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川牛膝中的杯苋甾酮提取分离



全 文 :通讯作者:李旻辉
川牛膝中的杯苋甾酮提取分离
王晓琴1 李旻辉2 龙 平2 靳 敏2 李虔全2 张 娜2
(1.内蒙古医学院药学院,呼和浩特 010059;2.包头医学院)
摘 要 目的:建立川牛膝中杯苋甾酮提取分离的方法。方法:用 95 %乙醇对川牛膝提取、浓缩后以硅胶为载体进
行柱色谱分离。结果:从川牛膝中分离得到大量的杯苋甾酮。结论:该方法简单、可行、高效。
关键词 川牛膝;杯苋甾酮;提取分离
川牛膝为苋科植物川牛膝(Cyathula officinalis
Kuan)的干燥根,是著名的川产道地药材之一。其名
首见于唐朝蔺道人所著《仙授理伤续断秘方》,于晚清
民初时入药使用,至今仍被用于中医治疗风湿腰膝疼
痛、脚痿筋挛、血淋、尿血、妇女经闭、症瘕等病[1]。川
牛膝的化学成分主要为生物碱及甾酮类,如杯苋甾酮
(cyasterone)、头花蒽草甾酮、促脱皮甾酮、红甾酮等。
黎万寿等[2]人研究表明,杯苋甾酮具有专属性,存在
于川牛膝中,而不存在于怀牛膝中,相关药理实验也表
明杯苋甾酮的药理活性与川牛膝强筋健骨“其滋补之
功如牛之多力也”相符[3 - 4]。马英等[5]研究表明杯苋
甾酮在川牛膝中的含量并不是很高,从一个侧面说明
从川牛膝中分离纯化杯苋甾酮需要适当有效的方法。
我们在对川牛膝的研究过程中发现了简单、可行、高效
的分离杯苋甾酮的方法,现报道如下。
1 材料
硅胶 G、硅胶(100 ~ 200、200 ~ 300 目,青岛海洋
化工厂)。其它所用试剂均为化学纯或分析纯。川牛
膝于 2008 年 7 月购于河北省安国药材市场。样品经
包头医学院药用植物教研室王振旺老师鉴定为苋科植
物川牛膝(Cyathula officinalis Kuan)的干燥根。
2 方法与结果
川牛膝 15 kg,经 95 %乙醇回流提取 4 次,合并提
取液浓缩至浸膏,得浸膏 3 kg。将得到的浸膏用适量
20 ~ 30 ℃热水冲散倒入分液漏斗中,依次用石油醚、
乙酸乙酯、正丁醇萃取至无色,合并相同萃取液,减压
浓缩得到相应浸膏分别为 400 g、810 g、765 g、900 g。
分别取少量石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部分的浸膏,
溶解后与杯苋甾酮对照品点于同一硅胶薄层 G 板,分
别用石油醚 -丙酮(3 ∶ 1) ,氯仿 -甲醇(9 ∶ 1) ,乙酸
乙酯 -乙醇(10 ∶ 1)展开后取出晾干,喷以 10 %硫酸
乙醇溶液显色,105 ℃烘至显色清晰,发现乙酸乙酯部
分与对照品 Rf值相同的斑点十分明显,表明杯苋甾酮
主要集中于乙酸乙酯部分。
取乙酸乙酯部分浸膏 100 g 用乙酸乙酯溶解后,
取等量的 100 ~ 200 目硅胶拌至干燥,为均匀的颗粒,
将样品用硅胶柱色谱(600g,200 ~ 300 目硅胶)分离,
用氯仿 -甲醇(16 ∶ 1)洗脱 4 ~ 5 个柱体积,收集流份
减压回收溶剂即得黄白色不溶物 0. 5 g,将该不溶物与
对照品用薄层板检验,发现其为含少量杂质的杯苋甾
酮,将得到的样品用甲醇抽滤冲洗 3 ~ 4 次,即得到杯
苋甾酮 0. 4 g。所得杯苋甾酮经高效液相色谱检验,纯
度达到 96 %以上。
3 讨论
川牛膝中的杯苋甾酮由于含量相对较少,使得杯
苋甾酮的大量分离在技术上比较复杂、繁琐。本次试
验首次用简单的萃取和硅胶柱色谱分离后,用甲醇洗
涤即得到杯苋甾酮,为川牛膝的进一步研究和杯苋甾
酮的深入研究提供了简单、可行的方法。
参考文献
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[4] 徐叔云. 药理实验方法学[M]. 北京:人民卫生出版社,
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[5] 马英,毕开顺,王玺,等. HPLC 法测定川牛膝中杯苋甾酮
的含量[J].中草药,2000,31(6) :427 - 428.
(收稿日期:2011-01-14)
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包 头 医 学 院 学 报
JOURNAL OF BAOTOU MEDICAL COLLEGE
2011 年第 27 卷第 2 期
Vol. 27 No. 2 2011