全 文 ：中国兽药杂志 ２０１４，４８（２）：２８～３０ ／杨修镇　
甜地丁中槲皮素的薄层鉴别和含量测定
杨修镇
（山东省兽药质量检验所，济南 ２５００２２）
［收稿日期］ ２０１３－１１－２２　 ［文献标识码］Ａ　 ［文章编号］１００２－１２８０ （２０１４） ０２－００２８－０３　 ［中图分类号］Ｓ８５３．７２
［摘　 要］ 　 为完善甜地丁质量标准，采用薄层色谱法对甜地丁中槲皮素的鉴别进行了研究，并用高
效液相色谱法测定其含量。 薄层色谱以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（７ ∶ ５ ∶ ０．５）为展开剂，高效液相法色
谱柱为 Ｃ１８（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，５ μｍ），流动相为甲醇－０．３％磷酸溶液（５０ ∶ ５０），检测波长为 ３６０ ｎｍ，
流速 １ ｍＬ ／ ｍｉｎ，柱温 ２５ ℃，进样量 １０ μＬ。 结果表明薄层色谱法能对槲皮素实现有效分离，高效液
相色谱法槲皮素进样浓度在 ５～１００ μｇ ／ ｍＬ范围内与峰面积呈良好的线性关系（ｒ ＝ ０．９９９７）；样品平
均回收率为 ９６．１％（ｎ＝ ６），ＲＳＤ为 ０．７％。 本方法为进一步控制甜地丁的质量提供了依据。
［关键词］ 　 高效液相色谱法；甜地丁；槲皮素
作者简介： 杨修镇，兽医师，从事兽药和畜禽产品质量监督检验及科研工作。 Ｅ－ｍａｉｌ： ｙａｎｇｘｉｕｚｈｅｎａａａ＠ １２６．ｃｏｍ
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｉｎ Ｈｅｒｂａ Ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉａｅ ｂｙ ＴＬＣ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ＹＡＮＧ Ｘｉｕ－ｚｈｅｎ
（Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｊｉｎａｎ ２５００２２， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｈｅｒｂａ Ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉａｅ ，ａｎ ＴＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｉｎ Ｈｅｒｂａ Ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉａｅ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ａｎｄ ｉｔ’ ｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ ＨＰＬＣ． Ｔｈｅ ＴＬＣ
ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｗａｓ ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ – ｅｌｔｈｌａｃｅｔａｔｅ － ｍｅｔｈａｎｏｉｃ ａｃｉｄ（７ ∶ ５ ∶ ０．５）．Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗａｓ ｕｓｅ
Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，５ μｍ），ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌ － ０．３％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ （５０ ∶ ５０），
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ３６０ ｎｍ， ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １ ｍＬ ／ ｍｉｎ ，ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ２５ ℃，ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ
ｗａｓ １０ μＬ． Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｗａｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｓｐｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ ＴＬＣ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｅａｋ
ａｒｅａｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｔ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ５～１００ μｇ ／ ｍＬ（ ｒ＝ ０．９９９７）ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｗａｓ ９６．１％ ｗｉｔｈ ＲＳＤ ｏｆ ０．７％（ｎ＝６）． Ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｉｎ Ｈｅｒｂａ Ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉａｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＨＰＬＣ； Ｈｅｒｂａ Ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉａｅ； ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ
　 　 甜地丁为豆科植物米口袋 Ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉａ ｖｅｒｎａ
（Ｇｅｏｒｇｉ） Ａ． Ｂｏｒ．的干燥全草，收载于《中华人民共
和国兽药典》二○一○年版二部，具有清热解毒的
功效［１］，临床用于痈肿疔疮，外耳道疖肿，阑尾炎的
治疗。 甜地丁是兽用常用中药材之一，原标准无薄
层鉴别项和含量测定项，为了更好的控制本品质
量，本实验对甜地丁中槲皮素的薄层鉴别和含量测
定方法进行了研究。
１　 材料与方法
１．１　 仪器和材料　 Ａｇｉｌｅｎｔ １２００高效液相色谱仪，槲
皮素对照品，批号 １０００８１－２００９０７，含量为 ９６．５％，购
自中国食品药品检定研究院。 甜地丁饮片，批号
２０１２０４１１、２０１２０５２３、２０１２０６１８、２０１２０６２２ 购自涑玉
平民大药房，批号 ２０１３０３１１、２０１３０４１５、２０１３０５１８、
２０１３０５２４、２０１３０６１７ 购自济南建联中药店，批号
２０１３０７２２由山东中医药大学药学院提供。 １０ 批甜
地丁饮片经山东中医药大学药学院生药系中药鉴
定专家李峰教授鉴定为豆科植物米口袋 Ｇｕｅｌｄｅｎ⁃
ｓｔａｅｄｔｉａ ｖｅｒｎａ （Ｇｅｏｒｇｉ） Ａ． Ｂｏｒ．。 硅胶 Ｇ 薄层板分
别购自烟台化学工业研究所、青岛海洋化工分厂、
德国 Ｍｅｒｃｋ公司。 甲醇为色谱纯，流动相用水为超
纯水，其余试剂均为分析纯。
１．２　 定性鉴别
１．２．１　 对照品溶液制备　 称取槲皮素对照品 １ ｍｇ
加甲醇 ２ ｍＬ溶解，即得。
１．２．２　 供试品溶液制备　 取甜地丁饮片，粉碎，过三
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号筛，称取２ ｇ，加７０％乙醇２０ ｍＬ，加热回流１ ｈ，滤过，
滤液蒸干，残渣加稀盐酸 １０ ｍＬ 使溶解，加热回流
３０ ｍｉｎ，放冷，用乙醚振摇提取 ３次，每次 １０ ｍＬ，合并
乙醚液，蒸干，残渣加甲醇 １ ｍＬ使溶解，即得。
１．２．３　 薄层色谱方法　 吸取槲皮素对照品溶液和
供试品溶液各 ２ μＬ，分别点于同一硅胶 Ｇ 薄层板
上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（７ ∶ ５ ∶ ０．５） ［ ２ ］为展开
剂，展开，取出，晾干，喷以 ３％三氯化铝乙醇溶液，
置紫外灯（３６５ ｎｍ）下检视。
１．３　 含量测定
１．３．１　 高效液相色谱条件［ ３］ 　 色谱柱为 Ｃ１８（４．６ ｍｍ×
２５０ ｍｍ，５ μｍ），流动相为甲醇－０．３％磷酸溶液（５０ ∶ ５０），
检测波长为 ３６０ ｎｍ，流速 １．０ ｍＬ ／ ｍｉｎ，柱温 ２５ ℃，
