全 文 ：山东中医杂志 2015 年 5 月第 34 卷第 5 期
八味舒脉胶囊由黄芪、丹参、川牛膝等八味中药
组成，具有活血破瘀、通络止痛、解毒的功能，能够明
显促进和改善肢体血液循环，对闭塞性动脉粥样硬
化症或其他原因所致的肢体动脉狭窄有显著疗效。
八味舒脉胶囊的提取工艺包括水煎煮提取和乙醇回
流提取，川牛膝为乙醇回流提取的主要药物，因此建
立八味舒脉胶囊川牛膝的含量测定方法既可加强八
味舒脉胶囊的质量可控性，又可对乙醇回流提取效
果进行较好的监控。 因此本研究以川牛膝的活性成
分之一杯苋甾酮为指标 ［1］，采用高效液相色谱法
（HPLC）建立了八味舒脉胶囊中川牛膝的含量测定
方法。
1 实验材料
1．1 仪器 岛津 LC-20AT 型高效液相色谱仪 ，
SPD-10A 型检测器，Labsolution 工作站（日本岛津公
司）；十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；
FA2004B 万分之一电子天平（上海精科天美科学仪
器有限公司）；超声波处理器（昆山市超声仪器有限
公司）。
1．2 材料 杯苋甾酮对照品（中国食品药品检定研
究院，批号 111804-201202）；八味舒脉胶囊（自制）；
乙腈、甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 溶液的制备［2-5］
2．1．1 供试品溶液 取胶囊内容物 2．5 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，加甲醇 50 mL，密塞，称重，超
声处理 30 min，放冷，加甲醇补足失重，摇匀，滤过，
精密吸取续滤液 20 mL，蒸干，残渣加水 10 mL 使溶
解，以乙酸乙酯萃取五次，每次 20 mL，合并萃取液，
蒸干，残渣加甲醇 20 mL 使溶解，滤过，滤液作为供
试品溶液。
2．1．2 对照品溶液 精密称取杯苋甾酮标准品 2．0mg，
置 25 mL 量瓶中，加甲醇使溶解，加甲醇至刻度，摇
匀，即得（0．08 mg/mL）。
2．1．3 阴性对照溶液 取除川牛膝以外其他药材，
按确定的制备工艺制备无川牛膝的阴性对照样品，
同供试品溶液的制法制备川牛膝阴性对照溶液。
2．2 色谱条件
2．2．1 检测波长的选择 采用双波长紫外分光光
度计对杯苋甾酮对照品溶液进行全波长扫描（200～
400 nm），结果显示杯苋甾酮在 243 nm 处有最大吸
收，故以此作为检测波长。
2．2．2 色谱条件 色谱柱 Kromasil-C18（5 μm，4．6 mm×
200 mm）；流动相乙腈-水（15∶85），流速 1 mL/min；柱
温室温。 在此条件下，供试品中的杯苋甾酮得到较
好的分离，峰形较好，杯苋甾酮峰的理论塔板数大于
3 000。
2．3 专属性考察 分别精密吸取对照品溶液、供试
品溶液与阴性对照溶液，注入液相色谱仪检测。 结
果表明，其他组分对杯苋甾酮测定结果无干扰。 见
图 1。
2．4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液（0．08 mg/
mL）0．1，0．2，0．4，0．8，1．5，2．0 mL，置 5 mL 量瓶中，加
甲醇至刻度。 配成浓度分别为 1．6，3．2，6．4，12．8，24，
32 μg/mL 的对照品溶液，吸取各对照品溶液，如法
测定，以杯苋甾酮峰面积积分值（Y）对对照品溶液
浓度（X）进行线性回归分析与绘图，结果回归方程
为 Y=21061X+1227（r=1．000）。 说明杯苋甾酮对照
品在 1．6～32 μg/mL浓度范围内线性关系良好。
2．5 精密度试验 吸取浓度为 6．4 μg/mL 的杯苋甾
酮对照品溶液，重复进样测定六次，记录峰面积积分
值，结果变异系数（RSD）为 1．91%，表明仪器精密度
良好。
高效液相色谱法测定八味舒脉胶囊中川牛膝杯苋甾酮含量
吕 婧 1，刘玉堂 2，耿子凯 1，林桂涛 3
（1．山东中医药大学 2013 年级硕士研究生，山东 济南 250355； 2．青岛市黄岛区第二中医医院，山东 青岛
266400； 3.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355）
［摘要］ 目的：建立八味舒脉胶囊中川牛膝的含量测定方法。 方法：以川牛膝中杯苋甾酮含量为指标，采用高效液相色谱法
（HPLC）进行测定。 结果：流动相为乙腈-水（15∶85），杯苋甾酮能够较好的分离，无干扰，专属性较好；杯苋甾酮在 1．6～32 μg/mL
范围内线性关系较好，r=1．000；加样回收率为 100．90%（RSD 为 2．51%）。 结论：所建立的含量测定方法简单可靠，重现性好，可作
为八味舒脉胶囊的含量控制指标之一。
［关键词］ 八味舒脉胶囊；杯苋甾酮；川牛膝；高效液相色谱法；质量控制
［中图分类号］ R283．6 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 0257-358X（2015）05-0380-02
