全 文 ：藤茶是葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄 Am-
pelopsis grossedentata 的嫩茎叶，主要分布于广西、
湖南、福建等地 ［1］。 藤茶色绿起白霜，具有清热解
毒、抗菌消炎、祛风除湿、强筋健骨的功效，常用于
心脑血管疾病、高血压等病证的防治 ［2-4］。 藤茶中
含有大量的黄酮类化合物 ， 并以二氢杨梅素
（DMY）为主。 二氢杨梅素具有抗衰老、抗高血压、
保肝护肝等功能 ［5］。 目前，测定藤茶中二氢杨梅素
含量的方法很多 ［6-8］，产地主要来自贵州、湖南、广
西， 我们用 HPLC 法对广西桂林产藤茶中的二氢
杨梅素的含量进行了测定。
1 仪器与试药
1.1 试药 藤茶（广西桂林干燥药材）；二氢杨梅
素标准对照品（中国食品药品检定研究院）；甲醇、
乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化铁为分析纯；
甲醇、磷酸为色谱纯；实验用水为超纯水。
1.2 仪器 戴安 Ultimate 3000 高效液相色谱分
析仪（美国 Dionex 公司）；鼓风干燥箱（上海精宏
实验设备有限公司）；KQ-500DE 型数控超声波清
洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ZF-2 型三用紫
外仪分析仪（上海市安亭电子仪器厂）；预制薄层
板（青岛海洋化工厂分厂）。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备 取藤茶 20 mg， 料液比
1∶35，加入甲醇超声提取 30 min，3 次，过滤浓缩，
加入甲醇定容至 10 mL，0.45 μm 滤膜过滤， 得供
试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取二氢杨梅素
对照品 0.0131 g，置 10 mL 瓶中，加甲醇定容，制
成含二氢杨梅素 1.31 mg ／mL 的对照品溶液。
2.3 薄层鉴别 吸取供试品溶液、二氢杨梅素对
照品溶液 10 μL 分别点于同一硅胶 G 板上， 以甲
苯-乙酸乙酯-甲酸（10∶8∶5）为展开剂，展开，取出，
晾干，喷以 3%FeCl3乙醇溶液，在检测波长 254 nm
处检视， 供试品色谱在与对照品相应的位置上显
相同颜色的斑点。
2.4 色谱条件 色谱柱：迪马 C18 柱 （250 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（35∶
65）；流速：0.8 mL ／min；柱温：30℃；检测波长：290
nm；进样量：5 μL；分析时间：20 min。
2.5 方法学考察
2.5.1 系统适用性试验 按 2.1 项制备供试品溶
液，按 2.4项色谱条件测定峰面积，二氢杨梅素对照
品溶液和藤茶供试品溶液的色谱图，见图 1、图 2。
2.5.2 线性关系考察 精密吸取二氢杨梅素对照
品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL 至 1 mL 瓶中，加甲
醇稀释至刻度，摇匀，得不同浓度的对照品溶液。
取上述对照品溶液，按 2.4 项色谱条件进行测定，
摘要： 目的 测定藤茶的二氢杨梅素含量。 方法 采用高效液相色谱法，色谱柱：迪马 C18
柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05 %磷酸溶液（35∶65）；流速：0.8 mL ／min；柱温：30℃；
检测波长：290 nm；进样量：5 μL。 结果 二氢杨梅素在 1.31～6.55 μg 呈现良好的线性关系，样品
溶液在 24 h 内稳定，平均加样回收率为 96.93%。 结论 HPLC 法精密度高，重复性较好。
关键词：藤茶；二氢杨梅素；高效液相色谱法
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2014）03-0044-03
HPLC法测定藤茶的二氢杨梅素含量
林诗瑶，阙金花，李 煌，徐 伟，王智强，沙 玫
（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）
收稿日期：2014-03-17