进样量 １０ μＬ。
１．３．２　 对照品溶液制备　 精密称取槲皮素对照品
１０ ｍｇ置 １００ ｍＬ量瓶中，加 ８０％甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，即得 １００ μｇ ／ ｍＬ 的槲皮素对照品贮备
液。 精密量取上述槲皮素对照品贮备液 ５ ｍＬ，置
２５ ｍＬ量瓶中，用 ８０％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得
２０ μｇ ／ ｍＬ的槲皮素对照品溶液。
１．３．３　 供试品溶液制备［４ ］ 　 取甜地丁饮片，粉碎，
过三号筛，精密称取 ２ ｇ，置具筛锥形瓶中，精密加
入 ８０％甲醇 ５０ ｍＬ，称定重量，加热回流 ２ ｈ，再称
定重量，用 ８０％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，
精密量取续滤液 ２０ ｍＬ，精密加入 ２５％盐酸 ７ ｍＬ，
置 ８５ ℃ 水浴中水解 ３０ ｍｉｎ，取出，迅速放冷，转移
至 ５０ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
１．３．４　 线性范围考察［５］ 　 精密量取槲皮素对照品贮
备液，用 ８０％甲醇稀释成 ５、１０、２０、４０、８０、１００ μｇ ／ ｍＬ
的系列溶液，注入液相色谱仪，在上述高效液相色
谱条件下进行测定，以峰面积（ｙ）为纵坐标，浓度为
横坐标（ｘ，μｇ ／ ｍＬ），进行线性回归分析。
１．３．５　 精密度试验
１．３．５．１　 仪器精密度试验　 精密吸取 ２０ μｇ ／ ｍＬ 的
槲皮素对照品溶液 １０ μＬ，注入液相色谱仪，连续进
样 ６次，在上述高效液相色谱条件下进行测定。
１．３．５．２　 重复性试验　 取同批甜地丁药材粉末（过
三号筛）约 ２ ｇ，精密称定，按 １．３．３项下制备样品溶液，
制备 ６份，在上述高效液相色谱条件下分别进行测定。
１．３．６　 回收率试验　 精密称取已知槲皮素含量的
甜地丁饮片粉末（过三号筛）１ ｇ，精密加入浓度为
２０ μｇ ／ ｍＬ的槲皮素 ８０％甲醇溶液 ５０ ｍＬ，自“称定
重量，加热回流 ２ ｈ”起按供试品溶液制备项制备样
品溶液，平行 ６份，注入液相色谱仪，在上述高效液
相色谱条件下分别进行测定。
１．３．７　 耐用性
１．３．７．１　 供试品溶液的稳定性 　 取同一供试品溶
液，于制备后 ０、１、２、４、８、１６、２４、４８ ｈ注入液相色谱
仪，在上述高效液相色谱条件下分别进行测定。
１．３．７．２　 色谱条件的微小变动　 取同一供试品溶液，将
流动相调整为甲醇－０．３％磷酸溶液（４８ ∶ ５２）、（５２ ∶ ４８）；
柱温的调整为 ２２、２８ ℃；流速调整为 ０．９、１．１ ｍＬ／ ｍｉｎ；检
测波长调整为 ３５８、３６２ ｎｍ，并更换不同厂家的同类型色
谱柱分别进行测定。
１．３．７．３　 供试品溶液制备条件的微小变动 　 取同
一批甜地丁饮片，将加热回流时间调整为 １１０、
１３０ ｍｉｎ，水解时间调整为 ２５、３０ ｍｉｎ，其余按供试
品溶液制备项制备样品溶液，注入液相色谱仪，在
上述高效液相色谱条件下分别进行测定。
１．３．８　 １０ 批样品含量测定　 取不同批号的甜地丁
药材，按 １．３．３ 项下制备样品溶液，注入液相色谱
仪，在上述高效液相色谱条件下分别进行测定。
２　 结 果
２．１　 定性鉴别　 供试品色谱中，在对照品色谱相应的
位置上，显相同颜色的荧光斑点，可实现有效分离，见
图 １。
样品 １、样品 ２、样品 ３分别为 ２０１２０５２３、２０１３０４１５、２０１３０７２２批甜地丁饮片
图 １　 甜地丁中槲皮素的薄层鉴别照片
２．２　 含量测定
２．２．１　 色谱分离　 在上述高效液相色谱条件下，分
析得到对照品溶液、供试品溶液的色谱图，从图 ２、
图 ３ 可知，在所采用的色谱条件下，槲皮素可以得
到很好的分离。
图 ２　 槲皮素对照品 ＨＰＬＣ色谱图
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中国兽药杂志 ２０１４，４８（２）：２８～３０ ／杨修镇　
图 ３　 甜地丁样品 ＨＰＬＣ图谱
２．２．２　 线性范围考察　 回归方程为： ｙ ＝ １８．７１９０ｘ ＋
２．４２７６（ｒ ＝ ０．９９９７） 。 结果表明槲皮素进样浓度在 ５～
１００ μｇ ／ ｍＬ的范围内与峰面积呈良好的线性关系。
２．２．３　 精密度试验
２．２．３．１　 仪器精密度试验 　 重复测定同一对照品
