全 文 ：H P L C 法测定藤梨根中表儿茶素的含量 “
赫 军* ,马秉智,梁莹莹, 王晓雪 ,刘 晓气中日友好医院药学部 ,北京 10 0029 )
中图分类号 R 2 8 4 . 一; R g 一7 文献标志码 A 文章编号 一0 0一 0 4 0 8 ( 2 0一6 ) 0 3一 0 3 7 8 一 0 3
D O I 1 0
.
6 0 3 9 j/
.
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.
I OO I
一
0 4 0 8
.
2 0 1 6
.
0 3
.
3 1
摘 要 目的 : 建立测 定藤梨根中表儿茶素含量的方法 。 方法 : 采用 高效液相 色谱法 。 色谱柱 为 Kr o m as il C l。 , 流动相为 乙
睛一 0 . 2 % 乙酸溶液 ( 1 5 : 85 , V/ V) , 流速为 1 . 0 m lm/ in ,检测波长为 Z 10 nm ,柱温为 25 ℃ ,进样量为 1 0 贝。 结 果 :表儿茶素的检测质量
浓度线性范围为 10 . 47 一 167 . 52 雌m/ 1 ( : 一 0 . 99 9 ) ; 精密度 、 稳定性 、 重复性试验的 R S D < 2% ;加样回收率为 98 . 07 % 一 101 . 71 % ,
R s D 一 1 . 3 9 % ( n 一 6 ) 。 结论 :该方法操作简便 、 结果准确 ,适用于藤梨根中表儿茶素的含量测定 。
关键词 高效液相色谱法 ;藤梨根 ;表儿茶素 ;含量测定
C o n t e n t D ct e r m i
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一
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gr u at b y H P L C
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,
M A B i n g众 i , L IA N G iY n g y i n g ,认叭 N G X i a o xu e , L IU X i a o (D e p t . o f p h amr ac y
,
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0 m lm/ i
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.
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.
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.
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K EY 、 VO R D S I开L C ; A e 百n i口i以 a啥 u at ; L 一 e P i e aet e h i n ; C o nt ent dct emr in iat o n
并计算连翘量含量 ,结果见表 2 。
3 讨论
本试验中 T L C研究所得的色谱斑点清晰 ,供试品与对照
品色谱对应良好 ,且阴性对照无干扰 , 可作为本品的鉴别方
法。 H PL C 条件分离效果好 ,峰形对称 ,保留时间适宜 ,杂质峰
达到基线分离 ,阴性无干扰 , 可用于本品的含量测定 。 本试验
也曾对方中另外几味药 (夏枯草 、 乌梅 、 获神等 )进行 T L c 鉴
别 ,结果表明 , 以上 3种药材的阴性对照与对照药材或对照品
均在相同位置出现相同颜色的斑点 ,考虑积壳 、 连翘在处方中
药理作用甚为明显 ,所以采用 T L C 法对本品中的积壳 、 连翘进
行定性鉴别。
在色谱条件的选取中 ,曾考虑用双波长检测法 , 用相同的
流动相乙睛 一水 ( 2 3 : 7 , V/ V) 时 , 主峰袖皮普不能完全分开 ; 流
动相为乙睛 一水 ( 25 : 75 月刀习时 ,在连翘普出峰的位置有干扰 ;
流动相为乙睛一水 ( 20 : 80 , V/ V) 时 ,连翘普出峰时间太晚。 也曾
考虑用梯度洗脱的方法 ,但效果不是很明显 。 最后确定两种
成分以不同方法检测。
综上所述 ,本研究所建标准可用于舒痛安 I 号胶囊的质
量控制。
A 基金项目 : 北京市自然科学基金资助项目 ( N o . 71 5 4 2 3 7 ) ;中日
友好医院青年课题 (N o . Z o 14 一 1一Q N 一 2 )
* 主管药师 , 博士 。 研究方向 : 中药药效物质基础及质量标准 。
E
一
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:
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# 通信作者 : 副主任药师 , 硕士 。 研究方向 : 医院药学 。 电话 :
0 1 0
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8 4 2 0 6 0 2 0
。
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一
m a i l
:
l i u x i a o @ l i
u x i ao 刃 o m
参考文献
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: 6 0
.
(收稿 日期 : 2 0 1 5一 0 9一 2 2 修回日期 : 20 1 5一 1 1一 1 9 )
(编辑 : 张 静 )
3 7 8
·
C h in a P h
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a e y Z O1 6 Vo l
.