基金项目：福建省科技厅资助课题（2012D013），福建省教育厅资助课题（JA11139）
作者简介：林诗瑶（1991—），女，2013 级中药学专业硕士研究生，主要从事中药活性成分及质量标准研究。
通讯作者：沙玫（1963—），女，教授。 E-mail：332618602@qq.com
信
号
强
度
／m
V
保留时间 ／min
图 1 二氢杨梅素对照品 HPLC 图
20
10
0
福建中医药大学学报 2014 年 6 月 第 24 卷 第 3 期
Journal of Fujian University of TCM June 2014，24 （3）44
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002940
以峰面积（Y）对进样量（X）进行线性回归，得线性
回归方程：
Y＝40.333X－0.0901 r＝0.9998
结果表明二氢杨梅素在 1.31～6.55 μg 范围
内线性关系良好。
2.5.3 精密度试验 精密吸取 2.2 项对照品溶
液，按 2.4 项色谱条件连续进样 5 次，每次进样5
μL， 测定二氢杨梅素的峰面积， 计算得 RSD 为
0.82%。
2.5.4 稳定性试验 精密吸取 2.2 项的对照品溶
液，避强光放置，按 2.4 项色谱条件，每隔 2 h 进
样测定 1 次，每次进样 5 μL，测定二氢杨梅素的
峰面积，结果表明在 24 h 内测得的峰面积无明显
变化，RSD 为 2.50%。
2.5.5 重复性试验 精密称取藤茶 6 份， 按 2.1
项制备供试品溶液， 按 2.4 项色谱条件测定峰面
积，结果显示重复性较好，RSD 为 1.90 %。
2.5.6 加样回收率试验 精密称取已知二氢杨梅
素含量的藤茶 20 mg 9份，分别加入 1.31 mg ／mL二
氢杨梅素对照品 1.80、2.25、2.70 mL，按 2.1 项、2.4
项色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表 1。
2.6 样品含量测定 精密称取 20 mg 藤茶样品 6
份，按 2.1 项方法制备供试品溶液，按 2.4 项色谱
条件进行测定， 结果藤茶中二氢杨梅素的含量为
29.55 %。
3 讨 论
3.1 色谱条件的确定 经 DAD 全波长扫描后，
二氢杨梅素对照品在 290 nm 处有最大吸收，故确
定 290 nm 作为二氢杨梅素的检测波长。实验考察
甲醇 ∶0.05%磷酸流动相的比例 （25∶75、35∶65、40∶
60、55∶45、90∶10），结果显示，甲醇 ∶0.05%磷酸流动
相的比例为 35∶65时，出峰时间短，且无杂质干扰。
3.2 供试品溶液的制备 实验中分别考察了提
取溶剂、料液比、提取时间、提取次数对样品提取
率的影响，提取溶剂体积分数太低时，所提取的水
溶性杂质较多；料液比增加时，二氢杨梅素提取量
也在不断增加。当达到饱和时，既使继续提高料液
比，所提取的二氢杨梅素不会继续增加反而下降。
综合考虑节能环保等因素， 最终确定供试品溶液
的制备方法为：藤茶 20 mg，以料液比 1∶35 加入甲
醇超声 30 min，重复提取 3 次。
参考文献：
［1］ 中国科学院植物研究所 . 中国高等植物图鉴 ［M］. 北京：科
学出版社，1983：349.
［2］ 李燕婧，钟正贤. 浅谈藤茶的研究与应用［J］. 中国民族民间
医药杂志，2013，22（16）：26-27.
［3］ 许丽嘉，马培，肖伟，等 . 别样茶-藤茶的古今应用历史初步
调查［J］. 中国现代中药，2012，14（4）：62-66.
［4］ 肖晓莹，陈继承，庞杰 . 藤茶的功能性及黄酮类化合物提取
研究进展［J］. 热带作物学报，2012，33（8）：1522-1527.
［5］ 杨志坚，袁弟顺，陈凌华，等. 藤茶中二氢杨梅素的研究概况
［J］. 中国茶叶加工，2010（1）：20-22.
［6］ 陈文生，洪亮，褚洪潮，等 . HPLC 测定不同方法提取野生藤
茶中的二氢杨梅素 ［J］. 贵州师范大学学报 ：自然科学版 ，
2013，31（5）：72-75.
［7］ 樊兰兰，何丽丽，韦玮，等 . UPLC 法测定藤茶中二氢杨梅素
与杨梅素的含量及其热稳定性［J］. 中国药房，2012，23（35）：
3316-3319.
［8］ 陈帅，郁建平. 藤茶总黄酮超声提取工艺研究［J］. 山地农业
生物学报，2010，29（5）：440-444.
