全 文 ：结果见表 1。
4. 7　各提取物中 β- 榄香烯含量测定 取上述各供试品溶液 ,依
GC条件进行测定 ,结果见表 2。
表 1　 4种供试品溶液中 β- 榄香烯加样回收率测定结果
供试品溶液 平均回收率 (% ) R SD(% )
水蒸气蒸馏 97. 06 1. 46
SFE- CO2 98. 12 0. 87
索氏提取 96. 23 1. 25
超声提取 99. 40 1. 81
表 2　 4种方法提取得率及各提取物中 β-榄香烯含量测定结果
提取方法 得率 (% ) 提取物中 β-榄香烯含量 (% )
SFE- CO2 12. 09 7. 84
水蒸气蒸馏 1. 58 8. 15
索氏提取 5. 75 1. 48
超声提取 3. 56 1. 48
5　结果
SFE- CO2萃取得率和 β- 榄香烯含量较高 , GC- M S鉴定
结果 (另文发表 )表明萃取物中含有效部位挥发油、树脂等 ,该法
萃取时间短、效率高且易于工业化生产 ,总体评价优于其它 3种
提取方法 ,适用于没药的提取。
6　讨论
6. 1　 结合文献报道和本文的研究 ,没药挥发油为其有效成分之
一 ,且挥发油中的 β - 榄香烯含量相对较高 [5～ 7]且其具有独特的
抗肿瘤、抗癌等药理作用 ,故选其为含量测定的指标。
6. 2　 没药为树脂类中药 ,高温容易结块 ,从而导致有效成分提
取不完全、提取效率低等不足 ,而传统的提取方法如水蒸气蒸馏
等都需要高温 ,不利于没药有效成分的提取 ;而 SFE-CO2萃取避
免了以上缺点 ,较传统提取方法有优势 ,又该法以 CO2为溶剂 ,
尤其适用于没药等含脂溶性成分较多的药物 ; SFE-CO2萃取还
有一独特的优点即提取过程中使用夹带剂可得到不同极性的有
效成分 ,另文报道的 GC-MS测定结果也说明了这一点:即其它 3
种方法所得提取物中绝大部分为挥发油 ,而 SFE-CO2萃取物中
含有分子量、极性相对较大的树脂等成分 ;物料的粒度和含水量
及夹带剂的使用等对萃取结果的影响有待于进一步研究。
致谢: β -榄香烯对照品由大连医药科学研究所李志教授馈
赠 ,在此表示衷心感谢!
参考文献:
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F25 /CL- 16A3的抗肿瘤作用机理的实验研究Ⅳ .榄香烯蹬抗肿瘤
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收稿日期: 2004-09-13;　修订日期: 2005-01-10作者简介:蒋俊毅 ( 1979-) ,男 (汉族 ) ,江苏扬州人 ,现在读南京中医药大学中药学硕士研究生 ,主要从事新药研发研究工作 .
紫外分光光度法测定杏香兔耳风制剂中总黄酮含量
蒋俊毅 1 , 曹　凯 2 , 吴德康1 , 丁　岗2
( 1.南京中医药大学 ,江苏 南京　 210029;　 2.江苏中康药物科技有限公司 ,江苏 南京　 210010)
摘要: 目的:研究杏香兔耳风制剂中总黄酮的测定方法。 方法: 紫外分光光度法 ,于 500 nm处测定。 结果: 线性范围为
8. 08～ 48. 48μg /m l r= 0. 999 5;平均加样回收率为 96. 76% (R SD= 1. 16% )。结论:该方法简便、准确 ,可用于杏香兔耳风
制剂的质量控制。
关键词: 杏香兔耳风 ;　紫外分光光度法 ;　总黄酮
中图分类号: R284. 2　　文献标识码: A　　文章编号: 1008-0805( 2005) 03-0178-02
Determination of the Total Flavonoids in Ainsliaea fragrans Champ by Spectrophotometric
Method
JIANG Jun-yi
1
, CAO Kai
2
, WU De-kang
1
, DING Gang
2
( 1. Nanjing University of TCM , N anjing , Jiangsu 210029, China; 2. J iangsu Zhongkang Parmaceutical
Science Co. Ltd. N anjing, J iangsu 210010, China)
Abstract: Object ive: T o establish a method for the determination of th e total flav onoids in Ainsliaea f ragrans Champ. Meth-
ods: The to ta l flav onoids in Ainsliaea f ragrans Champ was determined by spectrophotomet ric method at 500 nm. Resul ts:
Sample size show ed a good linear , rela tionship a t the range o f 8. 08～ 48. 48μg /ml, r= 0. 999 5. The average recovery w as
96. 76% and R SD was 1. 16% (n= 6) . Conclusion: This method is easy and accura te, and can be used fo r quality control of
Ainsliaea f ragrans Champ.