2 7 N o
.
3 中国药房 2 0 1 6年第 2 7卷第 3期
藤梨根为狐猴桃科狐猴桃属植物中华狐猴桃 ( A“ i ni d ia
ch ln 叨l sPl anc h
.
) 的干燥根 , 主要产于福建 、 浙江等省 。 其性
凉 ,味苦 、 涩 ,归肾 、 胃经 ;具有清热解毒 、 活血散结 、祛风利湿
之功效 ,临床上常用于治疗胃癌 、 乳腺癌 、 风湿性关节炎 、 淋巴
性结核 、跌扑损伤 、痈疖等疾病 1[] 。 现代药理学研究表明 ,藤梨
根在抗肿瘤方面具有较好的药理活性 3[] 。 本课题组前期对藤
梨根水提取物中的化学成分进行了系统研究 ,发现藤梨根水
提取物中含有大量的黄烷类 、 绿原酸类和香豆素类成分阶习 。
但目前尚无有关藤梨根中此 3种成分含量的报道。 因此 . 本课
题组采用高效液相色谱临开L )C 法对藤梨根中黄烷类代表成
分表儿茶素进行含量测定 , 旨在为藤梨根质量控制方法的完
善提供科学依据 。
1 材料
1
.
1 仪器
1 2 6 0 型 PH L C 仪 , 包括 G 一 1 3 2 2C 型在线真空脱气机 、
G
一
1 3 l lc 型高压四元泵 、 G 一 4 2 12 B 型二极管阵列检测器 ( D A D )
及 e h e m st iat o n 色谱工作站 (美国 A g i le nt 公司 ) ; B SA 4 2 3 5 一C W
型电子天平 (德国 S art or in s公司 ) ; K Q一 30 D E 型数控超声波清
洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ,功率 : 30 w ,频率 : 40 k l l Z ) 。
L Z 药品与试剂
藤梨根 [北京华逸中药工程技术开发中心 ,产地 : 四川 ,批
号 : 2 0 9 0 61 ; 北 京卫仁 中药饮片 厂 , 产地 : 浙江 , 批 号 :
1 13 6 1 2 1 0 1 ;北京同仁堂 (毫州 )饮片有限责任公司 ,产地 : 河
北 ,批号 : 0 1 0 0 3 28 7 ] ,均经中日友好医院中药库唐永和药师鉴
定为称猴桃科称猴桃属植物中华称猴桃的干燥根 ; 表儿茶素
对照品 (中日友好医院自制 ,纯度 > 98 % ) ; 乙睛为色谱纯 ,其
他试剂均为分析纯 ,水为娃哈哈纯净水 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱 : Kr o m a isI C 。 ( 250 ~
火 4
.
6
~
,
5脚 ) ;流动相 : 乙
睛 一 0 . 2 % 乙酸溶液 (巧 : 85 , V/ V) ; 流速 : 1 . 0 m F n l in ;检测波长 :
2 10 nm
;柱温 : 25 ℃ ;进样量 : 1 0 川。 在上述色谱条件下 ,表儿
茶素峰的保留时间为 8 . 8 m in ,各组分分离良好 ,其他成分对测
定无干扰色谱 ,分离度 > 1、 5 ,理论板数以表儿茶素峰计不低于
3 0 0 0
。 色谱见图一。
.2 2 溶液的制备
2
.
2
.
1 对照品溶液 精密称取表儿茶素对照品 10 . 47 m g ,置于
50 m l量瓶中 , 用 50 % 甲醇溶解并定容 ,摇匀 , 即得 。
2
.
2
.
2 供试品溶液 取样品细粉 1 . 0 9 ,精密称定 ,置于 10 ml
锥形瓶中 ,精密加人 50 % 甲醇 50 m l ,称定质量 ,超声 (功率 :
3 0 0 w
,频率 : 4 O k l l Z )提取 3 0 m in ,放冷 ,再称定质量 ,用 5 0 %
甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 , 即得。
2
.
2
.
