全 文 ：ple , quick , accurate and reliable and sui table fo r the clinical pharmacokinetic study of fenof ibrate sustained re-
lease capsule in healthy volunteers.
Key words　fenofibrate , fenofibric acid , bioact ive metaboli te , HPLC , pharmacokinetics
RP-HPLC法测定川牛膝中杯苋甾酮的含量＊
陈　幸　黎万寿　朱久武＊＊　崔红梅
(四川省中药研究所　成都　610041)
摘要　目的:首次测定川牛膝中主要成分杯苋甾酮的含量。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱 YWG C18 ,
流动相为甲醇-水 (35∶65), 流速1 m L·min-1 , 检测波长 243 nm。结果:杯苋甾酮在 0.034 ～ 0.27 μg 范围内线
性良好。杯苋甾酮的平均加样回收率为 98.35%, RSD 为±1.6%(n =5)。结论:本方法简便 、 快捷 , 重现性
好。
关键词　川牛膝　杯苋甾酮　反相高效液相色谱法
＊　国家 “九五” 攻关课题 No.96-903-02-04
＊＊成都中医药大学药学系 98届实习生
　　中国药典 (1995年版)收载的川牛膝为苋科
植物川牛膝 (Cyathula of f icinalis Kuan)的干燥
根 , 主产于四川 、云南 、 贵州等地 。长期以来 , 由
于川牛膝有效成分不明确 , 无合适的对照品 , 质量
难以控制 。近年研究报道 , 牛膝中的昆虫变态激素
有促进蛋白质合成 、抗血小板聚集等活性[ 1 ,2] , 与
川牛膝补肝肾 、 强筋骨功效相符。但在含量测定方
面 , 未见报道 。本文建立了 HPLC 法测定川牛膝
中杯苋甾酮的含量 , 以便控制药材质量 。
1　仪器与试药
岛津 LC-8A高效液相色谱仪 , SPD-6AV 紫
外检测器 , C-R6A 数据处理机 , Catalog 7125 型
进样器。
乙腈为色谱纯 , 水为蒸馏水 , 其它试剂均为分
析纯 。
对照品:自制 , TLC 及 HPLC 检测均为单峰 。
经过 UV 、 IR 、 MS 、 1H -NMR 、13C-NMR、 CD
等测试鉴定为杯苋甾酮 , 见图 1[ 3～ 5] , 纯度为
99.26%。
药材:采于地道产区四川雅安地区及乐山地
区 , 栽培品种及购于成都 、武汉 、 上海等地药材经
鉴定均为 Cyathula of f icinal is Kuan。
2　色谱条件
色谱柱:YWG C18不锈钢柱 , 4.6 mm ×250
mm , 5 μm (大连依利特科学仪器公司);流动相:
图 1　杯苋甾酮与蜕皮甾酮的结构式
A.杯苋甾酮 (Cyasterone)　B.蜕皮甾酮 (Ecdysterone)
甲醇-水 (35∶65);流速:1 mL·min-1;检测波
长:243 nm;柱温:35 ℃;检测灵敏度:0.01
AUFS。在本色谱条件下 , 对照品与样品色谱图见
图 2。
图 2　川牛膝的 HPLC图
A.杯苋甾酮　B.川牛膝药材
1.杯苋甾酮
·234·　 药物分析杂志　
DOI :10.16155/j.0254-1793.2000.04.006
3　测定条件
3.1 　检测波长的选择　将杯苋甾酮在 UV-2401
PC型 (岛津)分光光度计上进行光谱扫描 , 在
243 nm 波长处有最大吸收 , 故选择此波长进行检
测。
3.2 　线性关系考察　精密称取杯苋甾酮对照品
1.68 mg , 置于 100 mL 容量瓶中 , 加甲醇超声溶
解并稀释至刻度 , 摇匀 , 分别吸取 2 , 4 , 8 , 12 ,
16μL , 进样测定 , 以对照品的进样量 X (μg)对
峰面积积分值 Y 作图 , 得到一条直线 。结果表明:
杯苋甾酮在 0.034 ～ 0.27 μg 范围内线性关系良好 ,
其回归方程为:
Y =-9.144 ×103 +1.181×106X 　r =0.999 9
3.3 　精密度试验　精密吸取上述对照品溶液 , 连
续进样 5次 (每次 8 μL)进行测定 , 计算 , RSD
为 1.3%。
3.4 　重现性试验　取 1号栽培品样品 , 按样品溶
液制备方法同时制取 5份供试溶液 , 各精密吸取 4
μL 进样 , 测量峰面积 , 测定结果的 RSD 为
2.1%。
3.5 　稳定性试验　对照品及样品溶液避强光放
置 , 每隔 2 h测定 1次 , 结果表明在 8 h内均保持
稳定 。
3.6 　加样回收率试验　精密称取 1号样品 (表 2)
1.0 g , 5份 , 加入一定量杯苋甾酮 , 按照样品溶
液制备方法制得供试溶液 , 测定含量 , 以杯苋甾酮
计算加样回收率 , 结果加样回收率为 98.35%,
