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［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20130403(003)
［基金项目］ 贵州省教育厅自然科学研究项目(20090119 号) ;黔南民族医学高等专科学校项目(QNYZ200902)
［通讯作者］ * 魏学军，副教授，从事中药质量控制研究，Tel:0854-8308038，E-mail:qndywxj@ 163. com
正交试验优选黔产铁苋菜中没食子酸的提取工艺
魏学军1* ，陈明1，余跃生1，林先燕1，冯光维1，李江2
(1. 黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558003;2. 贵阳中医学院，贵阳 550001)
［摘要］ 目的:优选黔产铁苋菜中没食子酸的提取工艺。方法:采用 HPLC测定铁苋菜中没食子酸含量，Diamonsil C18色
谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 05%磷酸(4∶ 96) ，检测波长 270 nm，柱温室温，流速 1 mL·min －1，进样量 10 μL。
以没食子酸转移率为指标，通过单因素试验筛选提取溶媒和提取方法，采用正交试验考察液固比、乙醇体积分数、提取温度、
提取时间对提取工艺的影响。结果:选择乙醇为提取溶媒，采用回流法提取。最佳提取工艺条件为加 30 倍量 70%乙醇于 90
℃提取 2 次，每次 4 h，没食子酸平均转移率 7. 888 mg·g －1(ＲSD 1. 60%)。结论:优选的提取工艺稳定可行，为黔产铁苋菜的
开发利用提供实验依据。
［关键词］ 铁苋菜;高效液相色谱法;没食子酸;正交试验;提取工艺;单因素试验
［中图分类号］ Ｒ284. 2;Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)21-0027-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013210027
Optimization of Extraction Process for Gallic Acid in Acalypha australis
from Guizhou by Orthogonal Test
WEI Xue-jun1* ，CHEN Ming1，YU Yue-sheng1，LIN Xian-yan1，FENG Guang-wei1，LI Jiang2
(1. Qiannan Medical College for Nationalities，Duyun 558003，China;
2. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extraction process of gallic acid in Acalypha australis from Guizhou．
Method:The content of gallic acid from A． australis was determined by HPLC，Diamonsil C18 column
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，mobile phase of acetonitrile-0. 05% phosphoric acid (4∶ 96) ，detection wavelength
270 nm，column temperature at room temperature，flow rate 1 mL·min －1，injection volume 10 μL． With transfer
rate of gallic acid as index，single factor tests were adopted to screen extraction methods and solvents，effects of
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Vol． 19，No． 21
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ratio of solid-liquid， ethanol concentration， extraction temperature and time on extraction technology were
investigated by orthogonal test． Ｒesult:The best extraction process of gallic acid was as following:extracted 2
times with 30 times the amount of 70% ethanol at 90 ℃，4 hours per time． Average transfer rate of gallic acid was
7. 888 mg·g －1 (ＲSD 1. 60%)． Conclusion:This optimized extraction process was stable and feasible，it could
provide experimental basis for development and utilization of A． australis from Guizhou．
［Key words］ Acalypha australis;HPLC; gallic acid; orthogonal test; extraction process; single
factor test
铁苋菜主要含黄酮、生物碱、鞣质等化学成分，
具有清热利湿、收敛止血的功能［1］，在贵州黔南苗
族聚集区被广泛应用，是药食同源品种，苗药称为
“海蚌含珠”［2］。没食子酸作为可水解鞣质的结构
单元，是铁苋菜中重要的活性成分之一，具有抗菌消
炎、止泻、止血和平喘等药理作用［3-4］。本实验以黔
产铁苋菜为原料药，没食子酸转移率为评价指标，通
过单因素试验和正交试验优选铁苋菜中没食子酸的
提取方法和工艺，为进一步开发利用黔产铁苋菜和
完善铁苋菜的质量控制标准提供理论依据。
1 材料
LC-10ATvp型高效液相色谱仪(日本岛津公
司) ，G80F20CN-B8 型微波炉(格兰仕集团) ，SG-
4050C型数显恒温水浴锅(上海硕光) ，DHG-9240A
型真空干燥箱(上海金山) ，2. 0Ｒ 型低速离心机(德
国 Heraeus 公司) ，AE240 型电子分析天平(瑞士
Mettler公司)。没食子酸对照品(中国食品药品检
定研究院，批号 110831-200803) ，乙腈为色谱纯，其
他试剂均为分析纯。铁苋菜药材采于本校植物园，