Key words: Ainsliaea f ragrans Champ;　 Spectroph otometric method;　 Total flav onoids
　　杏香兔耳风又名白走马胎、金边兔耳草 ,为菊科植物杏香兔
耳风 (Ainsliaea f ragrans Champ)的全草。 主要分布于江苏 、浙江
等地。 杏香兔耳风全草主要含无羁萜酮 ( f riedelin)、表无羁萜醇
( epifriedelinol)、β-谷甾醇 (β -sitoster ol)及其苷类等化合物 [1]。 其
功能清热补虚 ,凉血止血、利湿解毒。 本片剂即以其全草入药 ,经
水提醇沉等工艺加工精制而成 ,临床用于治疗湿热下注之带下
病 ,表现为白带过多、色黄粘稠 ;慢性宫颈炎见上述证候者。 经盐
酸 -镁粉等特征化学反应发现该杏香兔耳风单位药制剂中主要
含黄酮类等酚性成分。笔者用紫外 -分光光度法测定了杏香兔耳
风制剂中总黄酮的含量 ,为其制剂的质量控制提供评价手段。
1　仪器与材料
1. 1　仪器 UV 2401PC紫外分光光度仪 (日本岛津公司 );
H66025超声清洗机 (无锡超声电子设备厂 ); M ETTER AE240
电子分析天平 ; ZK- 82B型真空干燥箱 (上海市实验仪器总厂 )。
1. 2　受试品 杏香兔耳风片 (江苏中康药物科技有限公司提供 )。
1. 3　试剂 芦丁对照品 ( rutin, 0080- 9705)购自中国药品与生物
制品检定所 ,甲醇、硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠等均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　供试样品的制备 取杏香兔耳风制剂适量研为粉末 ,取约
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时珍国医国药 2005年第 16卷第 3期 LISHIZHEN M EDICINE AND M ATERIA MEDICA RESEARCH 2005 VOL. 16 NO. 3　
0. 15 g ,精密称量 ,置于 25 ml容量瓶中 ,以甲醇超声提取 15
min,取出 ,静置 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 5
ml于 25 ml容量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀 ,精密量取 6 ml于 25 ml
容量瓶中 ,以下操作同标线的制备 ,于 500 nm处测定吸收度。
2. 2　对照品溶液的制备 精密称取在 105℃干燥至恒重的芦丁
对照品 0. 010 1 g ,用甲醇溶解 ,定容至 25 ml,摇匀 ,配成浓度为
0. 404 mg /ml的芦丁标准品溶液 ,作为储备液备用。
2. 3　测定波长的选择 用 UV- 2401PC紫外 -可见分光光度计
对显色反应前后杏香兔耳风甲醇提取液的 UV谱进行扫描。扫描
范围: 900～ 190 nm (结果见图 1) ,并参考 2000版药典槐花总黄
酮测定方法 [2] ,确定测定波长为 500 nm。
2. 4　线性关系考察 精密量取对照品溶液 0. 0, 0. 5, 1. 0, 1. 5,
2. 0, 2. 5, 3. 0 ml,分别置于 25 ml容量瓶中 ,分别加水至 6 ml,精
密加入 5%亚硝酸钠溶液 1 ml,混匀 ,静置 6 min,精密加入 10%
硝酸铝溶液 1 ml,摇匀 ,静置 6 min,精密加入 4%氢氧化钠溶液
10 ml,再加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,取芦丁对照品进行扫描
(见图 2) ,并于 500 nm处用 UV - 2401紫外 -可见分光光度计
测定吸光度值 ,以对照品浓度为横坐标 ,吸光度为纵坐标做标准
曲线 ,线性范围为 8. 08～ 48. 48μg /ml。 回归方程为: C= 86. 30A
+ 1. 030,r= 0. 999 5。
1为显色后的 UV图谱
图 1　杏香兔耳风样品显色前后 UV扫描比较图
图 2　芦丁对照品的 UV图谱
2. 5　仪器精密度考察 精密称取样品粉末 0. 301 2 g ,按 “ 2. 3. 5
供试样品提取、测定条件”提取、测定样品 ,连续测定 5次。结果见
表 1。
表 1　精密度实验结果
测定次数 A 平均值 R SD(% )
1 0. 163 6
2 0. 163 8
3 0. 163 7 0. 163 74 0. 07
4 0. 163 7
5 0. 163 9
2. 6　重复性考察 平行取杏香兔耳风样品 6份 ,每份 0. 15 g ,精
