全 文 ：见表 2 ,平均 RSD为0.37%。
表 2　样品的测定结果(n=3)
Tab 2　determination results of samples(n=3)
样品编号 FDP/ % FDP-Mg/ % RSD/ %
1 92.4 98.5 0.35
2 91.8 97.9 0.34
3 91.5 97.5 0.41
4　讨论
由于本品含有镁离子 ,镁离子可影响酶促反应 。
文献[ 2]的含量测定法中用的缓冲液含有 EDTA ,当
称取适量标准 FDPNa3 加等摩尔 MgSO4 混合后 ,
FDP 回收率为99.8%,说明加入镁离子不影响 FDP
测定。但本品溶液中的镁不如硫酸镁中的镁易电
离 , pH 为4.0左右 , pH 不适合 EDTA 与镁完全络
合 ,所以当照搬文献进行含量测定时 , 含量大大偏
低 。但如果制备供试品溶液时加入一定量的氢氧化
钠调 pH 5.5 ～ 6.2 ,使镁完全络合再加各种酶 ,就能
准确地测定本品的含量 。
进行异常毒性试验时 ,由于本品中的镁能降低
心率 ,抗快速型心律失常 ,扩张动脉 ,降低血压 ,注射
速度不宜太快 ,否则会引起假阳性反应。
参考文献:
[ 1] 　彭盛德 ,龚培力 , 曾繁典.1 , 6-二磷酸果糖镁对异丙肾上腺素
所致大鼠心肌损伤的保护作用[ J] .中国药理学与毒理学杂
志 , 2000 , 14(4):300.
[ 2] 　中国药典.二部[ S] .2000.附录 VF.
[ 3] 　中国卫生部部颁标准(试行)[ S] .WS-185(X-161)95.
[ 4] 　中国卫生部部颁标准(试行)[ S] .WS-448(X-390)-97.
[ 收稿日期] 2002-12-22
[ 基金项目] 　“九五” 国家中医药科技攻关计划专题(编号:96-903-
02-04)
[ 作者简介] 　陈幸 ,女 , 硕士 ,研究员, 电话:028-85256143 , E-mail:
cjy55@fm163.com
高效液相色谱法测定独活寄生合剂中杯苋甾酮含量
陈幸 ,黎万寿 ,崔红梅　(四川省中药研究所 , 四川 成都 610041)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱法(HPLC)法测定独活寄生合剂中杯苋甾酮的含量 ,以控制该制剂的质量。方法:HPLC 法
检测 ,以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相 , 乙腈-水-磷酸二氢钠(22 mL∶100 mL∶1.55 g)为流动相 , 流速0.8 mL·min-1 ,检测
波长243 nm。结果:杯苋甾酮与其他组分分离良好 , 线性范围3.08 ～ 24.68 mg·L-1(r=0.9999), 平均加样回收率为99.10%
(RSD=1.63%, n =6)。结论:方法简便快速准确 , 可作为该制剂的质控方法。
[ 关键词] 　川牛膝;杯苋甾酮;高效液相色谱法;独活寄生合剂
[中图分类号] R284.1　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2003)08-0451-02
Determination of cyasterone in Duhuo Jisheng mixture by HPLC
CHEN Xing , LI Wan-Shou , Cui Hong-Mei(Sichuan Institute of Chinese Materia Medica , Sichuan Chengdu 610041)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To develop an HPLC me thod for determination of the cyasterone in Duhuo Jisheng mix ture and control
the quality.METHODS　Acetonitrile-water-sodium dihydrogen phosphate(22 mL∶100 m L∶1.55 g)w as used as mobile phase on
C18 column.The flow rate w as 0.8 mL·min-1.Detection w avelength w as 243 nm.RESULTS　The calibration curve was linear(r
=0.9999)within the range of 3.08～ 24.68 mg·L-1.The average recovery was 99.10% and RSD was 1.63%(n =6).CON-
CLUSIONS　The method can be used for control over the quality of the preparation.
KEY WORDS:Radix Cyathulae;cyasterone;HPLC;Duhuo Jisheng mix ture
　　独活寄生合剂由独活 ,桑寄生 ,川牛膝等 15味中
药组成 ,具有养血舒筋 ,祛风除湿的功效。其成分复
杂 ,定量比较困难 ,质量标准项下缺少定量方法 ,不利
于该产品的质量控制 。川牛膝中杯苋甾酮是强筋健
骨的有效成分[ 1] ,故以杯苋甾酮含量作为质量控制指
标。本文建立了高效液相色谱法测定杯苋甾酮含量
的方法 ,结果表明 ,该法可用于该制剂的质量控制。
1　仪器与试药
LC-10ATVP 高效液相色谱仪 , SPD-10TAVP
紫外测定仪 ,C-R6A 数据处理机(岛津);杯苋甾酮
对照品(自制 ,纯度99.26%)[ 2] ;独活寄生合剂(四
川绵阳一康制药有限公司 , 批号 970601 , 970602 ,
970603 , 970609);其他试剂均为分析纯 。
2　方法与结果　
2.1　色谱条件　色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为
固定相(150 mm ×4.6 mm , 5 μm ,大连依利特科学
仪器有限公司);柱温:(37±1)℃;流动相:乙腈-水-
磷酸二氢钠(22 mL ∶100 mL ∶1.55 g);流速:
0.8 mL·min-1;检测波长:243 nm , 灵敏度:0.01
·451·中国医院药学杂志 2003年第 23卷第 8期 Chin Hosp Pharm J , 2003 Aug , Vol 23 , No.8
Aufs;进样量:5μL。在此条件下 ,样品中杯苋甾酮
峰与其对照品峰的保留时间基本一致 ,且分离良好 ,
无其他干扰 ,见图 1。
图 1　对照品　(A)、样品　(B)、和空白样品　(C)、色谱图
Fig 1　Ch romatograms of chemical reference substance(A), sample(B)
and blank(C).
