全 文 ：收稿日期:2009-11-09;　修订日期:2010-04-08
基金项目:国家自然科学基金(No.30660230)
作者简介:黎艳刚(1984-),男(汉族),云南陆良人 ,江西中医学院药物
分析硕士研究生 ,主要从事中药分析研究工作.
＊通讯作者简介:杨武亮(1965-),男(汉族),江西南昌人 ,现任江西中医
学院教授 ,主要从事中药分析教研工作.
枳壳饮片麸炒前后香叶醇的含量测定
黎艳刚1 ,魏　玲 2 , 陈海芳1 ,袁金斌 1 ,王发英1 ,涂明珠 1 ,杨武亮 1＊
(1.江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 ,江西 南昌　330004;
2.江西九江市第一民医院 ,江西 九江　332000)
摘要:目的 建立气相色谱法测定枳壳饮片麸炒前后香叶醇的含量测定方法。方法 采用毛细管气相色谱法 , FID检测
器 , DM-WAX毛细管柱(30 mm×0.25 mm×0.25μm), 载气为氮气 , 丁香酚为内标 , 柱温采取二阶程序升温 , 起始温度
为 140℃,以 5℃/min升至 180℃, 再以 4℃/min升至 220℃,测定枳壳饮片中香叶醇的含量。结果 被测组分能得到有效
分离 , 香叶醇进样量在 0.458 2 ～ 4.581 6 μg范围内 ,其峰面积与内标峰面积比对其进样量呈良好线性关系。 Y=2.006
2X-0.008, r=0.999 9, 加样回收率为 99.43%, RSD为 1.29%(n=5)。结论 该方法灵敏 , 简便 , 重现性好 ,可为枳壳饮
片中香叶醇含量测定提供一种参考。
关键词:气相色谱法;　枳壳饮片;　香叶醇
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.018
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)09-2172-02
DeterminationofGeraniolinFructusAurantiPraeparatabeforeandafterProcessing
LIYan-gang, WEILing, CHENHai-fang, YUANJin-bin,WANGFa-ying, TUMing-zhu, YANGWu-liang＊
(TheKeyLaboratoryofModrnPreparationofTCM, MinistryofEducation, JiangxiColegeofTraditionalChi-
neseMedicine, Nanchang, Jiangxi330004, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofgeraniolinFructusAurantiiPraeparatabeforeandafterprocess-
ing.MethodsCapilaryGCwasadopted.Theinternalstandardmethodwasemployedwitheugenolasinternalstandard.TheGC
systemconsistedofaflameionizationdetector, DM-WAX(30m×0.25mm×0.25 μm).Sampleswereseparatedwithcapilary
columnprogrammedincreasedtemperature.Theinitialtemperaturewaskeptat140℃ , thenthetemperaturewasraisedto180℃
attherateof5℃· min-1andthenthetemperaturewasraisedto220℃ attherateof4℃· min-1.ResultsTherewasagoodline-
arity(r=0.999 9)andgeraniolwerecompletelyseparated.Therecoveryratewas99.46%.ConclusionThemethodisaccurate
andsensitiveandcanbeusedfordeterminationofgeraniolinFructusAurantiipraeparata.
