全 文 ：第 41 卷第 14 期
2013 年 7 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 41 No. 14
July. 2013
高效液相色谱法测定向日葵花盘中绿原酸含量
索金玲1，阿依丁1，张金龙1，彭 秧2
( 1 阿拉山口出入境检验检疫局技术中心，新疆 阿拉山口 833418;
2 新疆大学化学化工学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要:建立了向日葵花盘中药用成分绿原酸的高效液相色谱(HPLC)定量分析方法。色谱柱:Agilent XDB C18(4. 6 mm ×
50 mm，1. 8 μm) ;流动相:乙腈:0. 1%磷酸 (11∶89) ;流速:0. 5 mL /min;检测波长:328 nm。通过测定，向日葵花盘中绿原
酸含量为 0. 227%。方法精密度 ＲSD为 0. 13%，重复性良好，平均回收率为 102. 69%，绿原酸浓度在 0. 67 ～ 67 μg /mL呈良好线性
关系，r = 0. 99998。该方法稳定、可靠，可作为该药材的质量控制方法。
关键词:向日葵花盘;绿原酸;高效液相色谱
中图分类号:O657 文献标识码:A 文章编号:1001 － 9677(2013)14 － 0138 － 03
作者简介:索金玲 (1984 －) ，女，工程师，主要从事分析化学方面研究。
Determination of the Contents of Chlorogenic Acid Sunflower Disc by HPLC
SUO Jin － ling1，A Yi － ding1，ZHANG Jin － long1，PENG Yang2
(1 Alashankou entry － exit inspection and quarantine Bureau，Xinjiang Alashankou 833418;
2 College of Chemistry and Chemical Engineering，Xinjiang University，Xinjiang Urumqi 830046，China)
Abstract:A method of determination the content of chlorogenic acid in sunflower disc by high performance liquid
chromatography (HPLC)was developed. The conditions were column of Agilent XDB C18 (4. 6 mm ×50 mm，1. 8 μm) ，
mobile phase:acetonitrile:0. 1% phosphoric acid (eleven:eighty － nine) ，flow rate 0. 5 mL /min，and detection wave-
length 328 nm. The content of chlorogenic acid in sunflower flower was 0. 227%，and the method precision (ＲSD)was
0. 13%，repeatability. The average recovery was 102. 69%，and chlorogenic acid showed a good linear relationship
between concentration 0. 67 ～ 67 μg /mL，and r = 0. 99998. The method was stable，reliable，and could be used as a
quality control method of the medicine.
Key words:sunflower disc;chlorogenic acid;high performance liquid chromatography
向日葵作为我国重要的油料作物，其药用价值也相当高，
根、茎、叶、花和子实都是良好的医药材料， 《中药大辞典》
中记载:“向日葵子可以透浓血，治血痢，慢性骨髓炎;皮壳
可治耳鸣;叶片中含有一种类似奎宁成分的抗疟药物，可降
压，解毒;花瓣可以祛风明目，治头晕、牙痛;根系有清热利
湿、行气止痛的功效;花盘可清湿热，利小便、消炎症、降血
压;茎秆髓部对治疗尿道结石有良好的疗效;茎秆中的汁液可
治愈伤口［1］。”另外，向日葵花盘还具有解眩晕，治牙痛、胃
痛、妇女痛经、产后血晕、乳腺炎以及滋补肝肾、止崩漏出血
的功效［2］。在我国，向日葵花盘曾用于民间验方中治疗多种疾
病［3］，但其综合利用率尚低，因此，对其有效成分的测定显得
尤为重要。文献报道，向日葵中含有生物活性物质绿原酸，其
主要有抗菌、抗病毒的作用［4］，有抗氧化作用［5］，有抑制突变
和抗肿瘤作用［6］，有保肝利胆的作用［7］，有心血管保护、食品
