全 文 ：第 32 卷 第 7 期
2 0 1 4 年 7 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 7
Jul． 2 0 1 4
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学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 07． 050
复方藤梨根制剂对小鼠 CT26 移植瘤生长及
对 MVD影响的研究
董晶1，2，郭勇3，方红明4，王辉4
(1．浙江中医药大学第一临床医学院，浙江 杭州 310053;2．宁波市中医院，浙江 宁波 310100;
3．浙江省中医院，浙江 杭州 310053;4．浙江萧山医院，浙江 杭州 310053)
摘 要:目的:通过建立 Balb /c小鼠 CT26 人工种植模型，研究复方藤梨根制剂对肿瘤抑制效果及对 MVD表
达的影响。方法:①100 只 7 周龄雌雄各半 Balb /c小鼠随机分为 5 组，即空白对照组、荷瘤对照组、低剂量给药
组、中剂量给药组、高剂量给药组。各组分别皮下接种造模。②造模后第 2 d开始连续灌胃 3 周。给药组予低浓
度 0． 5 g /mL、中浓度 1 g /mL、高浓度 2 g /mL复方藤梨根制剂灌胃，空白对照组、荷瘤对照组每天以生理盐水灌
胃。③所有小鼠第 22 d处死，观察各组的瘤重、抑瘤率，免疫组化检测各组小鼠肿瘤 CD34 标记的 MVD。结果:
FFTLG低、中、高剂量组抑瘤率分别为 － 7． 05%、23． 03%、32． 91%;中、高剂量给药组的瘤重与低剂量组和荷瘤组
有明显差异(P ＜ 0． 05) ，中、高剂量给药组的 MVD对比荷瘤对照组有显著性差异(P ＜ 0． 05)。结论:复方藤梨根
制剂能抑制肿瘤生长，减少 CT26 瘤体中 MVD，具有抗肿瘤血管生成作用。
关键词:复方藤梨根制剂;CT26;肿瘤生长;微血管计数;血管生成
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)07-1691-03
Study of Fufang Tengligen Mixture on Inhibiting Ｒats CT26 Transplanted
Tumor Growth and Its Effect on MVD
DONG Jing，GUO Yong，FANG Hongming，WANG Hui
(1． The First Clinical Medical School of Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China;
2． Ningbo Hospital of TCM，Ningbo 310100，Zhejiang，China;
3． Zhejiang Provincial Hospital of TCM，Hangzhou 310053，Zhejiang，China;
4． Xiaoshan Hospital in Zhejiang，Hangzhou 310053，Zhejiang，China;)
收稿日期:2014 － 02 － 11
基金项目:浙江省中医药科学研究基金项目(2012ZA112)
作者简介:董晶(1980 －) ，男，浙江宁波人，主治医师，硕士，研究方向:中西医结合肿瘤防治研究。
通讯作者:方红明(1972 －)，男，浙江杭州人，主任医师，硕士，研究方向:中西医结合肿瘤防治研究。E-mail:wanglonghua8416@126． com。
Abstract:Objective:To establish a model of artificial planting with CT26 in Balb /c rats for the study of inhibitory
effect of Fufang Tengligen mixture on tumour and the influence of MVD． Methods:①100 7 weeks old rats (half of male
and half of female)were randomly divided into five groups:blank control group，tumor － bearing group，low － dose drug
group，medium dose drug group，high dose drug group． Each group was separately molding． ②All rats were given continu-
