全 文 ：文章编号:1004-5422(2013)01-0131-03
HPLC法测定复方杏香兔耳风
颗粒绿原酸含量
蒲春霞1 , 张　玲2 , 张　旭1
(1.成都大学 医护学院 , 四川 成都　610106;2.成都力思特制药有限公司 , 四川 成都　610017)
摘　要:建立以高效液相色谱法测定复方杏香兔耳风颗粒中绿原酸的含量的方法 ,实验以绿原酸浓度 、对峰面
积进行回归分析 , 得知绿原酸的样品浓度在 20 ～ 200 μg 之间的范围内呈良好线性关系 , 平均回收率为 95%～
101%, 精密度试验的 RSD为 0.40%.实验结果表明 , 采用 HPLC 法测定杏香兔耳风颗粒中绿原酸含量 , 方法灵
敏度高 , 专属性强 ,结果准确可靠.
关键词:杏香兔耳风;绿原酸;含量;HPLC
中图分类号:R284　　　　　　　　　　文献标志码:A
0　引　言
复方杏香兔耳风颗粒由杏香兔耳风和白术 2味
中药组成[ 1] ,具清热解毒 、祛痰生新之功效[ 2] .目前 ,
该颗粒制剂原质量标准中只有通过理化鉴别和白术
的薄层鉴别 2种方法来控制其产品质量 ,由于没有
制剂的含量测定 ,不能很好地控制该产品的内在质
量.本研究对该制剂君药的特征成分绿原酸含量的
测定进行研究 , 建立了一种基于高效液相色谱
(HPLC)法的检测方法 ,并对其进行了方法学的验
证.实验表明 ,本检测方法操作简单 、专属性强 、精密
度好 、结果准确可靠 ,将其收载到复方杏香兔耳风颗
粒质量标准中 ,可进一步确保产品的质量.
1　仪器与试药
1.1　仪　器
实验所用仪器包括:Alltech Series1500HPLC
Pump高效液相色谱仪 ,101A-2B型干燥箱 ,AB204-N
型电子天平 ,AS5150AD超声清洗器.
1.2　试　药
实验所用药品包括:绿原酸对照品 ,由中国药品
生物制品检定所提供(批号 ,110753-200413),供含
量测定用 ,在选定色谱条件下 ,按外标法计算含量为
100.00%,使用前置干燥器中干燥密闭保存;白术对
照药材(批号 ,120925-200407),由中国药品生物制
品检定所提供;甲醇为色谱纯试剂(MERCK);自制
复方杏香兔耳风颗粒(批号 ,100701 、100702 、100703 ,
中试样品);市售复方杏香兔耳风片(批号 ,110501),
由江西京通美联药业有限公司生产;实验用水为蒸
馏水 ,其他试剂为分析纯.
2　方法与结果
2.1　色谱条件
通过实验分析确定 ,实验的色谱条件为:色谱柱
为 Ultimate XB-C18(150 mm×4.6 mm ,5μ);流动相 A
为 2%乙酸水溶液 ,梯度洗脱(0 ～ 20 min , 80%A;20
～ 20.1 min ,50%A;20.1 ～ 35 min , 50%A;35 ～ 35.1
min ,80%A;35.1 ～ 60 min , 80%A);流动相 B 为甲
醇 ,梯度洗脱(0 ～ 20 min ,20%B;20 ～ 20.1 min , 50%
B;20.1 ～ 35 min , 50%B;35 ～ 35.1 min , 20%B;35.1
～ 60 min , 20%B);流速为 1.0 mL·min-1 ,检测波长
为 327 nm ,进样量为10 μL.在此条件下得以下对照
品和供试品色谱图如图 1 、2所示.
图 1　绿原酸对照品色谱图
收稿日期:2013-04-18.
作者简介:蒲春霞(1974 — ), 女 , 副教授 , 从事中药新药开发与评价研究.
图 2　绿原酸供试品色谱图
由图 1 、2可知 ,对照品 、供试品在约 13 min时有
一色谱峰.
2.2　溶液配制
1)绿原酸对照品溶液配制.精密称取绿原酸对
照品 10.5 mg 至250 mL 容量瓶中 ,加 50%甲醇稀释
至刻度 ,摇匀即得.
2)供试品溶液配制.精密称取样品内容物
1.0013 g ,加 50%甲醇稀释 ,溶解 ,定容至 50 mL ,离
心 ,过滤 ,即得.