3 空 白对照溶液 精密移取 50 % 甲醇 50 m l ,置于 10 0 m l
锥形瓶中 ,称定质量 ,超声 (功率 : 30 W ,频率 : 40 kH z )提取
3 0 m in
,放冷 ,再称定质量 , 用 50 % 甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,
滤过 ,取续滤液 , 即得 。
上口V已
1 000
750
500
遥 259
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一 250
一 500
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图 1 高效液相色谱图
A
.空白对照 ; B .对照品 ; c 供试品 ; 1 .表儿茶素
F ig 1 H P L C c h or m a t o g r a m s
A
.
b lan k e o nt r o l : B
.
r e fe r e n c e s u b s t an
e e : C
.
t e s t s am P l
e : 1
.五一 e Pi e at e c h i n
.2 3 线性关系考察
分别精密吸取 “ 2 . 2 . 1” 项下表儿茶素对照品溶液 0 . 5 、 1、 2、
4
、
s ml
,置于 10 m l量瓶中 ,用 50 % 甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制
成系列对照品溶液 。 分别精密吸取系列对照品溶液各 10 川 ,
按 “ 2 . 1 ” 项下色谱条件进样测定 ,记录峰面积。 以表儿茶素的
峰面积 (力为纵坐标 、 质量浓度 (x ,雌m/ 1)为横坐标 ,进行线性
回归 ,得回归方程为夕一 7 5 . 0 7 6对 1 8 0 . 3 5 ( r 一 0 . 9 9 9 9 ) 。 结果
表明 , 表儿茶素的检测质量浓度线性范围为 10 . 47 一 167 . 52
卜gm/ l 。
.2 4 精密度试验
精密吸取 “ 2 . 2 . 1 ”项下表儿茶素对照品溶液适量 ,按 “ 2 . 1”
项下色谱条件进样测定 ,记录峰面积 。 结果 , R s D 一 1 . 35 %
(
n一 6 ) ,表明仪器精密度良好 。
.2 5 稳定性试验
取样品 (批号 : 20 9 0 6 1 )细粉适量 ,按 “ 2 . 2 . 2 ” 项下方法配制
供试品溶液 ,分别于放置 O 、 2 、 4 、 6 、 8 、 1 0 、 12 h 时按 “ 2 . 1 ” 项下色
谱条件进样测定并记录峰面积 。 结果 , R s D 一 0 . 90 % ( n ~ 7 ) ,
表明供试品溶液在 12 h 内稳定性良好。
.2 6 重复性试验
取样品 (批号 : 20 9 061 )细粉适量 ,按 “ 2 . 2 .犷项下方法制备
供试品溶液 6份 ,按 “ 2 . 1 ” 项下色谱条件进样测定 , 记录峰面
积 。 结果 , R s D 一 1 . 54 % ( n 一 6 ) ,表明本方法重复性良好 。
2
.
7 加样回收率试验
精密称取已知表儿茶素含量的样品 (批号 : 2 0 9 0 6 1 )细粉 6
份 ,每份 0 . 5 9 ,分别精密加人质量浓度为 0 . 209 0 m gm/ 1的表儿
茶素对照品溶液 s ml ,按 “ 2 . 2 . 2 ” 项下方法制备供试品溶液 ,再
按 “ 2 . 1 ” 项下色谱条件进样测定 ,记录峰面积并计算加样回收
率 ,结果见表 1 。
.2 8 样品含量测定
分别称取不 同产地和批号 的样品细粉适量 , 各 3 份 , 按
,’2 . 2 . 2” 项下方法制备供试品溶液 ,再按 “ 2 . 1 ” 项下色谱条件进
中国药房 2 0 2 6年第 2 7卷第 3期 Ch in a p七a n u a 四 2 0 1 6 V of _ 2 7 N o _ 3 · 3 79
样测定 ,按外标法计算样品中表儿茶素的含量 ,结果见表 2 。
表 1 加样回收率试验结果 ( n 一 6)
五 b 1 R e s u 一t s o r s a m p一e er c o v e仃 t e s t ( n 一 6 )
样品含量, m g
1 029 1
1 033 2
1 024 0
1 065 0
1 053 7
1 031 2
加人量, m g 测得量, m g 加样回收率, % 平均加样回收率, % R犯 ,%
1 045 0
1 045 0
1 045 0
1 045 0
1 045 0
1 045 0
2 058 7
2 0715
2 074 6
2 089 8
2 116 6
2 082 3
99 80 1 39
范围对待测成分进行紫外扫描 ,结果表儿茶素在 Z10 nm 波长
处有较大吸收 ,且基线平稳 、 图谱分离较好 。 故选择 2 10 nm 作
为检测波长 。
.3 4 启示
从含量测定结果可以看出 , 3个不同产地的藤梨根药材中
表儿茶素的含量在 0 . 54 一 3 . 25 m g g/ 之间 , 不同产地样品表儿
茶素含量相差较大 , 可在一定程度上说明地域因素对其影响
明显 。
综上所述 ,本方法操作简便 、结果准确 ,适用于藤梨根中
表儿茶素的含量测定 。
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(收稿 日期 : 2 0 1 5一 0 6一 1 2 修回日期 : 20 1 5一 0 9 一 1 2 )
(编辑 : 刘 柳 )
53肠盯抖刀% 58”刚10
表 2 样品含量测定结果 (n 一 3)
aT b 2 R e s u lt s o f c o n t e n t s d e t e r m i n a t i o n o f s a m p le s (n 一 3 )
样品产地 表儿茶素髓 , m到:
四川 2 04
浙江 0 54
刚 t 3 25
3 讨论
3
.