ous gavage after molding on the second day，lasting for 3 weeks． Drug group were treated with low concentration of 0． 5g /
mL，middle concentration of 1g /mL，high concentration of 2 g /mL． Blank control group and tumor － bearing group were
treated with NS every day． ③All rats were executed on the 22nd day，taking out the tumor and weighing and measuring
the volume as well as calculating the anti － tumor rate，and then we made the pathological section and did the immunohis-
tochemistry． The expression of MVD in the tumor was detected． Ｒesults:The tumor inhibition rates in low，middle and high
dose groups were － 7． 05%，23． 03%，32． 91% ． In the high and middle dosage group，the tumor weight had significant
difference compared with that in low dose group and tumor － bearing group (P ＜ 0． 05)． In contrast，high and middle dose
MVD groups and tumor － bearing control group had significant differences (P ＜ 0． 05)． Conclusion:Fufang Tengligen Mix-
ture can inhibit tumor growth and reduce tumor of CT26 in MVD with anti － tumor angiogenesis．
Key words:Fufang Tengligen Mixture;CT26;tumor growth;tumor microvascular density;angiogenesis
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恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，极大地
危害人类的健康，并将成为新世纪人类的第一杀手［1］。复
方藤梨根制剂是由藤梨根、虎杖根、水杨梅根、炒白术、炒党
参、茯苓、薏苡仁、甘草组成，具有清热解毒，活血化瘀，扶正
祛邪等功效。是长期临床应用于治疗消化道恶性肿瘤的经
验方，既往的研究发现复方藤梨根制剂作用于很多靶点，具
有明确的抗肿瘤作用［2 － 5］。本研究通过建立 CT26 小鼠移
植瘤模型，观察复方藤梨根制剂对该移植瘤生长的抑制作
用及对 MVD表达的影响，进一步揭示其抗肿瘤的作用机
制，从而为临床治疗提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 实验瘤株与动物 小鼠结肠腺癌细胞:colon － 26。
由浙江省中医院中心实验室提供。健康 7 周龄 Balb /c 小
鼠 100 只雌雄各半，由中国医学科学院上海实验动物中心
提供，体重(18 ± 2)g。SPF 条件下饲养于浙江中医药大学
动物实验中心。
1． 1． 2 实验用药 复方藤梨根制剂(FFTLG) :由藤梨根、
虎杖根、水杨梅根、炒白术、炒党参、茯苓、薏苡仁、甘草组
成。购自浙江省中医院中药房。
上述药材按比例加水煎煮，并浓缩至 0． 5、1． 0、2． 0 g /
mL，分装于消毒后的玻璃瓶中，储存于 4 ℃冰箱内备用。
小鼠中药给药剂量按药理学实验动物给药方法陈奇推荐的
换算法计算，分别以成人剂量 /体重(50 kg)的 5、10、20 倍
灌胃给药。
1． 1． 3 主要试剂 ＲMPI － 1640 培养基(GIBCO公司) ，胎
牛血清(Hyclone 公司) ，0． 25%胰酶 － EDTA(吉诺生物医
药技术有限公司) ，CD34 兔多克隆抗体(Bioworld echnolo-
