全 文 ：【方药研究】
藤梨根含药血清对鸡胚尿囊膜微血管生长的影响

吴秋玲1，刘竺华1，李朝喧1，周晓丽2
(1．山西中医学院，太原 030024;2．山西省中医院，太原 030001)
摘要:目的: 探讨中药藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜( CAM) 血管生成的影响，以衡量其抑制或诱生新血管发生的能力。方法:采
用 CAM技术和计算机图像分析技术，观察藤梨根含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管数量和血管面积的影响。结果:藤梨根高剂量
组与空白组、血清组比较，有较明显的抑制新血管生成能力，低剂量组无显著影响。结论:藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一
定的抑制作用。
关键词:藤梨根;血管生成;鸡胚尿囊膜;肿瘤
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:B 文章编号:1006-3250( 2014) 03-0388-02
基金项目:山西省科技攻关项目-基于 HIF-1α、VEGF 的表达探讨
藤梨根抑制肿瘤转移的机理(20120313026-9)
作者简介:吴秋玲( 1968-) ，女，山西太原人，副教授，医学博
士，从事中医内科学的临床与教学研究。
长期以来，肿瘤一直是危害人类健康的重要杀
手，而其中大多数患者均死于肿瘤的浸润和转移。
临床上如何防止肿瘤的浸润转移，是肿瘤防治的重
要环节。“肿瘤生长依赖血管生成”假说的提出，使
抗血管生成的研究得到广泛关注，目前国内外众多
学者把研究的重点转移到从中药中筛选抑制肿瘤新
生血管的药物。藤梨根为猕猴桃科猕猴桃，属软枣
猕猴桃的根，性酸、涩、凉，具有清热解毒、消肿疥、祛
风除湿、利尿止血的功效，临床广泛用于抗肿瘤治
疗，常与野葡萄藤、半枝莲、半边莲、白茅根等配伍使
用于各种癌症，尤对消化道肿瘤胃癌、肠癌等疗效显
著。
本实验采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)技术和计
算机图像分析技术，观察中药藤梨根含药血清对鸡
胚绒毛尿囊膜血管新生的影响，以衡量中药藤梨根
抑制或诱生新血管生成的能力，探讨藤梨根抗肿瘤
的作用机制，为临床中药治疗肿瘤并防止肿瘤转移
提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 实验动物 新鲜白皮种蛋，表面清洁，
每枚重 50 g ～ 60 g，蛋壳均质，受精率 ＞ 95%，购自
山西农科院养殖场。8 周龄 Wistar 大鼠 12 只，雌雄
各半，体质量(190 ± 20)g，购自山西医科大学实验
动物中心。
1. 1. 2 实验仪器 电热恒温孵育箱，DHP-
9162 上海-恒科技有限公司;超净工作台，上海巴艾
贝斯;倒置荧光显微镜图像采集处理系统;医用图像
分析仪，Image-Pro，美国;解剖显微镜，德国 Leica 公
司;眼科剪、眼科镊，上海医疗器械公司。
1. 1. 3 主要实验药品 藤梨根由山西省中医
院中药房提供，经专家鉴定质量符合实验要求。
1. 2 方法
1. 2. 1 含药血清的制备 (1)藤梨根浓缩液
的制备:取藤梨根 120 g，按常规中草药煎煮方法，煎
煮提取浓缩至 60 ml，得含相当于藤梨根生药 2 g /ml
的浓缩液，冷却保存备用;(2)动物选择与分组:清
洁级 Wistar大鼠 12 只，雌雄各半，随机数字表法分
为高剂量组、低剂量组、血清组(阴性对照组)，每组
4 只;(3)给药方法:藤梨根制成水煎浓缩液，剂量参
考李振光报道的给药剂量［1］。高剂量为临床成人
(体质量 60 kg)剂量的 20 倍，低剂量为临床成人
(体质量 60 kg)剂量的 10 倍，换算得出大鼠每 100 g
体质量每天给藤梨根高剂量为 3. 125 ml 藤梨根浓
