全 文 ：不同热处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱分析
郭永红 1, 朱 萍 1, 赵 博 2,丁晓雯 2,桂明英 1*
(1.昆明食用菌研究所, 昆明 650223;2.西南大学食品科学学院,重庆 400716)
绒柄牛肝菌在我国各省均有分布,以西南地区产量较
高[2]。以最大耐受剂量灌胃时,新鲜绒柄牛肝菌中的一些成
分对实验小鼠表现出一定的毒性,而经过加热处理后这些
成分可被部分破坏或转化,对小鼠的毒性有一定减弱[3]。为
了保证绒柄牛肝菌的周年供应,常用手段是将它们进行加
热干燥。在生产中不可能将每批干燥的绒柄牛肝菌产品都
进行急性毒性实验,以确定其有害作用是否减小,因此寻
求准确、高效的方法以控制生产出的绒柄牛肝菌产品的安
全性具有重要的实际应用意义。高效液相色谱 (HPLC)
具有检出限低、重现性好和高灵敏度等优点,在中药质量
控制方面得到了很好的应用[4~6],而利用 HPLC图谱对食用
菌进行安全性控制还未见报道。
本文利用HPLC研究不同加热方式处理前后绒柄牛肝
菌HPLC图谱的变化,利用相对保留时间、图谱峰的数量
和峰面积等评价新鲜绒柄牛肝菌中的色谱峰与加热处理后
色谱峰的变化,为生产中保障绒柄牛肝菌的安全提供依
据。
1 材料与方法
1.1实验材料
新鲜绒柄牛肝菌由昆明食用菌研究所在云南省楚雄州
南华县采集,由昆明食用菌研究所鉴定。冷冻保存备用。
1.2仪器
LC-10高压液相色谱仪,日本岛津。
1.3样本处理
1.3.1取冷冻保存的绒柄牛肝菌样品适量,打碎,称取
25.0g于冰水浴中研磨后定容 250mL,混匀。取适量样液
于 4000r·min-1离心 10min,0.45μm微孔滤膜过滤。滤液
装入小瓶,冰箱保存备用。
1.3.2煮沸、烘干处理品 取冷冻保存的绒柄牛肝菌样品
适量,打碎,称取25.0g,加适量水煮沸30min后,95℃烘
干至恒重。磨细,定容 250mL,混匀。后处理与 1.3.1的
相同。
1.3.3煮沸处理 取冷冻保存的绒柄牛肝菌样品适量打碎,
称取 25.0g加适量水煮沸 20min后定容 250mL,后处理与
1.3.1的相同。
1.3.4蒸气加热处理 取冷冻保存的绒柄牛肝菌样品适量
打碎,称取 25.0g,常压蒸气加热 20min后定容 250mL,
后处理与1.3.1的相同。
1.3.5微波加热处理 取冷冻保存的绒柄牛肝菌样品适量
打碎,称取 25.0g加水 100mL微波加热 10min后定容
250mL,后处理于1.3.1的相同。
1.3.6烘干处理 取冷冻保存的绒柄牛肝菌样品适量,切
成约0.5cm见方的小块后称取25.0g,95℃烘干至恒重,打
碎磨细,定容至250mL,后处理与1.3.1的相同。
1.4 HPLC检测方法
经大量预备实验后得到了用HPLC测定绒柄牛肝菌的
色谱条件:
色谱柱:ODSC18柱 (4.6mm×250mm);检测波长:
260nm;流速:0.35mL·min-1流动相:A:纯水,B:甲醇;
梯度洗脱:0min～35min,4%甲醇+96%纯水,35min～
45min,72%甲醇+28%纯水;进样量:20μL。
2 结果分析
新鲜绒柄牛肝菌有较大消费群体,但作者在研究中发
现,新鲜的绒柄牛肝菌中含有一些成分,当采用最大耐受
剂量灌胃时可使少数实验小鼠在灌胃后5min表现出竖尾、
约 30min出现瘫软、个别动物甚至俯卧不能站立的情况,
约 8h后才陆续恢复正常;而将新鲜的绒柄牛肝菌经过加
热处理后,对小鼠的这些毒作用大大减弱[3]。
为了在生产中能迅速了解绒柄牛肝菌的这些成分是否
被破坏或转化,用HPLC研究加热处理前后绒柄牛肝菌的
摘要:绒柄牛肝菌水提液经梯度洗脱后用HPLC分离得到的色谱图各色谱峰分离较好,新鲜绒柄牛肝菌中能使
小鼠表现出神经毒性的成分有特征色谱峰,该峰的保留时间为 36.44min,该成分可被一定方式的热处理破坏,
表现为特征峰消失。为控制绒柄牛肝菌的安全性提供依据。
关键词:绒柄牛肝菌;HPLC图谱;热处理
中图分类号:S646.3 文献标识码:A 文章编号:1003-8310 (2008)02-0027-04