gy． lo． ltd公司 批号:J65121) ，Super Picture 3rd Gen IHC De-
tection Kit二抗(Invitrogen公司 批号:1107508A)。
1． 2 方法
1． 2． 1 建立小鼠 CT26 移植瘤模型 将 CT26 细胞株于 37
℃ CO2 培养箱中(Thermo)培养，并传 3 代，将处于对数生
长期的细胞(密度约 70% ～ 80%)用 0． 25%胰酶 － EDTA
(吉诺)消化，PBS洗涤后制成 1 × 107 /mL 单细胞悬液。抽
吸 0． 2 mL 接种于小鼠右前肢腋部，2 周左右，皮下肿瘤长
成约 1 cm × 1 cm × 1． 5 cm 大小的瘤块，选取生长良好，淡
红色、鱼肉状的瘤组织，剪成约 1 mm3大小的瘤块，匀浆、过
滤后用生理盐水稀释调整细胞浓度至 1 × 107 /mL，制成单
细胞悬液。将该单细胞悬液以 0． 2 mL /只接种于雌雄各 40
只 Balb /c小鼠腋前部皮下。
1． 2． 2 实验分组及给药 将造模后的 Balb /c小鼠雌雄各
半随机分为 5 组，即荷瘤对照组、低剂量给药组、中剂量给
药组、高剂量给药组。各组分别进行造模。其余未造模小
鼠为空白对照组。所有小鼠均在造模后第 2 d开始连续灌
胃 3 周。给药组予相应浓度复方藤梨根制剂灌胃，空白对
照组、荷瘤对照组每天以生理盐水灌胃。灌胃容积均为0． 6
mL /20 g。
1． 2． 3 观察指标 (1)抑瘤率。抑瘤率 =(对照组瘤重 －
治疗组瘤重)/对照组瘤重 × 100%。
(2)免疫组化法检测 CD34 标记的 MVD:将移植瘤常
规石蜡包埋，切片，SP法免疫组化染色，采用免疫组化二步
法。MVD参照 Weidner 的方法，先在低倍镜(× 100)下全
面观察切片以确定肿瘤内血管密度最高处，高血管密度区
多位于肿瘤边缘。再在高倍镜(× 400)下，以肿瘤内任何
一个棕色染色的内皮细胞或细胞丛作为一个血管，只要结
构不相连，其分支结构也作为一个血管计数。记录 5 个视
野内的微血管数，取其平均数作为该切片 MVD值。
1． 3 统计学处理
采用 SPSS 19． 0 统计软件分析处理。计量资料数据用
均数 ±标准差(珋x ± s)表示。多组均数符合正态性和方差齐
性，使用单因素方差分析 LSD 两两比较。P ＜ 0． 05 或 P ＜
0． 01 均为差异非常显著的检验标准。
2 结 果
2． 1 对肿瘤生长的抑制作用
所有小鼠右腋下接种肿瘤细胞悬液后均有肿瘤生长。
在实验中，低剂量给药组平均瘤重大于荷瘤对照组，而统计
学分析显示并无显著性差异(P ＞ 0． 05) ，中剂量给药组、高
剂量给药组平均瘤重较荷瘤对照组具有显著性差异(P ＜
0． 01) ，中剂量给药组平均瘤重对照高剂量给药组无显著性
差异(P ＞ 0． 05)。见表 1。
表 1 各组小鼠数量和瘤重(g，珋x ± s)
组别 n 瘤重 抑瘤率
荷瘤对照组 20 3． 95 ± 0． 57 —
低剂量给药组 20 4． 25 ± 0． 53◆ － 7． 05%
中剂量给药组 20 3． 04 ± 0． 49▲ 23． 03%
高剂量给药组 20 2． 65 ± 0． 62★ 32． 91%
注:方差齐性检验示方差具有齐性(P = 0． 654) ;F = 18． 131，P
= 0． 000;与荷瘤对照组比较，◆P ＞ 0． 05，▲P ＜ 0． 01，★P ＜ 0． 01;
与中剂量给药组比较，★P ＞ 0． 05。
2． 2 CD34 标记的 MVD计数结果
实验表明:低剂量给药组 MVD 计数较荷瘤对照组无
显著性差异(P ＞ 0． 05) ，中剂量给药组 MVD计数较荷瘤对
照组具有显著性差异(P ＜ 0． 01) ，高剂量给药组 MVD计数
较荷瘤对照组具有显著性差异(P ＜ 0． 01) ，中剂量给药组
MVD计数较高剂量给药组无显著性差异(P ＞ 0． 05)。见
表 2，插页Ⅹ图 1 ～ 5。
表 2 各组小鼠肿瘤 MVD计数(个，珋x ± s)
组别 n MVD
荷瘤对照组 20 40． 70 ± 6． 45
低剂量给药组 20 38． 80 ± 5． 79◆
中剂量给药组 20 25． 50 ± 4． 14▲
高剂量给药组 20 21． 30 ± 3． 59★
注:方差齐性检验示方差具有齐性(P = 0． 070) ;F = 35． 246，P
= 0． 000;与荷瘤对照组比较，◆P ＞ 0． 05，▲P ＜ 0． 01，★P ＜ 0． 01;
与中剂量给药组比较，★P ＞ 0． 05。
3 讨 论
肿瘤的发生、生长、浸润及转移是一个多步骤的复杂过