缩液(即 6. 25 g)，低剂量组减半。血清组给予每天
2 ml生理盐水。大鼠每天 2 次灌胃给药，连续给药
1 周;(4)含药血清的制备:第 7 天于灌胃给药 2 h
后，以 10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血 5 ml离心，
吸取透明上清液，分离血清、灭活、除菌，试管分装，
－ 40 ℃冰箱保存备用。
1. 2. 2 CAM模型的制备 (1)种蛋表面依次
以温水(30 ～ 38 ℃)和 1∶ 1000 新洁尔灭液溶液消毒
后开始孵育。种蛋孵育于有通气孔且温度设置为
38. 4 ℃的培养箱中(湿度在 65 ～ 75%)，4 d 后温度
设置为 38. 2 ℃。每天转蛋 4 ～ 5 次，并检查胚胎发
育情况，及时淘汰发育不良的种蛋; (2)于第 2 ～ 10
天在照卵灯指示下寻找胚头，确定鸡胚绒毛尿囊膜
位置。酒精消毒开窗位置，用牙科钻在气室顶端打
1 mm ～2 mm小孔并穿透气室壳膜，在距胚头前 0. 5
cm，两条卵黄静脉之间的卵壳投影部位用笔标记出
面积 2 cm ×1. 5 cm区域，用牙科钻在表面轻轻磨切
出凹痕，无菌生理盐水消毒，用眼科镊平行向上轻揭
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中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
2014 年 3 月第 20 卷第 3 期
March 2014 Vol． 20. No． 3
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凹陷处蛋皮，轻撕内壳膜暴露 CAM，制成假气室。
以灭菌透明胶膜封闭假气室，形成透明观察窗。解
剖显微镜下观察并原位摄影。
1. 2. 3 藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管
生成的影响 (1)于孵育第 6 天，在检卵灯下观测
并标记气室及鸡胚位置，同上述方法制成假气室。
显微镜下观察并记录;(2)给药方法:制备假气室之
后，用眼科镊将无菌明胶海绵小块(3 mm ×3 mm ×3
mm)置于藤梨根含药血清中，充分饱和后，放置于
距离胚头 0. 5 cm 处两条卵黄静脉之间的相对少血
管区，无菌透明胶膜封贴，38. 2 ℃孵育 48 h;(3)观
察方法:孵育 48 h 后剥离假气室周围的蛋壳，使尿
囊膜充分暴露，解剖显微镜下记录血管图像;(4)检
测指标:将录制好的图像调入图像分析软件，参考文
献计数方法，以明胶海绵为中心选取相同面积的 4
个区域，应用医用图像处理软件测出所选区域的血
管数量和血管面积。
1. 2. 4 统计学方法 应用 SPPS 18. 0 统计软
件进行显著性检验，实验数据以均数 ±标准差(珋x ±
s)表示，进行方差分析和多重比较，P ＜ 0. 05，P ＜
0. 01 为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 藤梨根高低剂量组对 CAM血管生成数量
的影响
表 1 显示，我们之前的实验结果提示，4 至 6 d
鸡胚对于研究观察血管生成情况最理想，但 4 ～ 5 d
的鸡胚生命力弱、死亡率较高。6 d鸡胚血管网初步
形成，可观察到数量较多的小血管及分支，较适宜观
察药物对血管生成影响的研究，因此选择 6 d 鸡胚
进行观察研究。实验结果显示，藤梨根高剂量组与
空白组、血清组相比较，有较明显的抑制新血管生成
能力，藤梨根低剂量组与空白组比较有一定的抑制
作用但不显著(P ＜ 0. 01)。
2. 2 藤梨根高低剂量组对 CAM血管面积影响
表 1 显示，藤梨根高低剂量组具有一定抑制血
管生成面积的作用，但差异无统计学意义，血清组和
空白组之间比较差异无统计学意义。
3 讨论
恶性肿瘤被古代医家归属于为积聚、石瘕、癥瘕
