全 文 ：HPLC法测定杏香兔耳风中绿原酸和 3 , 5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量
王英锋 ,谢亮亮 ,刘锁兰 ,宴利芝
　第一作者　Tel:(010)68902687-803;E-mail:feng-yw@263.net
(首都师范大学分析测试中心 ,北京 100037)
摘要 目的:建立杏香兔耳风药材中绿原酸和 3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量测定方法。方法:采用 HPLC法 , 使用 Dis-
coveryC18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm), 以乙腈 -0.05%甲酸水溶液为流动相 ,流速 1.0 mL· min-1 ,梯度洗脱 , 检测波长为
328nm。结果:绿原酸进样量在 0.60 ～ 3.00μg范围内呈线性关系(r=0.9996, n=5), 平均回收率为 100.8%;3, 5-O-二咖
啡酰基奎宁酸进样量在 1.30～ 6.52 μg范围内呈线性关系(r=0.9997, n=5), 平均回收率为 99.4%。结论:本方法操作简
便 、可靠 ,重复性好 , 专属性强 ,可作为杏香兔耳风药材质量控制方法。
关键词:杏香兔耳风;绿原酸;3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸;HPLC
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0245-1793(2009)03-0430-03
HPLCdeterminationofchlorogenicacidand
3 , 5-O-dicafeoylquinicacidinAinsliaeafragransChamp
WANGYing-feng, XIELiang-liang, LIUSuo-lan, YANLi-zhi
(AnalysisandTestingCenter, CapitalNormalUniversity, Beijing100037, China)
Abstract Objective:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationchlorogenicacidand3, 5 -O-dicaf-
feoylquinicacidinAinsliaeafragransChamp.Method:ThechromatographiccolumnwasDiscoveryC18(250mm×
4.6mm, 5 μm), UVdetectionwavelengthwas328 nm, amixtureof0.05% formicacid-waterandacetonitrile
wasusedasmobilephasewithgradientelutionandflowratewas1.0mL·min-1.Results:Chlorogenicacidatthe
qualityof0.60-3.00μgshowedgoodlinearity, theaveragerecovery(n=5)was100.8% ;3, 5-O-dicaf-
feoylquinicacidatthequalityof1.30-6.52μgshowedgoodlinearity, theaveragerecovery(n=5)was99.4%.
Conclusion:Thismethodsisfast, reliableandaccurate, andmaybeasoneofindexusedtojudgethequalityof
AinsliaeafragransChamp.
Keywords:AinsliaeafragransChamp;chlorogenicacid;3 , 5-O-dicafeoylquinicacid;HPLC
杏香兔耳风(AinsliaeafragransChamp)为菊科
兔耳风属植物的干燥全草 ,具有清热 、利湿 、凉血 、解
毒的功效[ 1] ,化学成分研究表明杏香兔耳风中含有
单咖啡酰基奎宁酸和双咖啡酰基奎宁酸等多个酚酸
类成分 ,药理研究表明此类成分具有抗氧化[ 2] 、抗
炎 [ 3] 、抑制微生物和病毒 [ 4] 、酶抑制 [ 5] 、保肝[ 6] 、抗
凝血[ 7]等多种生物活性 ,本文选择单咖啡酰基中的
绿原酸和双咖啡酰基中的 3, 5-O-二咖啡酰基奎
宁酸作为指标成分 ,采用高效液相色谱法同时测定
其含量 ,为控制药材质量提供可靠方法。
1　仪器与试药
LC(WatersAliance:Waters2695 separations
module, Waters2487 DualλAbsorbanceDetecter),电
子天平 (Sartorius, 精度 0.01 mg), 超声波清洗器
(KQ-250型 ,昆山超声仪器有限公司)。
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所 ,供
含量测定用 ,批号:110753-200212), 3 , 5-O-二
咖啡酰基奎宁酸对照品(自制 ,经 UV、MS、NMR、IR
鉴定结构 ,纯度 98%以上), 甲酸(A.R,北京化工
厂),甲醇 (DikmaPure, DimAUSA), 乙腈 (Dikma-
Pure, DimAUSA),水为超纯水。
2 溶液制备
2.1 对照品溶液　分别精密称取对照品绿原酸
1.20 mg及 3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸 2.61 mg,
—430— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(3)DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.03.015
置于同一 10 mL的量瓶中 ,用 50%甲醇溶解并定容
至刻度 ,摇匀 ,即得浓度分别为 0.120 mg· mL-1和
0.261 mg·mL-1的对照品混合溶液。
2.2 供试品溶液　取一定量的杏香兔耳风药材 ,
粉碎 ,过 20目筛 ,精密称取约 1.0 g于具塞平底烧
瓶中 ,加入 50%甲醇 25mL,称重 ,加热回流 30 min,
冷却 ,再次称重 ,用 50%甲醇补足减失的重量 ,过滤 ,
取续滤液 ,过 0.45 μm滤膜后 ,即得供试品溶液。
3 色谱条件
色谱柱:DiscoveryC18柱(250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相:流动相 A为 0.05%甲酸水溶液 ,流动
