中绿原酸进行
提取 ,经高效液相色谱法检测证实 ,木绣球花中含有
生物活性极高的绿原酸 ,且其含量较高 ,可为木绣球
花的药用开发奠定理论基础 ,为其以后的研究提供
基础依据。
3)绿原酸是一种对热敏感的化合物 ,在提取
过程中应注意温度的控制 ,提取温度最好不要高于
75℃,否则对提取结果会有很大影响。
[参 考 文 献 ]
[ 1 ] 陈有民.园林树木学 [ M] .北京:中国林业出版社 ,
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(责任编辑:杨　林)
·179·　第 10期 赵　敏 等　无银保鲜剂对百合切花的保鲜效应