保鲜、抗紫外抗辐射的作用［8］，有降糖、降脂作用［9］等。而绿
原酸的测定方法很多，可根据检测目的及实际条件选择合适的
方法。高效液相色谱法在中药有效成分的检测中应用较多，其
测定绿原酸含量，速度快，灵敏度高，专属性好，通过对色谱
条件的选择，可达到满意效果［10］。本实验采用高效液相色谱法
对向日葵花盘中药用成分绿原酸含量进行测定，以期为该植物
的开发利用以及在新型药物的开发等方面提供一定参考。
1 仪器与试剂
原料:开花期向日葵花盘，采自新疆昌吉地区。
药品与试剂:绿原酸对照品 (中国药品生物制品检定所，
批号:0753 － 200111) ;甲醇(色谱纯) ，乙腈(色谱纯) ，磷酸
(分析纯)。
仪器:HPLC 高效液相色谱 (Agilent 1200) ;色谱柱:
Agilent XDB C18 (4. 6 mm × 50 mm，1. 8 μm) ;1004 电子天平，
上海天平仪器厂;SHN －Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科
工贸有限公司;DHG － 9140A 型电热恒温鼓风干燥箱，上海精
密试验设备有限公司;超声波清洗器。
2 方法与讨论
2. 1 色谱条件
HPLC高效液相色谱:Agilent 1200;
色谱柱:Agilent XDB C18 (4. 6 mm × 50 mm，1. 8 μm) ;
第 41 卷第 14 期 索金玲等:高效液相色谱法测定向日葵花盘中绿原酸含量 139
流动相:乙腈:0. 1%磷酸 (11:89) ;
流速:0. 5 mL /min;检测波长:328 nm;
柱温:35 ℃;进样量:5 μL。
2. 2 对照品溶液制备
准确称取真空干燥至恒重的绿原酸标准品 6. 7 mg，加入已
配置好的 50%甲醇溶液溶解并于 50 mL容量瓶中用 50%甲醇稀
释至刻度，摇匀，即为浓度 134 μg /mL的绿原酸标准溶液。准
确移取绿原酸标准溶液 0. 05、0. 1、0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、
5. 0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中，加入 50%甲醇溶液稀释至
刻度，摇匀，配制成绿原酸浓度为 1. 34、6. 7、13. 4、26. 8、
40. 2、67 μg /mL的标准系列溶液，测定时须过 0. 45 μm微孔滤
膜，进行测定。
2. 3 供试液的制备
用蒸馏水将向日葵花盘洗净后于 60 ℃鼓风干燥箱中烘干。
将烘干的向日葵花盘进行粉碎，粉末于干燥器中保存备用。
分别称取三份粉碎的向日葵花盘粉末各 0. 5 g，精却至
0. 0001 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50 mL，称
定质量，超声提取 30 min，放冷，再称定质量，用 50%甲醇补
足减失的质量，摇匀，滤过，再过 0. 45 μm微孔滤膜，即得。
2. 4 对照品及样品色谱图
按照 2. 1 中色谱条件对一绿原酸标准样品进行测定，进样
量为 5 μL，色谱图见图 1。
图 1 绿原酸对照品色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatogram of chlorogenic acid
按照相同色谱条件，对向日葵花盘提取液进行测定，进样
量为 5 μL，色谱图见图 2。
图 2 向日葵花盘色谱图
Fig. 2 HPLC Chromatogram of maturity stage sunflower plate curve
由图 1 和图 2 可知，通过绿原酸标准对照品与向日葵花盘
提取液色谱图进行对照，可定性地判定向日葵花盘中含有一定
量绿原酸，其含量可进行外标法定量分析。
2. 5 线性关系考查
分别 取 浓 度 为 0. 67、1. 34、6. 7、13. 4、26. 8、40. 2、
67 μg /mL的标准系列溶液在 2. 1 的色谱条件下进行绿原酸含量
测定。以绿原酸浓度为横坐标，以组分峰面积为纵坐标进行线
性回归，标准曲线图见 3。其回归方程为:y = 28. 59187x +
2. 42989，相关系数为 0. 99998。结果表明，绿原酸浓度在
0. 67 ～ 67 μg /mL之间，组分峰面积的线性关系良好。
图 3 绿原酸标准曲线
Fig. 3 Chlorogenic acid calibration curve
2. 6 精密度测定
精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经
多次取样测定所得结果之间接近的程度，一般用相对标准偏差
(ＲSD)表示。相对标准偏差(ＲSD)越小，说明测定结果越集
中，精密度越好。对同一份向日葵花盘样品甲醇提取液，按相
同色谱条件重复进样 6 次进行平行测定，外标法定量，通过计