表 1 二氢杨梅素的加样回收率（n＝9）
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品称样量 ／ g
0.02074
0.02086
0.02027
0.02069
0.02021
0.02076
0.02070
0.02038
0.02087
样品含量 ／ mg
6.1287
6.1641
5.9898
6.1139
5.9720
6.1346
6.1169
6.0223
6.1671
加入量 ／ mg
2.3580
2.3580
2.3580
2.9475
2.9475
2.9475
3.5370
3.5370
3.5370
测得量 ／ mg
8.4192
8.4519
8.1992
8.9083
8.8144
9.0521
9.6867
9.3872
9.6410
回收率 ／ %
97.14
97.02
93.70
94.81
96.43
98.98
100.93
95.13
98.22
平均回收率 ／ %
96.93
RSD ／ %
2.32
50
20
0
-5
信
号
强
度
／m
V
保留时间 ／min
图 2 藤茶样品 HPLC 图
0 5 10 15 20
第 3期 林诗瑶等：HPLC 法测定藤茶的二氢杨梅素含量 45
Determination of Dihydromyricetin in Ampelopsis Grossedentata by HPLC
LIN Shiyao, QUE Jinhua, LI Huang, et al
(College of Pharmacy, FUTCM, Fuzhou, Fujian 350122, China)
ABSTRACT: Objective To establish a HPLC method for the determination of Dihydromyricetin in
Ampelopsis Grossedentata. Methods The separation was performed on Diamonsil C18 (4.6×250 mm, 5 μm)
with gradient elution of methanol-0.05% phosphoric acid solution (35:65) as mobile phase, flow rate was 0.8
mL·min-1, the column temperature was 30℃, the detective wavelength was 290 nm, and the sample size was 5
μL. Results The linear range of Dihydromyricetin was 1.31-6.55 μg, the average recovery was 96.93%.
Conclusion The method is accurate and reproducible.
KEY WORDS: Ampelopsis Grossedentata; Dihydromyricetin; HPLC; content
关键词：夏枯草乙醇提取物；结肠癌；凋亡；GenomeLabTM遗传分析系统
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2014）03-0046-03
收稿日期：2013-12-24
基金项目：福建省教育厅资助课题（JA13157），福建中医药大学校管课题（X2012009）
作者简介：方翌（1986—），女，生物学硕士，助理实验师，主要从事中药抗肿瘤的作用机制研究。
通讯作者：彭军（1969—），男，教授。 E-mail：pjunlab@hotmail.com
夏枯草 Prunella vulgaris L.属唇形目唇形科植
物，性味苦、辛、寒，具有清火明目、抗氧化、抗菌、
抗感染的功效 ［1］，能抗胰腺癌、甲状腺癌等多种恶
性肿瘤 ［2-3］。 但在结肠癌的临床应用较少，未见用
GenomeLabTM遗传分析系统（GeXP 系统）分析夏枯
草抗肿瘤机制的研究。 我们以人结肠癌细胞株
HCT-8 为研究对象， 用 GeXP 系统研究夏枯草诱
导人结肠癌细胞 HCT-8 的凋亡作用。
1 材 料
1.1 药物与细胞株 夏枯草购于福建中医药大
学国医堂中药房；结肠癌细胞株 HCT-8（南京凯基
生物科技发展有限公司）。
1.2 主要试剂 胎牛血清 （美国 Gibco 公司 ）；
RPMI-1640 培养基、胰蛋白酶、青霉素、链霉素（美
国 Hyclone 公司）；MTT 粉末、DNA 聚合酶 （美国
Sigma 公司）；GeXP 基因表达试剂盒、CEQ （tm）分
离凝胶（美国 Beckman Coulter 公司）。
1.3 主要仪器 TDL-50B 低速离心机（湖南湘仪
实验仪器开发有限公司 ）；RE-520A 旋转蒸发仪
（上海亚荣生化仪器厂）；蒸汽灭菌器（上海博迅有
限公司）；CO2 培养箱 （香港利康仪器设备有限公
司）；超净工作台（苏州安泰仪器设备有限公司）；
ELX800 酶标仪（美国基因有限公司）；超微量高精
度紫外 ／可见光分光光度计 （美国 Thermo 公司）；
PCR 仪 （美国 Bio-Rad 公司）；GeXP 系统 （美国
Beckman Coulter 公司）。
2 方 法
2.1 制备夏枯草乙醇提取物 （EESP） 取夏枯草
全草进行研磨，1L 的 85%乙醇溶解 100 g 粉末，过
滤、回流收集粗提液，在旋转蒸发仪中浓缩并真空
干燥获得干粉。 将干粉溶解于二甲基亚砜（DM-
SO），得 0.6 g ／mL 的母液，高压灭菌，保存于-20℃
冰箱中。 实验时用培养基稀释母液，获得干预液，
DMSO 最终浓度≤0.3%。
2.2 细胞培养 以 RPMI-1640 完全培养基 （含
10%胎牛血清 、0.1 g ／mL 链霉素、100 U ／mL 青霉
夏枯草诱导人结肠癌细胞 HCT-8的凋亡
方 翌，张 铃，林 薇，彭 军
（福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350122）
≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤
福建中医药大学学报 2014 年 6 月 第 24 卷 第 3 期
Journal of Fujian University of TCM June 2014，24 （3）46
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002941