密称定。按照所定条件平行实验 ,在 500 nm处测定吸收度。结果
见表 2。 结果表明 ,本方法重现性良好。
2. 7　稳定性考察 称取样品约 0. 15 g ,按“ 2. 1供试样品提取、测
定条件”提取 ,分别于 0, 15, 30, 45, 60 min测定其吸收度。结果见
表 3。
结果表明显色随着时间有所变化: 会逐渐增强 ;但在 60 min
内 RSD(% )小于 5% ,显色基本稳定。
2. 8　加样回收率实验 平行称取样品 6份 ,每份 0. 15 g ,精密称
重。以其中一份测定随行含量。再分别按 1∶ 0. 8, 1∶ 1, 1∶ 1. 2分
别加入芦丁对照品 ,按照提取条件提取后测定各总黄酮含量 ,测
得加样回收率。 见表 4。 结果显示: 本方法具有良好的加样回收
率。
2. 9　含量测定 平行称取 2个批号样品各 3份 ,每份 0. 15 g ,严
密称重。按照正文测定方法测定各总黄酮含量。测得结果见表 5。
表 2　供试品重复性实验结果
样
品
样品重量
m /g
A
C
/μg· ml-1
样品含量
(% )
平均值
(% )
R SD
(% )
1 0. 148 3 0. 165 15. 266 5. 36
2 0. 159 7 0. 182 16. 737 5. 46
3 0. 149 2 0. 167 15. 442 5. 39 5. 40 1. 16
4 0. 148 8 0. 165 15. 268 5. 34
5 0. 152 0 0. 174 16. 046 5. 50
6 0. 148 0 0. 165 15. 266 5. 37
表 3　精密度实验结果
放置时间 t /min A 平均值 R SD(% )
0 0. 164
15 0. 164
30 0. 166 0. 169 4. 72
45 0. 170
60 0. 183
表 4　供试品加样回收实验结果
样
品
称样量
m /g
样品含
量 m /mg
对照品
量 m /mg A
C
/μg· ml-1
回收率
(% )
平均值
(% )
R SD
(% )
1 0. 147 2 8. 713 6. 56 0. 325 29. 067 97. 96
2 0. 146 6 8. 676 6. 71 0. 327 29. 260 97. 82
3 0. 147 7 8. 742 7. 94 0. 355 31. 643 97. 47 96. 76 1. 16
4 0. 148 2 8. 771 8. 02 0. 354 31. 581 95. 73
5 0. 144 0 8. 525 9. 22 0. 375 33. 383 96. 12
6 0. 145 3 8. 600 9. 51 0. 381 33. 937 95. 43
表 5　含量测定实验结果
批号 样品
称样量
m /g
A
C
/μg· ml-1
样品含量
(% )
平均含量
(% )
R SD
(% )
1 0. 1526 0. 171 15. 780 5. 39
040218 2 0. 1482 0. 165 15. 270 5. 37 5. 376 0. 21
3 0. 1530 0. 171 15. 787 5. 37
1 0. 1488 0. 165 15. 273 5. 35
040320 2 0. 1507 0. 168 15. 528 5. 37 5. 356 0. 22
3 0. 1496 0. 166 15. 356 5. 35
3　讨论
3. 1　 对芦丁对照品 UV扫描发现其最大吸收在 510 nm处 ,但
与 500 nm处吸收值相差很小 ;考虑到样品扫描结果是 500 nm
处吸收值明显大于 510 nm处 ,参考 2000版《中国药典》槐花测定
项总黄酮也是于 500 nm处测定 ,因此选择 500 nm为测定波长。
3. 2　 考察提取试剂对样品的溶解性时发现 :杏香兔耳风干浸膏
在水中的溶出效果要好于甲醇 ,但加样回收实验中发现 ,芦丁对
照品几乎不溶于水 ;且《中国药典》中槐花项下总黄酮亦是以甲醇
为提取溶剂 ,故选用甲醇为提取溶剂。
3. 3　 本文采用紫外分光光度法测定杏香兔耳风中总黄酮的含
量 ,研究结果表明 ,样品加入各显色剂后 ,因显色会逐渐减弱 ,影
响测定结果 ,因此不宜放置时间过长 ,以 30 min内测定为宜。 紫
外分光光度法准确度较高 ,偏差较小 ,为杏香兔耳风的药材及其
制剂中总黄酮的含量测定提供了一种切实可行的方法 ,为杏香兔
耳风药材及其制剂的质量控制提供了评价手段。
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LISHIZHEN M EDICINE AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 2005 V OL. 16 NO. 3 时珍国医国药 2005年第 16卷第 3期