1 测定指标的选择
本课题组前期从藤梨根药材的水提取物中分离鉴定了多
个黄烷类单体成分 ,其中分离得到的表儿茶素较多13一 4] 。 且表
儿茶素具有多种药理活性 ,如抗肿瘤 、 抗氧化等阶 7] ,是藤梨根
发挥药理作用的主要活性成分之一 。 同时 ,经过稳定性考察
发现 ,表儿茶素具有较好的稳定性 ,故本研究以黄烷类代表成
分表儿茶素含量为测定指标来控制藤梨根药材的质量 。
3
.
2 提取方法的选择
在供试品溶液制备方面 ,笔者查阅相关文献 ,选取了 50 %
甲醇作为提取溶剂 l吕一刃 , 同时对提取方法 (超声与回流 )和提取
时间 ( 3 0与 60 m in )进行了考察 。 最终 ,采用 50 % 甲醇 、 超声
处理时间为 3 0 m in 作为提取方法对藤梨根中表儿茶素进行
提取 。
3
.
3 色谱条件的选择
表儿茶素结构中具有多个酚经基 ,在溶剂中以游离型和
有机酸盐的形式共同存在 ,加人少量乙酸可使有机酸盐转化
为游离酸 。 因此 ,经预试验验证最终选用乙睛一0 . 2 % 乙酸溶液
( 1 5
:
85
,
V/ V) 作为流动相 ,且此流动相制备简便 ,样品各组分
分离度亦较好 。 本课题组还曾采用 D A D 在 1 90 一 4 0 nm 波长
关于长治市三宝生化药业有限公司等4家企业复方肝浸膏片(胶囊)检出高含量铭的通告(2015年第106号)
近 日 , 在国家药品抽验中 ,经西安市食品药品检验所检
验 ,发现标示为长治市三宝生化药业有限公司生产的复方肝
浸膏片 (8批 ) 、 山东中泰药业有限公司生产的复方肝浸膏片 ( 3
批 ) 、 陕西博森生物制药股份集团有限公司生产的复方肝浸膏
胶囊 (2批 ) 、 重庆申高生化制药股份有限公司生产的复方肝浸
膏胶囊 ( 1批 )检出含有铬成分 (胶囊壳铬含量符合规定 ) ,有 10
个批次检出值在 30 一 1 20 O m g瓜g ,存在安全风险。
复方肝浸膏片 (胶囊 )属补血制剂 , 主要成分为铁元素 ,没
有规定铬的限量标准。 为保障公众用药安全 , 国家食品药 品
监督管理总局要求山西省 、 山东省 、 重庆市 、 陕西省食品药 品
监督管理局监督上述 4家企业立即停止生产 ,查清复方肝浸膏
片 (胶囊 )生产 、 销售情况和具体销售流向并及时向社会公布
相关信息 , 召回市场全部批次产品 ,并报告产生问题的原因 。
调查处置情况于 2 0 1 6年 1月 10 日前报告国家食品药品监督管
理总局 。
各省 (区 、市 )食品药品监督管理部门要监督行政区域内
的相关企业及单位立即停止销售和使用上述企业生产的复方
肝浸膏片 (胶囊 ) ,并配合做好召回工作 ,发现患者服用该药后
出现不良反应及时报告 。
国家食品药品监督管理总局已组织调查组进行调查 ,调
查情况及时向 i L会公布。
国家食品药品监督管理总局
3 8 0
·
C h in a P h
amr
a e y Z O1 6 Vo l
.
2 7 N o 中国药房 2 0 1 6年第 2 7卷第 3期