全 文 ：收稿日期:2009-09-17;　修订日期:2009-12-10
基金项目:《中国药典 》2010版Ⅰ部标准研究课题(No.YZ-046)
作者简介:刘晶晶(1984-),女(汉族),河北唐山人 ,现为成都中医药大学
药物化学专业在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药化学和药材质量
标准研究工作.
＊通讯作者简介:陈　幸(1955-), 女(汉族),重庆人 ,现任四川省中医药
科学院研究员 ,硕士学位 ,主要从事中药化学、药材品质研究工作.
大孔吸附树脂富集纯化川牛膝中杯苋甾酮的研究
刘晶晶 1, 2 ,陈　幸 1＊
(1.四川省中医药科学院药学研究所 ,四川 成都　610041;　2.成都中医药大学药学院 ,四川 成都　611730)
摘要:目的 应用大孔吸附树脂富集纯化川牛膝中有效成分杯苋甾酮。方法 川牛膝醇提取液回收乙醇后上大孔吸附树
脂柱 , 以水和不同浓度的乙醇依次洗脱 , 再用硅胶柱进一步分离纯化。结果 杯苋甾酮集中在 75%乙醇洗脱部分 ,且纯度
较高 , 能够最大限度地去粗取精。结论 采用大孔吸附树脂方法富集 、纯化川牛膝中杯苋甾酮可行。
关键词:川牛膝;　 杯苋甾酮;　大孔树脂
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.069
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)09-2274-01
EnrichmentandPurificationofCyasteroneinCyathulaoficinalisKuanwithMacro-
porousAbsorptiveResins
LIUJing-jing1, 2 , CHENXing1＊
(1.SichuanAcademyofChineseMedicineSciences, Sichuan610041, China;2.SchoolofPharmaceuticalSci-
ences, ChengduUniversityofT.C.M, Chengdu611730, China)
Abstract:ObjectiveToenrichandpuriycyasteroneinCyathulaofficinalisKuanwithmacroporousabsorptiveresins.Methods
ThemacroporousabsorptiveresincolumnsabsorbingtheCyathulaoficinalisKuanethanolextractswereelutedrespectivelywith
wateranddifferentconcentrationsofethanol, thenseparatedandpurifiedwithsilicagelcolumnchromatography.ResultsThehigh
-purityofcyasteroneconcentratedin75% alcoholeluant, somacroporousabsorptiveresinscouldremoveimpuritiesandabsorb
theessences.ConclusionItisfeasibletoenrichandpurifycyasteroneinCyathulaofficinalisKuanwithmacroporousabsorptive
resins.
Keywords:CyathulaofficinalisKuan;　Cyasterone;　Macroporousabsorptiveresin
　　川牛膝 , 苋科植物川牛膝 CyathulaoficinalisKuan.的干燥
根 , 具有逐瘀通经 、通利关节 、利尿通淋之功效 [ 1] ,为著名的川产
道地药材。四川省中药研究所陈幸等 [ 2]从中得到杯苋甾酮 , 并
进行了含量测定 , 但对其分离纯化还未进行深入研究。大孔吸附
树脂是 20世纪 60年代发展起来的一类高分子聚合物吸附剂 ,近
年来在天然药物化学成分的提取 、分离纯化等方面有了较广泛的
应用研究。利用大孔吸附树脂的多孔结构和选择性吸附功能可
从中药提取液中分离精制有效成分或有效部位 ,最大限度地去粗
取精 [ 3] 。本文探索了以川牛膝为原药材 , 经过乙醇提取 、大孔树
脂分离纯化 、硅胶柱色谱分离 、结晶 、干燥 , 得到高纯度的川牛膝
对照品杯苋甾酮(HPLC测定纯度为 98.8%)。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪(安捷伦 1200);二极管阵列检测器(DAD);
色谱柱:20RBAXEclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm, 5 m)。硅
胶 G,硅胶 H(青岛海浪硅胶干燥剂厂), 甲醇为色谱纯 , 水为蒸
馏水 , 其他试剂为分析纯。川牛膝购自四川省成都市西南药都
(经鉴定 ,符合《中国药典》 2005年版Ⅰ部川牛膝项下规定)。
2　方法和结果
2.1 　提取 取川牛膝 30 kg, 95%乙醇回流提取 3次 , 2 h/次 ,滤
过 , 减压浓缩 ,得浸膏 5.6 kg。
2.2　大孔树脂预处理 取大孔树脂 20kg, 95%乙醇浸泡 24 h洗
脱吸附性杂质后 ,水洗至 pH值至中性;5%盐酸浸泡 12 h, 水洗
至中性;4%氢氧化钠浸泡 12h, 水洗至中性 ,待用。
2.3 　大孔树脂分离纯化研究
2.3.1　大孔树脂分离方法 把川牛膝浸膏加入到经过预处理的
大孔树脂柱上 ,先用水洗脱至无色 ,挥干 ,得浸膏①2300 g。再用
75%的乙醇洗脱至无色 , 减压浓缩回收乙醇 , 得浸膏②550 g。最
后用 95%乙醇洗脱至无色 ,减压浓缩回收乙醇 , 得浸膏③210 g。
2.3.2　分离浸膏的 TLC鉴别 取 “ 2.3.1”项下浸膏①, ②, ③各
0.5 g,用 10 ml甲醇溶解 , 作为供试品溶液。另取杯苋甾酮 , 加甲
醇制成每毫升含 1 mg的溶液 , 作为对照品溶液。分别吸取上述
4种溶液各 5 μl, 点于同一硅胶 G薄层板上 , 以氯仿 -甲醇(10∶
1)为展开剂 , 展开 , 取出 , 晾干 , 喷以 10 %的硫酸乙醇溶液 , 在
105℃加热至斑点清晰。结果见图 1。杯苋甾酮集中在 75%乙醇
洗脱部分。
1.未上大孔树脂样品　　2.杯苋甾酮对照品　　