Keywords:Gaschromatography;　FructusAurantiiPraeparata;　Geraniol
　　枳壳为芸香科植物酸橙 CitrusaurantiumL.及其栽培变种的
干燥未成熟果实 , 具有理气宽中 、行滞消胀的功效 [ 1] 。前期研
究 [ 2～ 4]表明 ,枳壳中葡萄内酯在生品中的含量较低 , 但经麸炒或
放置较长时间后其含量升高 ,葡萄内酯含量升高可能是枳壳中的
7-羟基香豆素和香叶醇在酶或其它物质的作用下转化成葡萄内
酯 , 从而使麸炒品或陈枳壳中的葡萄内酯含量升高。对此我们采
用香叶醇和 7-羟基香豆素纯品在实验室进行了合成实验 , 葡萄
内酯得率较高 , 其在枳壳中如何转化课题组正在进一步探索。葡
萄内酯经药效学证明为枳壳中主要药效成分之一 ,其作用机制是
通过抑制乙酰胆碱酯酶而起到促进胃肠运动的作用。本实验建
立了气相色谱法测定枳壳饮片挥发油中香叶醇的含量方法 ,为了
探讨枳壳中香叶醇在枳壳饮片麸炒前后含量与葡萄内酯生成含
量的关系 , 以期为进一步阐明枳壳饮片的炮制机理提供科学依
据。
1　仪器与材料
1.1　仪器 、试剂 岛津 GC-2010气相色谱仪 , FID检测器 , 色谱
柱为 DM-WAX毛细管柱(30m×0.25 mm×0.25 μm)。 SCN-
300高纯氮气发生器 、SGP-2213低噪音空气泵(北京东方精华
苑科技有限公司)。燃气为高纯氢气(99.999%)。 香叶醇购于
Sigma公司(分装号:1354702 13707199);丁香酚对照品购于中国
药品生物制品检定所(批号 0725 -200008)。醋酸乙酯为分析
纯。
1.2　枳壳饮片生品和炮制品 枳壳饮片生品和炮制品由浙江中
医药大学中药饮片厂提供 ,经江西中医学院现代中药制剂教育部
重点实验室杨武亮老师鉴定。
1.3　麸炒枳壳饮片制备 按本课题组正交试验优选出的最佳麸
炒工艺制备样品 ,即将枳壳生饮片(药典用指定药材 080717)称
重 , 在底锅温加热达 190℃左右时 , 将麦麸(药∶麦麸 =100∶
10)投入锅内炒至冒烟后 ,投药炒 9 min左右 ,出锅 ,阴凉处晾晒 ,
放通风处阴干。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 DM-WAX毛细管柱(30 mm×0.25 mm×0.25
μm);FID检测器温度 250℃;进样口温度 230℃;柱温 140℃, 以
5℃/min升至 180℃, 再以 4℃ /min升至 220℃;流速 1 ml·
min-1;分流比为 50∶1;进样量为 2 μl。
2.2　试液制备
2.2.1　对照品储备液的制备 取香叶醇适量 , 精密称定适量 , 加
醋酸乙酯制成每毫升含 11 mg的对照品溶液。
2.2.2　内标溶液的制备 取丁香酚 , 精密称定适量 , 加醋酸乙酯
制成每毫升含 20 mg的内标溶液。
2.2.3　对照品溶液的制备 精密吸取对照储备液 0.4 ml和内标
溶液 0.5 ml,置 5 ml容量瓶中 , 用醋酸乙酯稀释至刻度 ,摇匀。
2.2.4　供试品溶液的制备 将样品 100 g敲碎后 , 用挥发油提取
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9
器按 2005版《中国药典》一部附录水蒸气蒸馏法提取挥发油 ,经
无水硫酸钠脱水后 , 加入 0.1 ml的内标溶液用醋酸乙酯配成 1
ml供试品溶液。
2.3　线性范围的考察 精密吸取对照品储备液 0.1, 0.2, 0.4,
0.6, 0.8, 1.0 ml,分别置于 5 ml容量瓶中 , 各加入内标溶液 0.5
ml, 用醋酸乙酯稀释至刻度 , 摇匀。按 “ 2.1项 ”条件测定。以对
照品的量为横坐标(X), 对照品与内标物峰面积之比为纵坐标
(Y),进行线性回归得标准曲线方程为:Y=2.006 2X-0.008, r=
0.999 9, , 结果表明香叶醇进样量在 0.458 2 ～ 4.581 6μg范围内
呈良好线性关系。
2.4　精密度实验 取同一对照品溶液 , 按 “ 2.1项” 条件操作 ,重
复进样 6次 , 峰面积比的 RSD值为 1.47%(n=6),表明色谱系统
稳定 、精密度良好。
2.5　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 自溶液配制后分别在 0,
2, 4, 8, 12, 24h按 “ 2.1”项条件下测定香叶醇的含量 , 计算得 RSD
值为 0.87%, 表明该溶液在 24 h内稳定。
2.6　重复性实验 称取同一批样品 5份 , 按 “ 2.2.4”项的方法制
备 5份供试品溶液 , 按 “ 2.1项 ”条件测定含量 , RSD为 1.50%。