等范畴。《诸病源候论》指出:“积聚者由于阴阳不
和，脏腑虚弱，受之于风邪，搏于脏腑之气所谓也。”
《中藏经》中指出，癌瘤等“之所作也，皆五脏六腑蓄
毒不流则生矣，非独因荣卫壅塞而发者也”。认为
脏腑“蓄毒不流”是这类难治性疾病的病机本质，而
瘀血留于局部，即恶血，日久可腐变或溃烂成毒，故
又有“瘀毒”之说。《圣济总录》中有“毒热内壅，则
变为瘀血”的说法。清代医家王清任进一步分析:
“蕴毒在内，烧炼其血，血受炼烧，其血必凝”，遂成
毒瘀。《仁斋直指附遗方》指出:“癌者，上高下深，
岩穴之状，颗粒累垂，毒根深藏。”同样提出了“毒根
深藏”是癌瘤难治的关键。有学者认为这“深藏”的
毒根，就是存在于肿瘤内生长迅速的功能性血管，而
这些血管供应着丰富的血液，促使肿瘤快速增殖。
故目前许多专家认为，肿瘤治疗当采用清热解毒、活
血化瘀等方法。藤梨根具有清热解毒、祛风除湿的
功效，临床广泛用于抗肿瘤治疗，尤对消化道肿瘤如
胃癌、肠癌等疗效显著。在前期小鼠体内抗肿瘤转
移的预实验中我们发现，藤梨根作用后瘤体缩小，显
微镜下观察瘤体内血管减少，由此推测抑制血管生
成可能是其抗肿瘤的机制之一，因此我们通过观察
藤梨根对 CAM血管形成的影响，进一步探讨藤梨根
抑制肿瘤的机理。
表 1 藤梨根含药血清对 CAM血管生成的影响 (珔x ± s)
组 别 例数 CAM血管数目 CAM血管面积(mm2)
空 白 组 8 10. 24 ± 1. 090 12004. 11 ± 3009. 822
血 清 组 10 11． 29 ± 1. 840 11900. 06 ± 2570. 118
藤梨根高剂量组 12 8. 09 ± 0. 899＊＊△△ 10853. 85 ± 2199. 188▲▲
藤梨根低剂量组 12 10. 00 ± 0. 968△▲▲ 11707. 80 ± 2922. 103
注:与空白组比较:* P ＜0. 05，＊＊P ＜ 0. 01，与血清组比较:△P ＜ 0. 05，△△P ＜
0. 01，用药组等剂量比较:▲▲P ＜0. 01
血管生成模型的建立是肿瘤抗血管生成研究必
须的关键性步骤。自 Folkman［2］提出抗血管生成理
论至今，对肿瘤血管形成的机制和抗血管生成药物
筛选等方面的研究已取得较大进展。大量的血管生
成模型已建立，体外模型如内皮细胞的增殖、迁移和
小管形成以及组织模型;体内模型如动物角膜或虹
膜内肿瘤移植模型、皮下气囊模型、颅窗软脑膜血管
模型、兔耳廓和皮肤内移植模型等。鸡胚绒毛尿囊
膜模型相比其他模型具有一定的优势，如鸡胚发育
初期血管与肿瘤细胞的新生血管相似，均表现为内
皮细胞胞浆少，线粒体丰富，毛细血管缺少外周细
胞;而且作为一种天然的免疫缺陷宿主，鸡胚可接受
癌细胞接种和组织的移植;CAM 技术较简便，能耐
受一定范围的温度变化，且价格低廉，故被广泛采
用。本实验结果为中药藤梨根临床抗肿瘤提供实验
依据，值得在此基础上进一步深入研究，如对肿瘤血
管内皮细胞凋亡情况和 VEGF的表达情况等进行研
究，揭示中药抗肿瘤的机理，为临床治疗肿瘤寻找副
作用小的高效中药。
参考文献:
［1］ 李振光，王净净．关于中药血清药理学方法的思考［J］．中国
中医药信息杂志，2002，9(2):5．
［2］ Folkman J． Tumor angiogenesis，therapeutic implications［J］． N
Engl J Med，1971，285(21) :1182-1186．
收稿日期:2013-11-16
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2014 年 3 月第 20 卷第 3 期
March 2014 Vol． 20. No． 3
中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
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