RSD 为±1.6%, n =5。
4　样品溶液制备方法考察
取生药粉末1 g (80 ℃, 4 h , 过 20目筛), 按
以下方法制成供试液 。
方法 1:置 50 mL 圆底烧瓶中 , 加甲醇 20
mL , 回流 1 h , 滤过 , 残渣用甲醇洗涤 , 合并滤液
和洗涤液 , 用甲醇定容成 10 mL。
方法 2:置 10 mL 量瓶中 , 加甲醇 8 mL , 超
声波提取 1 h , 取出 , 放冷 , 加入甲醇至刻度 , 摇
匀 , 滤过 , 弃去初滤液 , 取续滤液作供试液 。
方法 3:置 10 mL 量瓶中 , 加甲醇至近刻度 ,
室温浸泡 2 h , 时时振摇 , 定容成 10 mL , 摇匀 ,
滤过 , 弃去初滤液 , 取续滤液作供试液 。
以上 3种方法制成的样品中杯苋甾酮含量见表
1。
表 1　不同提取方法样品中杯苋甾酮含量 (n=3)
方法 含量/ % RSD/ %
1 0.061 4.7
2 0.034 1.5
3 0.020 2.3
结果表明 , 热回流法较其他方法提取完全 。
5　样品含量测定
用上述色谱条件及样品溶液制备方法对栽培品
川牛膝和商品川牛膝作含量测定 , 结果见表 2。
表 2　川牛膝中杯苋甾酮的含量 (n=3)
样品 来源 采收时间 含量/ %
1 天全县大河乡太阳村 1997.11 0.066
2 天全县大河乡小沟村 1997.11 0.074
3 天全县小河乡关家村 1997.10 0.072
4 天全县小河乡关家村 1997.11 0.070
5 宝兴县干阳沟 1997.11 0.066
6 宝兴县干阳沟 1997.11 0.022
7 汉源县药材公司 1997.11 0.062
8 金口河区永和镇胜利村 1997.11 0.048
9 金口河区永胜乡花瓷村 1997.11 0.057
10 成都华西附院 1998.10 0.088
11 成都中医药大学黉门附院 1998.10 0.042
12 成都骨科医院 1998.10 0.068
13 成都苏煜文门诊 1998.10 0.072
14 成都荷花池 8厅 4排 36号 1999.1 0.061
15 成都荷花池 5厅 1排 34号 1999.1 0.067
16 成都荷花池 7厅 7排 43号 1999.1 0.023
17 湖北中医药研究院专家门诊 1999.1 0.082
18 湖北中医药研究院附属医院 1999.1 0.073
19 上海抗肿瘤药房 1999.5 0.072
20 上海益众国药号 1999.5 0.082
21 杭州下城区中医院 1999.5 0.081
22 杭州永康药店 1999.5 0.059
6　讨论
6.1 　流动相曾采用乙腈-水 (20∶80), 其图谱看
似不错 , 但同一样品测出的杯苋甾酮含量较甲醇-
水系统多 2倍 , 表明杯苋甾酮与其他成分未分开。
6.2 　曾有文献报道 , 川牛膝中含有 0.057%的蜕
皮甾酮[ 6] , 根据我们对川牛膝的深入研究 , 有以
下理由认为川牛膝含杯苋甾酮 , 不含蜕皮甾酮 (图
1):(1)成分分离未得到蜕皮甾酮 , 但得到较多杯
·235·　20 (4), 2000 　
苋甾酮 。 (2)在正相 TLC 上 , 2 者能完全分离 ,
显色后显示不同颜色和 Rf 值 , 见图 3 。我们对栽
培和市售的川牛膝均作过 T LC 鉴别 , 发现均含有
杯苋甾酮 , 不含蜕皮甾酮 。图 3 中斑点 a 含量很
低 , 仅在少数药材样品中存在 , 因其 Rf值在蜕皮
甾酮附近 , 曾被怀疑为蜕皮甾酮 , 我们分离得到少
量斑点 a 物质 , 经红外光谱鉴定 , 含有 2 个羰基
峰 , 且显色后与杯苋甾酮颜色相同 , 故其结构应有
别于含 1 个羰基的蜕皮甾酮而与杯苋甾酮类似 。
(3)反相 HPLC对 2者不能分离 , 图 4 , 这也许是
前人误认为川牛膝含蜕皮甾酮的根本原因。(4)川
牛膝为苋科杯苋属植物 , 怀牛膝为苋科牛膝属植
物 , 2种不同属植物含有不同侧链的甾体化合物是
可以理解的。
图 3　川牛膝与怀牛膝的 T LC图
1.怀牛膝　2.蜕皮甾酮　3.杯苋甾酮　4.川牛膝
薄层板:硅胶 G
展开剂:氯仿-甲醇 (8∶1)
显色剂:10%硫酸乙醇溶液
图 4　蜕皮甾酮与杯苋甾酮的 HPLC 图
A.蜕皮甾酮　B.蜕皮甾酮+杯苋甾酮
1.蜕皮甾酮　2.杯苋甾酮
6.3 　曾有文章报道 , 从头花杯苋 Cyathula capi-
tata Moquin -Tandon (Amaranthaceae)分离得到
杯苋甾酮 C -25异构体 , 即异杯苋甾酮 (Isocyas-
terone)[ 7] 。本次分得的杯苋甾酮对照品的 C -28
和C-25位氢分别出现在δ4.159 和δ2.444 处 ,
为十分相似的较规则的 6重峰 , C-28氢的偶合常
数为 6.4 , 15 Hz;C-25氢的偶合常数为 6.8 , 18
Hz。表明 2者与 C -24 氢均为反式关系。且与文
献 [ 5] 的CD (圆二色谱图)完全一致。故确定为