经贵阳中医学院李江教授鉴定为大戟科植物铁苋菜
Acalypha australis L．的干燥全草，样本留存于本校中
药标本室。
2 方法与结果
2. 1 没食子酸的含量测定［5］
2. 1. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 05%磷酸(4∶ 96) ，检
测波长 270 nm，柱温室温，流速 1 mL·min －1，进样量
10 μL。理论塔板数按没食子酸峰计算不低于
6 000，见图 1。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 精密称取过 3 号筛干
燥至恒重的铁苋菜粉末 1. 0 g，加对应溶剂按相关工
艺进行提取，提取液过滤后定容至 100 mL 量瓶中，
摇匀，即得，冷藏备用。
2. 1. 3 对照品储备液的制备 精密称取没食子酸
对照品 22. 5 mg，用流动相定容至 100 mL 量瓶中，
摇匀，即得。
A．对照品;B．供试品;1. 没食子酸
图 1 黔产铁苋菜 HPLC
2. 1. 4 标准曲线的制备 精密移取对照品储备液
1 mL，置于 10 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇
匀，得对照品溶液。精密移取不同体积对照品溶液，
按 2. 1. 1 项下色谱条件进行测定，以进样量为横坐
标，峰面积为纵坐标，得回归方程 Y = 1. 557 ×
106X + 208. 631(r = 0. 999 9) ，表明没食子酸进样量
在 0. 0225 ～ 0. 225 μg与峰面积呈良好线性关系。
2. 1. 5 精密度试验 取对照品溶液，连续进样 5
次，按 2. 1. 1 项下色谱条件进行测定，结果没食子酸
峰面积的 ＲSD 1. 43%，表明该仪器精密度良好。
2. 1. 6 稳定性试验 精密量取对照品溶液，分别于
0，2，4，6，8，10 h 进样，按 2. 1. 1 项下色谱条件进行
测定，结果没食子酸峰面积在 8 h内的 ＲSD 0. 76%，
说明没食子酸对照品溶液在 8 h内稳定。
2. 1. 7 重复性试验 精密移取同一供试品溶液，经
0. 45 μm 微孔滤膜滤过，按 2. 1. 1 项下色谱条件进
行测定，结果没食子酸峰面积的 ＲSD 2. 13%，表明
该方法重复性良好。
2. 1. 8 加样回收率试验 取已知没食子酸含量的
铁苋菜粉末，加入适量没食子酸对照品，按 2. 1. 2 项
下方法制备样品溶液，按 2. 1. 1 项下色谱条件进行
测定，结果平均回收率 98. 83%，ＲSD 2. 46%。
2. 2 没食子酸提取方法考察 在预试验基础上，选
取水、甲醇、70%乙醇为提取溶媒，溶剂用量 50 倍，
分别采用回流、超声、微波法提取 30 min，按 2. 1. 2
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项下方法制备供试品溶液，按 2. 1. 1 项下色谱条件
进行测定，结果水按不同方法提取时没食子酸转移
率(n = 3)分别为 2. 315，1. 451，1. 143 mg·g －1，甲醇
提取时则分别为 1. 544，1. 287，0. 916 mg·g －1，70%
乙醇提取时没食子酸转移率依次为 3. 267，2. 564，
1. 753 mg·g －1，故采用回流法提取没食子酸，选择乙
醇为提取溶媒。
2. 3 提取工艺优选 在预试验基础上，固定提取数
为 2 次，选取液固比、乙醇体积分数、提取温度、提取
时间为考察因素，各因素取 3 个水平，称取 9 份黔产
铁苋菜样品，按 L9(3
4)正交设计表进行试验，因素
水平见表 1，试验安排及结果见表 2，采用 SPSS 13. 0
统计软件对结果进行处理，方差分析见表 3，以直观
分析和方差分析判断各因素对没食子酸提取的影响
程度，筛选最佳提取工艺。
表 1 黔产铁苋菜中没食子酸提取工艺正交试验因素水平
水平
A
液固比
B
乙醇体积分数
/%
C
提取温度
/℃
D
提取时间
/h
1 30∶ 1 60 80 2
2 40∶ 1 70 90 3
3 50∶ 1 80 100 4
表 2 黔产铁苋菜中没食子酸提取工艺正交试验安排
No． A B C D
没食子酸转移率
/mg·g － 1
1 1 1 1 1 4. 337 1
2 1 2 2 2 7. 540 8
3 1 3 3 3 7. 376 1
4 2 1 2 3 7. 013 5
5 2 2 3 1 5. 670 5
6 2 3 1 2 6. 831 2
7 3 1 3 2 5. 864 0
8 3 2 1 3 7. 503 1
9 3 3 2 1 5. 833 2
K1 19. 254 0 17. 214 6 18. 671 4 15. 840 8
K2 19. 515 2 20. 714 4 20. 387 5 20. 236 0
K3 19. 200 3 20. 040 5 18. 910 6 21. 892 7
Ｒ 0. 315 3. 450 1. 716 6. 052
由直观分析可知，影响没食子酸提取工艺的因
素顺序为 D ＞ B ＞ C ＞ A。以极值最小的 A 因素为误
差项进行方差分析，结果 D，B 因素对没食子酸提取
工艺 的 影 响 极 显 著，确 定 最 优 提 取 工 艺 为
A1B2C2D3，即加 30 倍量 70% 乙醇于 90 ℃提取 2
次，每次 4 h。称取黔产铁苋菜样品 5 份，按优选的
表 3 没食子酸提取工艺方差分析
方差来源 SS f MS F P
A(误差) 0. 018 9 2 0. 009 5
B 2. 298 7 2 1. 149 4 120. 989 5 ＜ 0. 01
C 0. 575 9 2 0. 288 0 30. 315 8 ＜ 0. 05
D 6. 520 8 2 3. 260 4 343. 200 0 ＜ 0. 01
注:F0. 01(2，2)= 99. 00，F0. 05(2，2)= 19. 00。
提取工艺进行验证试验，结果没食子酸平均转移率
7. 888 mg·g －1(ＲSD 1. 60%)。
3 讨论
没食子酸可溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，故
选择回流、超声、微波 3 种方法于不同溶媒条件下进
行提取，比较没食子酸转移率，筛选最佳提取方法及
其工艺，该设计方案较为全面地考察了影响没食子
酸提取的各种因素，避免了采用单一溶媒考察不同
提取方法研究的局限性。关于流动相的选择，预试
验曾参考相关文献［5-8］，对各种溶剂系统进行比较，
结果表明采用本文流动相时分离效果好、峰形漂亮、
保留时间适宜，且较好地消除了各种干扰峰的影响。
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［责任编辑 仝燕］
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