作者简介:郭永红 (1964-),女,副研究员,研究方向:食用菌。E-mail:guoyonghong64@126.com
*通讯作者:桂明英 (1965-),女,研究员。E-mail:guimingying@126.com
收稿日期:2008-01-24
中国食用菌 2008,27(2):27～30
EDIBLEFUNGIOFCHINA
CN53-1054/Q ISSN1003-8310
表3 煮沸处理绒柄牛肝菌HPLC图谱峰的保留时间和峰面积
Tab.3 RetaintimeandpeakareaofBoletustomentipesbyboiling
图1.新鲜绒柄牛肝菌的HPLC图谱
Fig.1HPLCchartoffreshBoletustomentipes
图谱,利用相对保留时间、峰的数量变化来评价新鲜的绒
柄牛肝菌色谱峰与处理后色谱峰的变化,可为生产中提高
绒柄牛肝菌的安全性、保障消费者的健康提供依据。
2.1新鲜绒柄牛肝菌HPLC图谱
将新鲜的绒柄牛肝菌处理后上HPLC进行分析,得到
的结果见图1。
将图 1的色谱峰按从左到右的顺序分别命名为峰 1～
峰6。根据 HPLC分离的基本原理可知,在设定的实验条
件下从新鲜绒柄牛肝菌中可分离出6种成分,这6种成分
的保留时间和峰面积见表1。
2.2煮沸、烘干处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
绒柄牛肝菌经加水煮沸 30min、于95℃烘干后仍然采
用最大耐受剂量灌胃小鼠,小鼠无瘫软的情况出现[3],即通
过加热处理可使引起实验小鼠瘫软的化学成分破坏或转
化,毒作用有一定程度减弱。
将经过上述处理的绒柄牛肝菌滤液上 HPLC分析,得
到的结果见图2。
将图2的色谱峰按从左到右的顺序分别命名为峰1～峰
5,可知在设定的实验条件下,经煮沸、烘干处理的绒柄
牛肝菌可分离出5种成分,这5种成分的保留时间和峰面
积见表2。
由表2可知,经煮沸、烘干处理后的绒柄牛肝菌,在
HPLC上峰1～峰5的保留时间与未经处理的绒柄牛肝菌比
较,除峰4的面积占原总面积的百分率增大了约 1倍外,
未发生其它明显变化,表明处理前后上述成分基本无变
化。但处理后峰 6(保留时间为 36.44min)消失,表明代
表峰6的成分被挥发除去或被转化。已进行的小鼠急性毒
性实验证明,经过上述处理的绒柄牛肝菌能使小鼠瘫软的
现象消失,表明峰6代表的成分是与绒柄牛肝菌中能使小
鼠瘫软的物质有密切的相关性。
为了寻找更简便的破坏绒柄牛肝菌中使小鼠瘫软的物
质的方法,将绒柄牛肝菌用其它方式热处理后,研究它们
的HPLC图谱。
2.3煮沸处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
将经过煮沸处理的绒柄牛肝菌滤液上 HPLC进行分
析,实验结果见图3。
将图 3的色谱峰按从左到右的顺序分别命名为峰 1～
峰5,在设定的实验条件下,煮沸处理的绒柄牛肝菌可分
离出5种成分,这5种成分的保留时间和峰面积见表3。
由实验结果可知,经煮沸处理后的绒柄牛肝菌,在
HPLC上峰1～峰5的保留时间与未加热处理的绒柄牛肝菌
比较,未发生明显变化,表明处理前后上述物质基本无变
表1.新鲜绒柄牛肝菌HPLC峰的保留时间和峰面积
Tab.1RetaintimeandpeakareaoffreshBoletustomentipes
图2.煮沸、烘干处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
Fig.2.HPLCchartofBoletustomentipesbyboilinganddrying
表2 煮沸、烘干处理绒柄牛肝菌HPLC图谱峰的保留时间和峰面积
Tab.2 RetaintimeandpeakareaofBoletustomentipesbyboiling
anddrying
注:由于保留时间在5min以前的峰分离不完全,将它们整体
命名为峰1。
中国食用菌 EDIBLEFUNGIOFCHINA Vol.27 No.228
郭永红等:不同热处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱分析