杯苋甾酮而非异杯苋甾酮。
本次从川牛膝中还得到 β-谷甾醇 、 羟基杯苋
甾酮和 1个尚未完全鉴定的高级脂肪酸。
参考文献
1 　ヒキノヒロシ, 锅谷将 , 野本享资 , 他.昆虫变态物质の连续
投与の高等动物にぉよぼす影响.药学杂志 , 1969 , 89 (2):
235
2　陈幸 , 杜德极.拔毒散中抗血小板聚集活性成分.中草药 ,
1996 , (增刊):63
3 　Hikino H , Hikino Y , Nomoto K , et al.Cyasterone , an insect
metamorphosing substance f rom Cyathula capitata: St ructu re.
Tetrahed ron , 1968 , 24:4895
4 　陈幸 , 黎万寿 , 朱久武.含川牛膝中成药的薄层鉴别.中成
药 , 1999 , 21 (6):287
5　Hikino H , Nomoto K , Takemoto T.Sengosterone , and insect
metamorphosing substance f rom Cyathula capitata: St ructu re.
Tetrahed ron , 1970 , 26:887
6 　舒元瑜 , 邹昭明 , 杨安东.六种牛膝中蜕皮激素的高效液相色
谱测定.中成药 , 1992 , 14 (1):37
7　Hikino H , Nomoto K , Takemoto T.St ructure of isocyasterone
and epicyasterone , novel C29 insect-moulting substances f rom Cy-
athula capitata.Chem Pharm B ul l , 1971 , 19 (2):433
(本文于 1999年 6月 2日收到)
·236·　 药物分析杂志　
RP-HPLC Determination of Cyasterone in Radix Cyathulae
Chen Xing , Li Wanshou , Zhu Jiuw u and Cui Hongmei
(S ich uan Inst itute of Chinese Materia Medica , Chengdu 610041)
Abstract　Objective:To determine cyasterone in Radix Cyathulae.Methods:The separation w as performed
on YWG C18 column w ith methanol-water (35∶65)as mobile phase.The flow rate w as 1 mL·min-1.The
w aveleng th for measurement w as 243 nm.Results:According to the selected chromatog raphic condi tions , the
calibration case of cy asterone w as linear in the range of 0.034 ～ 0.27 μg .The average recoveries of cyasterone
w as(98.35±1.6)%, n =5.Conclusion:The method is easy and rapid , w ith good reproducibili ty.
Key words　Radix Cyathulae , cyasterone , RP-HPLC
　　天津大学无线电厂申报的 《药品溶出全自动分析系统》 项目在今年 4月份国家科技部 、 财政部公布的
第四批科技型中小企业技术创新基金项目中 , 获得了 100万元无偿拨款的资助 。
科技型中小企业技术创新基金是经国务院批准设立 , 用于支持科技型中小企业技术创新项目的政府专
业基金 。该项基金优先支持产 、学 、研的联合创新 , 优先支持技术水平高 , 持续创新能力强 , 管理科学 、
产品市场和效益前景好的企业 。
药品溶出全自动分析系统包括药物溶出仪 、 取样器 、 紫外分光光度计及计算机系统四部分 , 采用计算
机系统操作和一体化控制 。它具有八个通道检测方式 、自动控制投料 、自动反馈调节试验条件 , 自动取样
送液 , 自动检测吸收度的特点 。计算机除实施控制外 , 专用软件能够自动计算各种数值 , 绘制曲线与图
表。该系统不仅能按照要求定时检测溶出度值 , 还能够连续实时地检测 , 为更微观全面地考察和研究药品
质量提供了技术基础 。
药品溶出全自动分析系统研制成功 , 填补了我国在药检领域的空白 , 提高了药品检测的自动化 , 更有
助于提高工作效率和进一步开展药品研究工作。该系统由于价格大大低于进口产品 , 符合我国国情 , 投放
市场将为我国节约大量外汇。
·237·　20 (4), 2000