1.Cyasterone(杯苋甾酮)
2.2 　对照品溶液的制备 　精密称取杯苋甾酮
6.17 mg ,置100 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得(每1 mL中含杯苋甾酮61.7 μg)。
2.3　供试品溶液的制备　精密量取独活寄生合剂
16 mL(相当于1.04 g川牛膝), 置水浴锅上挥尽乙
醇 ,加少许水稀释 ,加氯化钠至饱和 ,用醋酸乙酯提
取 3次 ,每次20 mL。提取液水浴挥干 ,得残渣 。将
残渣用甲醇溶解 ,转移至50 mL量瓶中 ,加甲醇定容
至刻度 , 摇匀 , 即得(每1 mL中含独活寄生合剂
0.32 mL)。
2.4　线性关系　精密量取含量为61.7 mg·L-1的
对照品溶液0.5 , 1 , 2 , 3 , 4 mL ,置10 mL量瓶中 ,
加甲醇至刻度 ,摇匀 。分别取5μL进样 ,按上述色谱
条件测定峰面积 ,以杯苋甾酮浓度为横坐标 ,峰面积
为纵坐标 , 得回归方程:Y =3934X -4836 , r =
0.9999 ,线性范围为3.08 ～ 24.68 mg·L-1 。
2.5　空白试验　按处方比例称取相当于5.2 g川牛
膝的独活 ,桑寄生等(缺川牛膝)14 味中药 ,按独活
寄生合剂制备方法制备空白对照品溶液。取相当
1.04 g川牛膝的空白对照品溶液 ,按供试品溶液的
制备方法制备空白样品供试液 。按样品含量测定项
下操作 ,结果表明 ,空白样品对测定无干扰 ,见图 1。
2.6 　稳定性试验 　取同一供试品溶液(批号
970601),按正文方法制备供试品溶液 ,每1.5 h进样
一次 ,每次5μL ,共 5次。结果杯苋甾酮含量分别为
64.27 ,62.82 , 65.39 , 62.40和64.71 mg·L-1 ,平均
含量63.92 mg·L-1 , RSD 为1.98%,表明样品溶液
在7.5 h内基本上是稳定的 。
2.7　精密度及重复性试验　
2.7.1　精密度试验　精密吸取样品(批号 970601)
供试品溶液5μL ,按上述色谱条件连续测定 5次 ,杯
苋甾酮含量分别为64.14 , 63.31 , 63.97 , 65.22和
62.46 mg·L-1 , 平均含量63.82 mg·L -1 , RSD 为
1.60%。
2.7.2　重复性试验　取同批样品(批号 970601),
分别取 5份 ,按样品测定项下操作。结果杯苋甾酮
含量分别为64.73 , 63.59 , 66.31 , 63.20和66.02 mg
·L-1 ,平均含量64.77 mg·L-1 ,RSD为2.16%。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的样品(批号
970601)适量 ,分别精密添加一定量的杯苋甾酮对照
品 ,按样品测定项下操作 ,计算回收率 ,测定 6 次。
结果杯苋甾酮平均加样回收率为99.10%, RSD为
1.63%。
2.9　样品含量测定　分别精密量取不同批号的独
活寄生合剂供试品溶液5 μL ,依上述色谱条件测定 ,
计算本品中杯苋甾酮的含量 ,结果见表 1。
表 1　独活寄生合剂中杯苋甾酮含量测定结果(n=3)
Tab 1　Assay results cy asterone in Duhuo Jisheng mix ture(n
=3)
批号 含量/mg·L -1 RSD/ %
970601 64.46 1.19
970602 63.08 1.44
970603 66.47 1.37
970609 64.80 0.96
3　讨论
本实验曾选用乙腈-水(18∶82)和甲醇-水(35∶
65)系统 ,但两者对独活寄生合剂中杯苋甾酮的分离
效果均不甚理想 。采用本文所述的系统 ,杯苋甾酮
保留时间约24 min ,主峰与杂质峰基本分离 。
目前 ,川牛膝中杯苋甾酮含量在各级标准中均未
进行规范 ,建议有关部门对川牛膝中主要成分杯苋甾
酮建立质量控制标准 ,以保证临床用药安全有效。
独活寄生合剂为国家中药保护品种 ,以前的质
量标准仅有薄层鉴别 ,其中包含独活 、白芍 、川芎 、当
归 、川牛膝 、甘草等[ 3] 。杯苋甾酮为川牛膝的有效
成分之一 ,在“九五”课题研究中 ,我们已作了深入的
论证(包括药效学等)。本文通过测定川牛膝中杯苋
甾酮的含量 ,探讨增加该中成药的含量测定指标 ,为
提高产品的质量提供依据。关于独活 、桑寄生中有
效成分的含量测定 ,目前尚在研究中 。
参考文献:
[ 1] 　陈幸 ,黎万寿 ,朱久武 ,等.RP-HPLC法测定川牛膝中杯苋甾酮
的含量[ J] .药物分析杂志, 2000 , 20(4):234.
[ 2] 　陈幸 ,黎万寿 , 朱久武.含川牛膝中成药的薄层鉴别[ J] .中成
药 , 1999 , 21(6):287.
[ 3] 　黎万寿 , 陈幸.独活寄生合剂质量标准的研究[ J] .中药材 ,
2000 , 23(增刊):152.
[ 收稿日期] 2002-10-15
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