图3 煮沸处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
Fig.3 HPLCchartofBoletustomentipesbyboiling
表5 微波加热处理绒柄牛肝菌HPLC图谱峰的保留时间和峰面积
Tab.5 RetaintimeandpeakareaofBoletustomentipesbymicrowave
图4.蒸汽处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
Fig.4HPLCchartofBoletustomentipesbysteam
表4 蒸汽处理绒柄牛肝菌HPLC图谱峰的保留时间和峰面积
Tab.4.RetaintimeandpeakareaofBoletustomentipesbysteam
图5.微波加热处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
Fig.5HPLCchartofBoletustomentipesbymicrowave
化。处理后的峰 6(保留时间为 36.44min)消失,进一步
证明峰6代表的成分与绒柄牛肝菌中能使小鼠瘫软的物质
有很密切相关,煮沸也可以使它们破坏或转化成在此色谱
条件下不能分离到的成分。
2.4 蒸气处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
将经过蒸汽处理的绒柄牛肝菌的滤液上 HPLC进行分
析,得到的实验结果见图4。
将图 4的色谱峰按从左到右的顺序分别命名为峰 1～
峰5,可知在设定的实验条件下,煮沸处理的绒柄牛肝菌
可分离出约5种成分,这5种成分的保留时间和峰面积见
表4。
由实验结果可知,经蒸汽加热处理后的绒柄牛肝菌,
在 HPLC上峰 1～峰 5的保留时间与未加热处理的绒柄牛
肝菌比较,基本未发生明显变化,表明处理前后上述物质
基本无变化。处理后峰 6(保留时间为 36.44min)消失,
进一步证明峰6代表的成分与绒柄牛肝菌中能使小鼠瘫软
的物质有很密切的相关性,蒸汽加热也可以使它们破坏或
转化成在此色谱条件下不能分离到的成分。
2.5微波处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
将经过微波加热处理的绒柄牛肝菌的滤液上 HPLC进
行分析,得到的实验结果见图5。
将图 5的色谱峰按从左到右的顺序分别命名为峰 1～
峰5,可知在设定的实验条件下,煮沸处理的绒柄牛肝菌
可分离出5种成分,这5种成分的保留时间和峰面积见表
5。
由实验结果可知,经微波加热处理后的绒柄牛肝菌,
在HPLC上峰1～峰5的保留时间与未加热处理的绒柄牛肝
菌比较,基本未发生变化,表明处理前后上述物质无变
化。处理后的峰 6(保留时间为 36.44min)消失,进一步
证明峰6代表的成分与绒柄牛肝菌中能使小鼠瘫软的物质
有密切的相关性,微波加热也可以使它们破坏或转化成在
此色谱条件下不能分离到的成分。
2.6烘干处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
将经过烘干处理的绒柄牛肝菌的滤液上 HPLC进行分
析,得到的实验结果见图6。
将图6的色谱峰按从左到右的顺序分别命名,可知在
设定的实验条件下,95℃烘干处理的绒柄牛肝菌只可分离
出3种成分,这3种成分的保留时间和峰面积见表6。
由实验结果可知,经 95℃烘干处理后的绒柄牛肝菌,
在 HPLC上峰 1、峰 2、峰 5的保留时间与未加热处理的
绒柄牛肝菌比较,基本未发生变化,表明处理前后上述物
注:将保留时间在5min以前的峰整体命名为峰1。
注:将保留时间在5min以前的峰整体命名为峰1。
注:由于保留时间在 5min以前的峰分离不完全,将它们
整体命名峰1。
第27卷 第2期 29
图6 烘干加热处理的绒柄牛肝菌HPLC图谱
Fig.6 HPLCchartofBoletustomentipesbydrying
表6 烘干加热处理绒柄牛肝菌HPLC图谱峰的保留时间和峰面积
Tab.6 RetaintimeandpeakareaofBoletustomentipesbydrying