结果显示本方法测定的重复性较好。
2.7　回收率实验 分别取已知含量的样品 5份 ,每份约 50 g,精
密称定 , 准确加入一定量的香叶醇 , 按 “ 2.2.5”项操作方法制备
供试品溶液 , 按 “ 2.1 项 ”条件测定 , 计算得平均回收率为
99.43%, RSD为 1.29%(n=5)。
2.8　样品测定 分别精密吸取供试品溶液 2 μl, 注入气相色谱
仪 , 按 “ 2.1”项条件下 , 进行测定 , 计算香叶醇的含量。结果见
表 1。色谱图见图 1。
表 1　不同来源枳壳饮片中香叶醇的含量
样品名称 来源 含量(%)
江枳壳饮片 1 药典用指定药材 080717 0.014 8
江枳壳饮片 2 药典用指定药材 080717 0.014 9
江枳壳饮片 3 药典用指定药材 080717 0.015 8
浙江枳壳饮片 1 药典用指定药材 080719 0.004 97
浙江枳壳饮片 2 药典用指定药材 080719 0.004 77
浙江枳壳饮片 3 药典用指定药材 080719 0.004 90
江枳壳麸炒饮片 1 药典用指定药材 080717 0.012 3
江枳壳麸炒饮片 2 药典用指定药材 080717 0.012 0
江枳壳麸炒饮片 3 药典用指定药材 080717 0.011 9
浙江枳壳麸炒饮片 1 药典用指定药材 080719 0.004 48
浙江枳壳麸炒饮片 2 药典用指定药材 080719 0.004 32
浙江枳壳麸炒饮片 3 药典用指定药材 080719 0.004 39
自制麸炒饮片 1 0.012 0
自制麸炒饮片 2 0.012 3
自制麸炒饮片 3 0.013 8
　　n=3
3　讨论
3.1　内标物的选择 本实验考察了正辛醇 、丁香酚等物质 , 结果
发现丁香酚完全符合内标物要求 ,样品色谱中与丁香酚的保留时
间相应处无杂质峰干扰 , 丁香酚与样品中其它相邻峰达到分离
(R>1.5),故选择丁香酚作为内标。
3.2　最小检出限和最低定量限 在信噪比为 3时 , 本实验测得
的香叶醇最小检出限为 9.16 ng, 在信噪比为 10时 , 本实验测得
的香叶醇的最低定量限为 27.49 ng。
　　本实验的枳壳生饮片 ,经过麸炒后 , GC色谱法测得挥发油中
的香叶醇含量均有所下降 ,且本课题组 HPLC色谱法测得本实验
枳壳生饮片 , 经过麸炒后葡萄内酯含量均有所升高(结果见
表 2)。葡萄内酯药效试验结果表明葡萄内酯在体内被代谢成 7
-羟基香豆素 , 由此间接证明枳壳饮片麸炒后葡萄内酯含量的增
加可能是由香叶醇和 7-羟基香豆素在某种物质的作用下转化
而成。该方法具有简便 、快速 、灵敏 、准确 、重复性好的优点 ,可作
为枳壳饮片挥发油中香叶醇的含量测定方法 ,为进一步阐明枳壳
饮片的炮制机理提供科学依据。
A.样品加丁香酚;B.样品未加丁香酚;C.对照品
图 1　枳壳饮片中香叶醇的含量测定 GC图
表 2　不同产地枳壳饮片中葡萄内酯的含量
样品名称 来源 含 量(%)
江枳壳饮片 1 药典用指定药材 080717 0.027 6
江枳壳饮片 2 药典用指定药材 080717 0.029 6
江枳壳饮片 3 药典用指定药材 080717 0.039 1
浙江枳壳饮片 1 药典用指定药材 080719 0.036 0
浙江枳壳饮片 2 药典用指定药材 080719 0.026 2
浙江枳壳饮片 3 药典用指定药材 080719 0.028 1
江枳壳麸炒饮片 1 药典用指定药材 080717 0.042 9
江枳壳麸炒饮片 2 药典用指定药材 080717 0.043 0
江枳壳麸炒饮片 3 药典用指定药材 080717 0.043 9
浙江枳壳麸炒饮片 1 药典用指定药材 080719 0.032 8
浙江枳壳麸炒饮片 2 药典用指定药材 080719 0.035 4
浙江枳壳麸炒饮片 3 药典用指定药材 080719 0.041 0
自制麸炒饮片 1 0.062 5
自制麸炒饮片 2 0.062 1
自制麸炒饮片 3 0.058 9
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:171.
[ 2 ] 　蒋以号 ,杨武亮 ,陈海芳 , 等.枳壳炮制前后高效液相色谱指纹图
谱的比较研究 [ J] .中药材 , 2008, 31(7):963.
[ 3 ] 　杨武亮 ,陈海芳 ,余宝金 ,等.枳壳活性化学成分研究 [ J] .中药材 ,
2008, 31(12):1812.
[ 4 ] 　黎艳刚 ,张普照 ,陈海芳 ,等.气相色谱法测定葡萄内酯中的溶剂残
留 [ J] .江西中医学院学报 , 2009, 21(4):43.
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