程，其中血管生成的促进因子和血管生成的抑制因子的失
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衡起着十分重要的作用［6］，而且与宿主的功能状态密切相
关，恶性肿瘤的转移与免疫功能的抑制程度呈正相关［7］，
因而提高机体免疫力，从不同方面，不同层次、多个靶点抑
制肿瘤转移十分必要，中药复方在这方面具有一定的优势。
本实验研究的复方藤梨根制剂是依据中医理论“正气
存内，邪不可干”、“邪之所凑，其气必虚”，及“扶正祛邪”治
则的指导下研制出的纯中药制剂。是浙江省中医院肿瘤科
20 世纪 70 年代形成的效方“三根糖浆”发展而来，临床治
疗消化道恶性肿瘤的常用方，由藤梨根、虎杖根、水杨梅根、
党参、茯苓、白术、薏苡仁、甘草组成，方中藤梨根、虎杖根、
水杨梅根具有清热解毒作用，虎杖根、水杨梅根兼具活血化
瘀作用，党参、茯苓、白术具有补气健脾作用，薏苡仁具有健
脾、利水渗湿作用。诸药合用，共奏清热解毒、活血化瘀、补
气健脾等功效。从药理成分分析，藤梨根含有猕猴桃碱、熊
果酸等，虎杖根含有白藜芦醇等成分，水杨梅根含有水杨梅
甲素及生物碱等化合物，均为有效的抗癌成分;薏苡仁的主
要成分为薏苡仁油、薏苡仁酯、甾醇、氨基酸等，对癌细胞有
抑制作用。从薏苡仁热水提取物分得的中性多糖葡聚糖混
合物及酸性多糖Ⅱa － 1，2，3，Ⅱb 部分均显示抗补体活
性［8］。有多项临床研究证实扶正中药中的益气健脾药党
参、白术、茯苓有增强宿主体液免疫及细胞免疫功能［9 － 11］，
其明显提高巨噬细胞吞噬功能，提高自然杀伤(NK)细胞活
性等，可全面调节身体内环境的平衡，具有确切的抗肿瘤、
抗复发与抗转移作用。
本实验中，中、高剂量组瘤重明显小于对照组、低剂量
组。低剂量给药组平均瘤重大于荷瘤对照组，而统计学分
析显示并无显著性差异(P ＞ 0． 05) ，中剂量给药组平均瘤
重较荷瘤对照组具有显著性差异(P ＜ 0． 01) ，高剂量给药
组平均瘤重较荷瘤对照组具有显著性差异(P ＜ 0． 01) ，中
剂量给药组平均瘤重对照高剂量给药组无显著性差异(P
＞ 0． 05)。给药达到中剂量后能显示出明显的抑瘤率，中剂
量组达 23． 03%，而高剂量组更达 32． 91%。中、高剂量组
MVD数明显低于对照组、低剂量组，而统计学处理结果也
显示出差异性。提示复方藤梨根制剂可能通过降低 MVD，
导致肿瘤细胞缺血、缺氧坏死，进而减小瘤重，提高了抑瘤
率。
我国中草药具有治疗肿瘤历史悠久，且其具有成本低、
作用范围大、广谱性强、作用靶点多等优点［12］，因此从中药
中提取抗肿瘤血管生成的有效成分及药物为抗肿瘤治疗具
有深远的意义。目前经研究已证实的大量抗肿瘤中药及复
方，仅少数是通过抗肿瘤血管生成来发挥肿瘤抑制作用的。
因此，需加强对中药抗肿瘤的研究，开发并形成具有独特抗
血管生成的中药及复方，为现代临床提供更多的高效药物。
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檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
2295 － 2297．
适度运动有助改善
艾滋病患者大脑功能
美国研究人员发现，进行有规律适度运动，不仅对人体
健康有益，还能改善艾滋病患者大脑功能的受损情形。
发表在最近出版的《神经病毒学》期刊上的这项研究
称，过去已经有研究显示，有将近半数的艾滋病患者会有脑
功能受损的情形。原因是受到 HIV 感染的其他细胞，释放
某些神经传导物质，造成神经细胞长期处在发炎的状态下，
导致功能受损，严重者可能会影响日常生活，比如像开车、
处理财务问题及按时接受治疗等正常活动。
美国加州大学圣地亚哥分校的研究人员对 335 名艾滋
病患者进行了研究，询问这些受试者在过去 72 h的运动情
况，并把他们分为运动和不运动两组。研究人员还对他们
进行了 7 项认知能力测试，包括语言能力、短期记忆、信息
整合速度、学习能力、专注力及运动能力。
研究结果显示，那些进行运动的受试者，其脑功能损伤
的程度，约是没有运动者的一半，尤其在短期记忆及信息整
合速度的表现上，进行运动的受试者表现明显较佳。
研究人员推测，艾滋病患者多半都有代谢综合征，代谢
综合征会增加脑血管疾病的风险，而运动的最主要益处是
能够降低会导致脑血管疾病的危险因子，比如像高血压和
高血脂，进而能达到改善艾滋病患大脑功能的效果。
研究人员指出，该研究结果为以前关于“运动与艾滋
病患者的大脑健康有关”这一理论提供了新的佐证。
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