图7各种热处理的绒柄牛肝菌色谱峰与保留时间关系图
Fig.7RelationofpeakandretaintimeofBoletustomentipesbydif-
ferentheattreated
时
间
/m
in
峰1 峰3 峰4 峰5 峰6
图8各种热处理的绒柄牛肝菌色谱峰与峰面积关系图
Fig.8RelationofpeakandpeakareaofBoletustomentipesby
diferentheattreated
质基本无变化。但处理后的峰3、峰4、峰6(保留时间分
别为 8.34min、15.08min、36.44min)消失,表明 95℃烘干
处理可使绒柄牛肝菌的成分有较大的变化,这些成分可能
被挥发或转化成其他成分。峰6代表的与新鲜绒柄牛肝菌
中能使小鼠瘫软密切相关的物质可被破坏或转化成在此色
谱条件下不能分离到的成分。
图7、图 8更清楚的展示出各种热处理对绒柄牛肝菌
中峰6的破坏或转化。
由上述研究结果可知,存在于新鲜绒柄牛肝菌中、大
剂量灌喂实验小鼠能引起小鼠瘫软的成分的耐热性不好,
只要经过一定时间的热处理,即可将其破坏。因此在生产
中可将采集到的绒柄牛肝菌鲜品经高温干燥后出售或在鲜
品出售时告之消费者要较长时间炖煮后才能食用,而且食
用量不能过大,对于保证消费者的安全具有重要意义。
采用HPLC图谱对绒柄牛肝菌的质量进行鉴定,具有
一定的客观性和科学性。但要将它们作为一种标准方法加
以应用,还需要在不同的地区采集更多的绒柄牛肝菌样本
进行比较探索。通过大量的研究后,生产厂商可通过
HPLC图谱监测绒柄牛肝菌中的引起小鼠瘫软的成分是否
得到破坏或转化,从而提高产品的安全性。
参考文献
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注:将保留时间在5min以前的峰整体命名为峰1。
AnalysisHPLCPrintsofBoletustomentipesbyDiferentHeatTreatment
GUOYong-hong1,ZHUPing1, ZHAOBo2, DINGXiao-wen2, GUIMing-ying1
(1.KunmingEdibleFungiInstitute,Kunming650223;2.ColegeofFoodScience,SouthwestUniversity,Chongqing 400716)
Abstract:TosetuptheHPLCprintsofBoletustomentipesbydiferentheattreatmentfordeterminationthequalityofthefungi.
Method:HPLC,gradienlelution,260nmwavelength.RESULTS:Undertheselectedchromatographicconditions,aseriesofgoodprintof
Boletustomentipeswereobtained.ThesubstanceinfreshBoletustomentipes,whichcouldbenervaltoxicitytoexperimentalrats,could
bedestroyedbyheattreatment.Itsspecialpeakdisappeared.CONCLUSION:ThemethodofHPLCcouldbeusedtocheckthesafetyof
Boletustomentipes.
Keywords:Boletustomentipes,HPLCchart,Heattreatment
40
0
5
10
15
20
25
30
35
原样
处理5
处理4
处理3
处理2
处理1
峰1 峰3 峰4 峰5 峰6
原样
处理5
处理4
处理3
处理2
处理1
0
100000000
200000000
300000000
400000000
500000000
600000000
800000000
900000000
700000000
峰
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