溶液 ６次，峰面积 ＲＳＤ为 ０．３％，表明有仪器有良好
的精密度。
２．２．３．２　 重复性试验 　 重复测定同一批甜地丁饮
片 ６次，槲皮素含量 ＲＳＤ为 ０．６％，表明重复性好。
２．２．４　 回收率试验　 槲皮素平均回收率为 ９６．１％，
ＲＳＤ为 ０．７％，结果见表 １。
表 １　 回收率试验
样品含量 ／
（ｍｇ·ｇ－１）
取样量 ／
ｇ
加入量 ／
ｍｇ
测得总
量 ／ ｍｇ
回收率 ／
％
平均回
收率 ／ ％
ＲＳＤ ／
％
０．９４ １．０１２１ １．０６ １．９６ ９５．２
０．９４ ０．９８７２ １．０６ １．９５ ９６．４
０．９４ １．０４３１ １．０６ ２．０１ ９７．１ ９６．１ ０．７
０．９４ １．０３７２ １．０６ １．９９ ９５．８
０．９４ ０．９９７２ １．０６ １．９５ ９５．５
０．９４ １．００８２ １．０６ １．９７ ９６．４
２．２．５　 耐用性
２．２．５．１　 供试品溶液的稳定性　 同一供试品溶液，
于制备后 ０、１、２、４、８、１６、２４、４８ ｈ 测定结果 ＲＳＤ 为
０．４％，表明样品溶液在 ４８ ｈ内稳定。
２．２．５．２　 色谱条件的微小变动 　 动相组成的微小
波动：甲醇－０．３％磷酸溶液（４８ ∶ ５２）和（５２ ∶ ４８）；
柱温的微小变动（２２、２８ ℃）；流速的微小变动（０．９、
１．１ ｍＬ ／ ｍｉｎ）；检测波长的微小变动（３５８、３６２ ｎｍ）以
及采用不同厂家的同类型色谱柱对供试品溶液槲皮
素的分离效果无明显影响。
２．２．５．３　 供试品溶液制备条件的微小变动 　 加热
回流时间的微小变动（１１０、１３０ ｍｉｎ），水解时间的
微小变动（２５、３０ ｍｉｎ），同批甜地丁饮片槲皮素含
量结果相对相差在 １．５％以内。
２．２．６　 １０批样品含量测定　 １０ 批甜地丁饮片中槲
皮素含量在 ０．５１～１．２３ ｍｇ ／ ｇ之间，不同饮片含量差
异较大。 结果见表 ２。
表 ２　 １０批样品含量测定结果
样品批号
含量 ／ （ｍｇ·ｇ－１）
１ ２ 平均
２０１２０４１１ ０．６１８ ０．６１６ ０．６２
２０１２０５２３ ０．５４４ ０．５４３ ０．５４
２０１２０６１８ ０．５０９ ０．５０７ ０．５１
２０１２０６２２ ０．７０８ ０．７０９ ０．７１
２０１３０３１１ ０．８７９ ０．８８２ ０．８８
２０１３０４１５ ０．７４１ ０．７４４ ０．７４
２０１３０５１８ １．２２８ １．２３２ １．２３
２０１３０５２４ ０．９５４ ０．９５５ ０．９５
２０１３０６１７ １．０８０ １．０７７ １．０８
２０１３０７２２ ０．９３６ ０．９３５ ０．９４
３　 讨论与小结
本研究中采用 ３ 个厂家生产的硅胶 Ｇ 薄层板
对薄层鉴别效果进行了比较，结果表明槲皮素均分
离良好。 但槲皮素专属性较差，含有槲皮素的药材
种类较多，如能加快甜地丁对照药材的研制，采用
对照药材进行鉴别则能更好的控制药材质量。
本研究中供试品溶液制备项对甜地丁饮片的
回流时间进行了考察，发现回流时间为 １ ｈ，所测槲
皮素含量值偏低，而回流时间为 ２ ｈ 和 ３ ｈ 则无明
显差异，故回流时间定为 ２ ｈ。 同时对精密加入
２５％盐酸 ７ ｍＬ，置 ８５ ℃ 水浴中水解的时间进行了
考察，发现水解时间为 １０ ｍｉｎ，所测槲皮素含量值
偏低，而水解时间为 ３０ ｍｉｎ 和 ６０ ｍｉｎ 则无明显差
异，故水解时间定为 ３０ ｍｉｎ。
目前尚无甜地丁中槲皮素含量测定的报道。
本研究中所用的甜地丁饮片大多购自药店，少量为
大学学院提供，饮片受炮制加工、存储等因素影响
较大，要制订含量限度尚需进行大量研究。
参考文献：
［１］ 　 中国兽药典委员会﹒中华人民共和国兽药典二○一○年版
二部［Ｓ］ ．
［２］ 　 王晓飞，于 玲，杜华霜，等﹒三白草中槲皮素的薄层色谱鉴
别［Ｊ］﹒中国民族民间医药，２０１３，２３（１）： ６５－６８﹒
［３］ 　 王 信﹒ ＨＰＬＣ法测定虎杖叶中槲皮素的含量［ Ｊ］﹒中药材，
２００６，０４（１）： ９６－９７﹒
［４］ 　 王祥培，许士娜，吴红梅，等﹒天胡荽药材中槲皮素的薄层鉴别
与含量测定［Ｊ］﹒时珍国医国药，２０１０，２１（１）： ４４－４５﹒
［５］ 　 高迎春，杨修镇，魏秀丽，等﹒地锦草提取物制备工艺及质量
控制研究［Ｊ］﹒中国兽药杂志，２０１０，４４（６）： ２３－２６﹒
（编 辑：陈 希）
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