［收稿日期］ 2014-07-08
［通信作者］ 林桂涛，男，教授，硕士研究生导师，主要从事中药
新制剂新技术研究。电话：0531-89628081，邮箱：linguitaoli@163.com。
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DOI:10.16295/j.cnki.0257-358x.2015.05.025
山东中医杂志 2015 年 5 月第 34 卷第 5 期
A．对照品溶液 B．供试品溶液 C．阴性对照溶液
图 1 各样品的高效液相色谱图
表 1 制剂中杯苋甾酮加样回收实验
取样量
（m/g）
杯苋甾酮含量
（m/mg）
加入量
（m/mg）
测得量
（m/mg）
回收率
（％）
平均回收率
（％）
RSD
（％）
1．2498 0．237 0．238 0．4719 98．70
100．90 2．51
1．2513 0．238 0．238 0．4814 102．27
1．2505 0．238 0．238 0．4707 97．77
1．2506 0．238 0．238 0．4751 99．62
1．2505 0．238 0．238 0．4841 103．40
1．2502 0．238 0．238 0．4847 103．66
表 2 三批八味舒脉胶囊中杯苋甾酮的测定结果
批号
川牛膝药材中含量
（％）
八味舒脉胶囊中含量
（m/mg·g－1）
转移率
（％）
1104010 0．092 0．191 61．06
1104020 0．074 0．153 60．81
1104030 0．070 0．132 55．46
2．6 稳定性试验 吸取同一供试液，分别于供试品
溶液制备后的 0 h、2 h、6 h、14 h、26 h 测定杯苋甾酮
峰面积，考察供试品溶液在 26 h 内的稳定性，结果
峰面积积分值的 RSD 为 2．81%，表明供试品溶液在
26 h内稳定性良好。
2．7 重复性试验 取同一批八味舒脉胶囊内容物，
共五份，如法测定五份样品中杯苋甾酮的含量，计算
变异系数。 结果 RSD 为 2．22%，表明该含量测定方
法重现性良好。
2．8 加样回收试验 取已知含量的八味舒脉胶囊
（杯苋甾酮含量为 0．19 mg/g）内容物约 1．25 g，精密称
定，共六份，置于锥形瓶中，分别精密加入杯苋甾酮对
照品溶液（0．238 mg/mL）1 mL，甲醇 49 mL。 如法测定。
结果平均回收率 100．90%，RSD=2．51%，表明该实验
方法测定杯苋甾酮含量准确度较好。 结果见表1。
2．9 样品含量测定 取三批样品，按确定的方法测
定。 制备样品所用川牛膝中杯苋甾酮的含量、八味
舒脉胶囊中杯苋甾酮的含量以及杯苋甾酮的转移率
见表 2。
3 讨论
3．1 供试品溶液提取方法的优选时，比较了甲醇回
流提取法与甲醇超声处理方法，结果表明两者无明
显的差异，故选择操作较为简便的甲醇超声处理法；
又研究了不同超声时间（30 min、60 min、90 min）对
提取结果的影响，结果表明超声 30 min 即可较完全
的提取杯苋甾酮，故确定超声时间为 30 min。
实验中发现，甲醇超声提取液采用乙酸乙酯萃
取后可以使杂质减少，而杯苋甾酮损失量较少，故本
实验选用甲醇超声提取 30 min 后乙酸乙酯萃取得
到的溶液作为供试品溶液。
3．2 参考已有的文献研究结果 ［2，4，5］，确定了流动相
选用乙腈与水。实验比较了不同比例乙腈与水（20∶80；
15∶85；10∶90）对色谱行为的影响，结果显示当比例
为 10∶90及 15∶85时杯苋甾酮色谱峰分离较好，因乙
腈与水为 15∶85 时，杯苋甾酮峰保留时间短，缩短测
定时间，故确定流动相为乙腈与水（15∶85）。
3．3 从实验结果可以看出，川牛膝中杯苋甾酮的转
移率较稳定，说明确定的提取工艺较合理，同时按照
杯苋甾酮转移率 55%计算，八味舒脉胶囊中川牛膝
的含量按照杯苋甾酮计不得小于每粒 0．03 mg。
［参考文献］
［1］ 郭良君，谭兴起，郑巍，等． 川牛膝化学成分的研究［J］． 中南药
学，2013，11（7）：495-497．
［2］ 陈幸，黎万寿，崔红梅． 高效液相色谱法测定独活寄生合剂中杯
苋甾酮含量［J］． 中国医院药学杂志，2003，23（8）：5-6．
［3］ 孔飞飞，郭良君，谭兴起． 川牛膝中杯苋甾酮的提取、分离及纯
化工艺研究［J］． 现代中西医结合杂志，2013，18：2023-2026．
［4］ 马英，毕开顺，王玺，等 ． HPLC 法测定川牛膝中杯苋甾酮的含
量［J］． 中草药，2000，31（6）：29-30．
［5］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典（一部）［S］． 北京：中国
医药科技出版社，2010：35-36．
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