相 B为乙腈 ,梯度洗脱(以流动相 A比例表示:0※
15 min, 93%※75%;15※20 min, 75%※85%;20※
25 min, 85%※ 93%。);流速:1.0 mL· min-1;检测
波长:328 nm;柱温:30 ℃;进样体积:10 μL。在此
色谱条件下的色谱图见图 1。
图 1　杏香兔耳风药材含量测定色谱图
Fig1　TheHPLCchromatogramsofAinsliaeafragransChamp
A.样品(sample) B.对照品(referencesubstances)
1.绿原酸(chlorogenicacid) 2.3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸(3, 5-
O-dicaffeoylquinicacid)
4 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 5, 10, 15, 20, 25 μL,
按上述色谱条件进行 HPLC分析 ,记录峰面积;以绿
原酸及 3 , 5 -O-二咖啡酰基奎宁酸峰面积(Y)对
进样量(X, μg)绘制标准曲线 ,并进行线性回归 ,计
算其回归方程分别为:
Y=5.101×104X+1×103 r=0.9996
Y=7.037×104X-1×103 r=0.9997
结果表明 ,绿原酸及 3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸进
样量分别在 0.60 ～ 3.00 μg及 1.30 ～ 6.52 μg范围
内呈线性关系 。
5 稳定性试验
取同一份样品 ,按 “2.2”项下方法制备溶液 ,分
别在 0 , 2, 3, 5, 6 , 7, 8, 9, 10 h进行 HPLC测定 ,记录
峰面积 ,计算绿原酸及 3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸
的 RSD值分别为 1.4%及 1.6%,表明 10 h内供试
品溶液基本稳定。
6 精密度试验
取同一份供试品溶液 ,连续进样 6次 ,记录峰面
积 ,计算绿原酸 RSD为 0.40%, 3, 5-O-二咖啡酰
基奎宁酸 RSD为 1.07%,表明精密度良好 。
7 重复性试验
分别精密称取同一批杏香兔耳风药材 5份 ,每
份约 1.0g,按 “2.2”项下方法制得供试品溶液 ,进
样 10 μL,记录峰面积 ,外标法计算含量。结果绿原
酸含量平均值(n=5)为 0.50%, RSD为 1.0%;3, 5-
O-二咖啡酰基奎宁酸含量平均值(n=5)为 1.0%,
RSD为 2.8%。结果表明 ,本试验重复性良好。
8 回收率试验
精密称定已知含量(0.50%)的杏香兔耳风药
材粉末 5份 ,每份 0.5 g,各加入对照品溶液(绿原
酸浓度为 1.6 mg· mL-1 , 3, 5-O-二咖啡酰基奎
宁酸浓度为 2.75 mg· mL-1)2.0 mL,按 “ 2.2”项
下方法制得供试溶液 , 进行 HPLC测定 ,进样 10
μL,记录峰面积 ,外标法计算含量 。求得绿原酸平
均回收率为 100.8%, RSD为 2.8%;3, 5 -O-二
咖啡酰基奎宁酸平均回收率为 99.4%, RSD为
1.9%。
9 样品测定
取江西婺源产杏香兔耳风药材 3批及江西 、贵
州 、云南产杏香兔耳风各 1批 ,按 “ 2.2”项下方法制
得供试品溶液 ,进样 10 μL,记录峰面积 ,外标法计
算含量 ,结果见表 1。
表 1　含量测定结果(%)
Tab1 Resultsofsamples
产地
(source)
绿原酸
(chlorogenicacid)
3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸
(3, 5-O-dicafeoylquinicacid)
江西婺源
(WuyuanJiangxi)
0.53 1.12
0.53 1.07
0.52 1.10
0.54 1.12
贵州(Guizhou) 0.11 0.30
云南(Yunnan) 0.01 0.04
—431—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(3)
10 讨论
本实验分别考察了甲醇 、水 、50%甲醇 、50%乙
醇等提取溶剂对提取效率的影响 ,结果表明 50%甲
醇对目标成分的提取较完全 , 50%甲醇和 50%乙醇
的提取效率相当 。
为确定最佳的提取效率 ,本实验对提取方法进
行了考察 ,比较了超声提取和回流提取的效果率 ,结
果证明 ,采用回流方法 ,提取效率较好 ,同等条件下
目标峰的峰面积较大 ,提取较完全。分别考察了回
流 20, 30, 40min对提取效率的影响 ,结果表明提取
30 min较 20 min有明显差别 ,而提取 40 min与 30
min无显著差异 ,因此确定提取时间为 30 min。提
取溶剂用量的考察结果表明 ,溶剂用量 25 mL与 50
mL的提取效率无差异。故确定以 25 mL50%甲醇
加热回流 30min为供试品溶液制备方法 ,回收率高 ,
方法稳定。
样品的测定结果表明 ,江西婺源产杏香兔耳风
药材中绿原酸和 3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸的平
均含量分别为 0.53%和 1.1%,而贵州产杏香兔耳
风药材中两者平均含量分别为 0.11%和 0.30%,云
南产杏香兔耳风药材中的含绿原酸和 3, 5-O-二
咖啡酰基奎宁酸较少 ,将提取夜浓缩后测得其平均
含量分别为 0.01%和 0.04%,以江西产药材含量为
最高 ,且各批次含量较稳定 。
参考文献
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Thunb.ProstaglandinsLeukotrienesEssentFatyAcids, 1992, 45(4):
307
(本文于 2008年 10月 15日修改回)
赛默飞世尔科技可检测合成雄性类固醇
　　2009年 3月 4日 ,赛默飞世尔科技宣布在 KennethL.Maddy分析化学实验室用液相色谱串联质谱
成协检测合成雄性类固醇。该系统由 ThermoScientificAriaTLX-2涡流色谱系统和三重四级杆质谱仪
组成 ,可以对来源于有关动物的尿液和血浆中的同化雄性类固醇实现高准确度和高灵敏的检测。
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