算得相对标准偏差(ＲSD)为 0. 13%，表明仪器的精密度较好。
2. 7 重复性实验
重复性是指在同一条件下对同一批样品，从样品供试品液
制备开始，制备至少 6 份以上供试品溶液(即 n ＞ 6) ，或设计
3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试溶液，进行测定，
计算其含量的平均值和相对标准偏差(ＲSD)。本实验平行制备
向日葵花盘甲醇提取液 6 份，分别进行测定，外标法计算含
量。通过计算得出向日葵花盘样品中绿原酸含量的 ＲSD 小于
2. 5%，表明本法重复性良好，符合一般检测要求。
2. 8 回收率测定
回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损
失越少，回收率越高，通常用来说明方法的准确度。本实验通
过在样品供试液制备过程中加入已知量的对照品绿原酸来进行
加标回收率测定，根据公式:加标回收率 =(加标试样测定值
－试样测定值)÷加标量 × 100%，进行加标回收率计算，测定
结果见表 1。
表 1 回收率实验结果
Table 1 Ｒesults of Ｒecovery Test
样品含量
/μg
添加量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
向日葵花盘
10. 16349 13. 4 24. 18592 102. 64
10. 16349 13. 4 24. 19754 102. 69
10. 16349 13. 4 24. 18720 102. 65
102. 66
由表 1 可知，通过样品加标回收率的测定与计算，绿原酸
平均回收率为 102. 69%，说明此法测定向日葵花盘中绿原酸含
量，方法准确度较好，满足一般检测要求。
2. 9 样品含量的测定
分别称取 6 份干燥的向日葵花盘粉末，按照 2. 3 中步骤制
( 下转第 154 页)
154 广 州 化 工 2013 年 7 月
2. 3 废水中污染物排放总量的月变化规律
图 2 印染废水中污染物排放量的月变化
Fig. 2 monthly Changes of the printing and dyeing wastewater pollutants
废水中三种污染物月排放量呈不同的变化趋势。1 ～ 3 月
COD排放量从 227 t /m 急速上升 753 t /m，而 4 ～ 12 月 COD 排
放量呈小幅波动、缓慢上升的趋势;1 ～ 2 月 TP 排放量从
0. 725 t /m急速上升 2. 600 t /m，3 ～ 12 月 TP 排放量在 1. 949 ～
2. 755 t /m 小幅波动;上半年 1 ～ 6 月 NH3 － N 排放量先从
4. 737 t /m急速上升 13. 08 t /m，之后又迅速下降为 4. 779 t /m，
下半年 7 ～ 12 月 NH3 － N 排放量变化幅度也较大，在 2. 899 ～
6. 075 t /m之间波动。
3 结 论
(1)研究区域印染废水的 pH 值变化较大，废水的 pH 值
基本呈弱碱性和碱性。
(2)污染物浓度月变化:其中 COD的变化幅度最小，TP
的变化幅度次之，而 NH3 － N的变化幅度最大。COD平均浓度上
半年的明显高于下半年，TP上半年的平均浓度和下半年的相差不
多，NH3 －N上半年浓度是下半年的两倍多，变化幅度最大。
(3)污染物排放量月变化:1 ～ 3 月 COD排放量急速上升，
而 4 ～12月 COD排放量呈小幅波动、缓慢上升的趋势;1 ～ 2 月
TP排放量急速上升，3 ～ 12 月 TP排放量小幅波动;NH3 － N全
年的排放量波动较大。
(4)园区废水中，指标 NH3 － N达到二级排放标准，指标
TP达到三级排放标准，而指标 COD 未达到三级排放标准，所
以园区废水不能直接排放。
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87 － 89．
( 上接第 139 页)
备样品供试液，并按 2. 1 中色谱条件进行测定，样品中绿原酸
含量测定测定结果见表 2。
表 2 样品测定结果
Table 2 Ｒesults of determination
样品编号 绿原酸含量 /% 平均含量 /%
向日葵花盘
1 0. 227
2 0. 227
3 0. 226
4 0. 227
5 0. 228
6 0. 226
0. 227
3 结 论
中国药典［11］中规定药类植物菊花按干燥品计算，含绿原酸
(C16H18O9)不得少于 0. 20%。而采用高效液相色谱法测定向
日葵花盘中绿原酸含量，方法简单，快速，回收率高，重复性
好，且通过测定，向日葵花盘中绿原酸含量为 0. 227%，本法
为进一步开发向日葵花盘药用作用提供一定参考依据。
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