3.水洗脱部分　　　　　4.75%乙醇洗脱部分　
5.95%乙醇洗脱部分　　　　　　　　　　　　
图 1　川牛膝提取物大孔树脂吸附后洗脱各部分薄层色谱图
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9
2.3.3　分离浸膏的 HPLC含量测定 取原药材提取浸膏 0.2 g, 浸膏①, ②,
③约 0.1 g,甲醇定容于 10ml的容量瓶中。采用 HPLC进行检测 , 流动相见
表 1(A甲醇 , B水), 色谱图见图 2。流速 1 ml/min, 检测波长 243 nm, 柱温
35℃。
表 1　高效液相色谱条件
时间 t/min 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0～ 5 10 90
5～ 15 10※37 90※63
15～ 30 37 63
30～ 31 37※100 63※0
1.杯苋甾酮对照品　　2.川牛膝药材提取物　 3.水洗脱部分
4.75%乙醇洗脱部分　5.95%乙醇洗脱部分　　　　　　
图 2　川牛膝提取物大孔树脂吸附后洗脱各部分高效液相色谱图
　　根据薄层鉴别结果和高效液相图谱可知 , 杯苋甾
酮集中在 75%乙醇的洗脱部分 , 此方法能最大限度
的提高川牛膝有效成分杯苋甾酮的分离效率。
2.4 　后处理 取大孔树脂纯化后的浸膏②, 经过硅
胶柱进一步纯化和重结晶后得杯苋甾酮结晶 , HPLC
测定纯度为 98.8%。
3 　讨论
大孔吸附树脂具有吸附容量大 、解吸快 、洗脱率
高 ,可重复利用等优点 ,本实验尝试用大孔吸附树脂
分离纯化川牛膝 , 结果 75%乙醇能有效将杯苋甾酮
洗脱下来 ,说明采用大孔吸附树脂分离纯化川牛膝中
杯苋甾酮具有很好的效果。 此实验方法高效可行。
收率稳定 ,设备投资少 , 具有良好的应用前景。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S].北京:化学工
业出版社 , 2005:26.
[ 2 ] 　陈　幸 ,黎万寿 , 崔红梅.RP-HPLC法测定川牛膝中
杯苋甾酮的含量 [ J] .药物分析杂志 , 2000, 20(4):
234.
[ 3 ] 　王跃生 ,王　洋.大孔吸附树脂研究进展 [ J] .中国中
药杂志 , 2006, 13(13):961.
收稿日期:2009-10-14;　修订日期:2010-03-23
基金项目:国家中医药管理局重大科技专项(No.2001ZDZX005);广东省国际合作项目(No.2008A050200005)
作者简介:林朝展(1979-),男(汉族),广东揭阳人 ,现任广州中医药大学讲师 ,博士学位 ,主要从事中药活性成分及质量评价工作.
＊通讯作者简介:祝晨蔯(1967-),女(汉族),辽宁沈阳人 ,现任广州中医药大学研究员 ,博士生导师 ,博士学位 ,主要从事中药活性成分及质量评价研
究工作.
枇杷叶紫珠叶挥发油化学成分的研究
林朝展 ,柴　玲 ,祝晨蔯＊ ,赵钟祥 ,张翠仙
(广州中医药大学中药学院 ,广中尖峰天然产物共建实验室 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 对枇杷叶紫珠叶挥发油的化学成分进行分析。方法 采用水蒸气蒸馏法提取枇杷叶紫珠叶中挥发油 ,通过
GC-MS法对分离的化合物进行结构检索 ,应用峰面积归一化法得出各类成分的相对百分含量。结果 从枇杷叶紫珠中
鉴定出 43种成分 ,占总挥发油的 97.03%。结论 挥发油中烯烃类及其含氧化合物占 60.89%、醇类占 27.81%、醛酮类占
8.33%。其中相对含量大于 5%的有 β -石竹烯(20.87%)、4 -松油醇(15.99%)和甘香烯(6.97%)为其主要成分;此
外 , 石竹烯氧化物(4.32%)、脱氢香橙烯(4.17%)、紫罗烯 (2.49%)及 α-松油醇(2.14%)的含量也较高。
关键词:枇杷叶紫珠;　挥发油;　气相色谱 -质谱联用
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.070
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)09-2275-02
StudyonChemicalConstituentsoftheEssentialOilfromtheLeavesofCalicarpakonchi-
anaMakino
LINChao-zhan, CHAILing, ZHUChen-chen＊ , ZHAOZhong-xiang, ZHANGCui-xian
(ColegeofChineseTraditionalMedicine, GuangzhouUniversityofChineseMedicine, GuangzhongJianfengU-
nionResearchLabforNaturalProducts, Guangzhou510006, China)
Abstract:ObjectiveToanalyzethechemicalconstituentsoftheessentialoilfromtheleavesofCallicarpakonchianaMakinoin
GuangdongProvince.MethodsGC-MStechniquewasused.Results43 chemicalconstituentswereidentified, accountingfor
97.03% oftotalcontent.ConclusionThemaincomponentsoftheoilareβ -caryophyllene(20.87%), 4 -terpineol
(15.99%)andelixene(6.97%).Besides, caryophyleneoxide(4.32%), dehydroaromadendrene(4.17%), ionene(2.
41%)andα-terpineol(2.49%)alsohaverelativelyhighcontents.
Keywords:CalicarpakonchianaMakino;　Essentialoils;　GC-MS
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9 时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期