2.3　线性关系考察
取绿原酸对照品 10.3 mg ,置 25 mL 容量瓶中 ,
加50%甲醇使其溶解并定容至刻度.取上述溶液适
量 ,加 50%甲醇分别配成每 1 mL 含绿原酸 20 、40 、
80 、100 、200 μg 的溶液.在上述拟定的色谱条件下 ,
精密量取上述溶液各 10 μL 注入液相色谱仪 ,测定
峰面积(Y),以峰面积(Y)对进样量(X)作图 ,得回
归方程 ,
　Y =18502X+9997.8 , 　r=0.9999.
结果表明 ,进绿原酸的样品浓度在 20 ～ 200 μg
之间的范围内 ,绿原酸峰面积(Y)与进样量(X)有良
好的线性关系.
绿原酸对照品不同进样量和峰面积对照表如表
1所示.
表 1　绿原酸对照品不同进样量和峰面积对照表
序　号 样品浓度/μg 峰面积
1 20 375 856
2 40 755 673
3 80 1 121 666
4 100 1 487 099
5 200 1 860 367
2.4　精密度测定
取杏香兔耳风颗粒供试品(批号 ,100701)溶液 1
份 ,进样 10 μL ,重复进样 5次 ,测定峰面积 ,计算得
绿原酸峰面积的 RSD为 0.40%(见表 1).
2.4.1　稳定性.
取对照品溶液 ,分别于0 、2 、4 、6 、8 h进样10μL ,
测定色谱峰面积 ,计算得绿原酸峰面积的 RSD 为
0.62%(见表1).
2.4.2　重现性.
取供试品(批号:100701)5份 ,制备供试品溶液 ,
进样测定 , 计算得绿原酸质量分数的 RSD 为
0.56%.
表 2　精密度实验结果
实验次数 对照品峰面积 平均 供试品峰面积 平均
1 770 402 　 449 379
2 770 830 　 452 234
3 782 128 775 286 452 488 451 750.5
4 776 357 　 454 612
5 776 714 　 451 344
　 　RSD=0.62% 　 　RSD=0.40%
2.5　加样回收率实验
取已知含量的样品(批号 , 100701;含量 , 1.25
mg/g)约 1.0 g 6份 ,分别加入对照品 1.23 、1.25 、
1.23 、1.28 、1.24 、1.25 mg ,按照上述供试品溶液的制
备方法和色谱条件 ,制备加样回收样品溶液并注入
色谱仪中测定 ,其绿原酸回收率在 95%～ 101%之
间.加样回收率实验结果如表 3所示.
表 3　加样回收率实验结果(n=6)
编　号 样重/g 绿原酸量/mg 加入绿原酸量/mg 回收率/ %
1 1.1015 1.3769 1.23 100.64
2 1.1006 1.3758 1.25 98.39
3 1.0528 1.3160 1.23 98.97
4 1.1255 1.4069 1.28 99.04
5 1.1308 1.4135 1.24 98.99
6 1.2002 1.5002 1.25 96.10
2.6　样品测定
取 3批中试样品(批号 ,100701 、100702 、100703)
按上述拟定方法制备供试品溶液各10μL ,注入液相
色谱仪 ,按上述色谱条件测定 ,并计算含量.结果如
表 4所示.
表 4　杏香兔耳风颗粒绿原酸含量
批号 质量/g 含量/(mg/g) 平均含量/(mg/g)
100701 0.4885 1.25
100702 0.5324 1.25 1.25
100703 0.5088 1.24
3　结　论
本研究采用甲醇 —2%乙酸水溶液梯度洗脱方
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法 ,样品得到较好的分离度 ,且保留时间适当.本研
究确定的方法可以较好地测定杏香兔耳风颗粒中绿
原酸的含量 ,可为复方杏香兔耳风颗粒产品的质量
控制提供参考和科学依据.
参考文献:
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Determination of Chlorogenic Acid in Xingxiang
Tu-erfeng Granules by HPLC
PU Chunxia1 , ZHANG Ling2 , ZHANG Xu1
(1.School of Medicine and Nursing , Chengdu University , Chengdu 610106 , China;
2.Chengdu List Pharmaceutical Co., Ltd., Chengdu 610017, China)
Abstract:This study established the method to determine chlorogenic acid content by HPLC in Xingxiang
Tu-erfeng granules ,did the regression analysis based on the allybromide concentration and peak area by the
experiment , and found that sample concentration of chlorogenic acid showed a good linear relationship in
the range between 20 ～ 200μg.The average recovery rate was 95%～ 101% and precision test RSD was 0.
4%.The experiment confirms that this method is of high sensitivity , strong specificity , accurate and reli-
able.
Key words:xingxiang tu-erfeng granules;chlorogenic acid;content;HPLC
·133·第 2期　　　　　蒲春霞 ,等:HPLC法测定复方杏香兔耳风颗粒绿原酸含量